α变形菌纲磁螺菌属TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立
摘要： 目的 建立一种快速有效检测环境中α变形菌纲磁螺菌属细菌的方法.方法 本研究以α变形菌纲磁螺菌属保守且特异的16SrRNA片段为靶序列,化学合成基因序列,制备重组质粒作为磁螺菌属检测的标准品;用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术,针对目的片段基因设计特异性引物和TaqMan荧光探针,进行实时荧光定量PCR检测,运用统计学方法评价该方法的特异性、敏感性及重复性.结果 本实验成功构建了质粒PUC19-QC,引物、探针特异性良好,标准曲线在5.10×10～15.10xl07拷贝数之间具有较好的线性关系,相关系数R2=0.999.该法低可检测到5.10x 10个DNA拷贝数,灵敏度明显高于普通PCR;重复性试验表明,荧光定量PCR检测结果Ct值波动范围较小,Ct值的标准差均小于0.23,表明该法重复性好,可靠性高.析因方差分析表明不同稀释度之间的Ct值差异有统计学意义(F=3 125.305,P＜0.001),三个批次的再现性良好,差异无统计学意义(F=0.057,P=0.945),而浓度分组与时间之间也无交叉效应(F=0.533,P=0.873).结论 本实验所建立的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测技术,能够快速有效地检测α变形菌纲磁螺菌属细菌,且检测结果稳定,受外界条件如时间、气温等影响小.
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NE在预测糖尿病所致大血管病变中的作用
目的 探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)在预测糖尿病大血管病变中的作用及预测价值.方法 选取2016年6月-2017年12月于彭州市人民医院内分泌科收治住院的181例糖尿病未合并大血管病变患者为A组,88例糖尿病合并大血管病变患者为B组,同期选取32名健康体检者作为对照组.采集并比较各组血清NE水平差异,并按是否发生大血管病变为因变量构建Logistic回归模型以筛选糖尿病患者发生大血管病变的危险因素.使用ROC曲线判定不同截断值时曲线下面积的变化.结果 B组NE水平明显高于A组和对照组[(136.76±20.55)μg/L vs.(23.29±2.27)μg/L vs.(21.78±6.79)μg/L],差异有统计学意义(P<0.05),而A组与对照组间比较差异无统计学意义(P>0.05).Logistic分析结果显示,血NE水平(OR=1.96,95％CI:1.21～3.18)与病程(OR=4.08,95％CI:1.57～10.57)均为糖尿病患者并发大血管病变的危险因素.ROC曲线结果显示,NE截断点取8μg/L时曲线下面积取大值0.94,此时灵敏度为96.6％,特异度为90.1％.结论 血NE作为糖尿病患者大血管病变诊断标准的灵敏度、特异度均较高,具有一定的临床价值.
关键词： 糖尿病大血管病变 血中性粒细胞弹性蛋白酶 ROC曲线 -
中山市25472例新生儿听力及耳聋基因联合筛查的临床分析
目的 分析中山地区新生儿耳聋基因携带率,通过对新生儿进行听力筛查与耳聋基因筛查结果比较,为对新生儿进行听力与耳聋基因联合筛查的可行性及必要性提供数据支持和理论依据.方法 25472名新生儿行常规听力筛查,同时行耳聋基因筛查,主要针对GJB2、GJB3、SLC26A4和MTRNR1(12S rRNA)4个主要的非综合征耳聋基因,共20个热点突变进行检测,分析并比较两组筛查结果.结果 25472例新生儿中携带耳聋基因突变总数为265例,占1.04％,确诊听力障碍103例,确诊率为0.40％,其中GJB2基因突变率(5.10‰)高;而通过听力筛查后被诊断为耳聋高危人群57例,占0.23％,确诊为听力障碍38例,确诊率为0.15％,两种筛查方法确诊率比较差异有统计学意义(P<0.05).461例未通过听力复筛的新生儿中耳聋基因携带率为8.68％,25011例通过听力筛查的新生儿中耳聋基因携带率为0.90％,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05).听力筛查与基因筛查结果一致性极低(Kappa=-0.003).结论 在传统耳聋筛查基础上采用新生儿耳聋基因筛查可对听力障碍进行有效预警、提前干预,因此对新生儿进行听力与耳聋基因联合筛查具有极大的临床意义.
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HIV/AIDS患者机会性感染病原菌监测及分析
目的 探讨艾滋病(AIDS)患者机会性感染病原菌及对抗生素的敏感性,为临床早期诊疗和合理用药提供依据.方法 选取某院2015年1月-2017年12月期间共计180例AIDS患者临床资料,回顾性分析机会性感染病原菌分布和药敏结果.结果 共分离出机会性感染病原菌164株,其中革兰阴性菌48株(29.3％),革兰阳性菌40株(24.4％),真菌76株(46.3％).葡萄球菌、沙门菌以及大肠埃希菌是引起感染的主要菌种,其中葡萄球菌和大肠埃希菌各占14.6％,沙门菌占9.8％,药敏结果表现为对喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素、青霉素G、大环类脂类药物耐药率较高.马尔尼菲青霉菌对抗真菌药物敏感性较高,药敏结果显示无明显耐药.结论 加强AIDS患者机会性感染病原菌的流行病学监测,合理选择抗生素是控制感染的重要手段.
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3C疗法在青年糖尿病中的近远期疗效及相关影响因素分析
目的 探讨3C疗法(CGMS:实时动态血糖监测,CSII:胰岛素泵持续皮下输注,Carelink:糖尿病管理软件)对青年糖尿病患者疗效的影响及相关因素.方法 选取2015年1月至2017年12月在惠州市中心人民医院治疗的128例青年糖尿病患者作为研究对象,根据治疗方法不同分为对照组(n=72)和观察组(n=56).对照组给予CSII治疗,观察组给予3C疗法.对比分析两组近期疗效:血糖波动指标、血糖≤3.9 mmol/L曲线下面积(AUC3.9)、血糖达标率、胰岛素使用量和C肽浓度(达标后),远期疗效:糖化血红蛋白(HbA1c)及慢性并发症发生情况.同时采用Logistic回归法分析导致血糖达标率和远期并发症发生率的危险因素.结果 在血糖控制上,除血糖标准差外,两组在平均血糖、平均血糖波动幅度、大血糖波动幅度、AUC3.9和低血糖发生率上差异明显,且具有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,观察组血糖达标率和空腹C肽浓度(达标后)均明显升高,而胰岛素使用量则明显减小,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,观察组HbA1c和慢性并发症发生率明显降低,后者以脑血管意外为常见,且差异具有统计学意义(P<0.05).经Logistic回归分析得知,2 h C肽(治疗前)、AUC3.9和治疗方法是影响青年糖尿病患者血糖达标率的重要因素;而平均病程、治疗方法和治疗前收缩压及胰岛素抵抗指数则是影响其慢性并发症发生率的重要因素.结论 与CSII法比较,3C疗法在提高青年糖尿病患者达标率和降低其慢性并发症发生率上疗效更好,值得推广.
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脑梗死患者血清vaspin、apelin、chemerin与颈动脉斑块性质及预后的关系
目的 探讨脑梗死患者血清vaspin、apelin、chemerin与颈动脉斑块性质及预后的关系.方法 选取129例脑梗死患者为研究对象,120名健康体检者为对照,采用酶联免疫吸附法测定所有受试者血清vaspin、apelin、chemerin水平.采用超声检查脑梗死患者颈动脉斑块,将其分为无斑块组34例、稳定斑块组56例和不稳定斑块组39例,比较各组间三种检测指标水平.利用Rankin量表(mRS)评估脑梗死患者预后,并比较预后不良与预后良好组间三种检测指标水平.采用Logistic回归分析影响脑梗死预后因素.结果 与对照组相比,脑梗死患者组血清vaspin和apelin水平显著降低(P<0.05),chemerin水平显著升高(P<0.05).与无斑块组相比,稳定斑块组vaspin水平降低,chemerin水平升高,但差异均无统计学意义(P>0.05),apelin水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);不稳定斑块组vaspin和apelin水平降低,chemerin水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与稳定斑块组相比,不稳定斑块组vaspin和apelin水平降低,chemerin水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与预后良好组患者相比,预后不良患者血清vaspin和apelin水平显著降低,chemerin水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).Logistic回归分析结果显示,vaspin和apelin是影响脑梗死预后的保护因素(P<0.05),chemerin表达水平升高不是引起脑梗死发病风险增加的独立危险因素(P>0.05).结论 血清vaspin、apelin、chemerin与脑梗死患者颈动脉斑块性质相关,对脑梗死预后判断有重要价值.
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Th17和Tc17细胞在免疫性血小板减少症发病机制中的作用及激素治疗中的意义
目的 探讨辅助性T细胞17(Th17)、细胞毒性T细胞17(Tc17)在免疫性血小板减少症发病过程中的作用机制及激素治疗中的意义.方法 应用流式细胞术检测40例免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者与40名正常人外周血中Th17淋巴细胞、Tc17淋巴细胞占CD3+T淋巴细胞比例,并对比其在ITP患者激素治疗前后的水平变化.结果 与正常对照组比较,ITP患者治疗前外周血Th17淋巴细胞和Tc17淋巴细胞比例均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).ITP患者在激素治疗后Th17淋巴细胞和Tc17淋巴细胞比例均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 ITP患者Th17和Tc17细胞表达升高,经激素治疗后明显降低.Th17和Tc17细胞可能参与了ITP的发病并在激素治疗过程中发挥着重要作用.
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血必净在重症肺炎中的临床疗效
目的 观察在常规药物治疗基础上加血必净治疗重症肺炎的临床疗效.方法 选取重症肺炎患者42例,随机分为血必净组(n=21)和常规组(n=21),两组同时接受常规治疗,血必净组在其基础上加用血必净注射液50 mL,加入0.9％的氯化钠注射液100 mL静滴,每日2次,常规组同时加用等量0.9％生理盐水,疗程均为1周.观察两组患者治疗前及治疗后第3、7天超敏C反应蛋白(hs?CRP)、降钙素原(PCT)及D-二聚体水平,并计算急性生理学与慢性健康状态Ⅱ(APACHEⅡ评分)评分、肺炎严重指数(PSI)评分及氧合指数;同时观察两组患者住ICU时间及治疗费用,并随访28 d病死率.另选取15名健康体检者作为健康对照组.结果 两组患者治疗1周后APACHEⅡ评分、PSI评分、hs?CRP、PCT及D-二聚体水平均下降,7 d后血必净组较常规组下降明显,差异有统计学意义(P<0.05);血必净组氧合指数较常规组升高明显,差异有统计学意义(P<0.05).两组住ICU时间[(10.67±1.39)d vs.(11.24±1.73)d)、治疗费用[(4.48±1.17)万vs.(4.81±1.08)万]及28 d病死率(23.8％vs.33.3％)比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 血必净可降低重症肺炎患者的炎症反应,改善凝血指标,改善病情,但在住ICU时间、治疗费用及28 d病死率方面未表现出明显差异.
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1629例7种呼吸道病毒检测结果分析
目的 分析呼吸道病毒感染情况,为临床提供呼吸道病毒感染的流行特征及致病情况.方法 收集广州医科大学附属第二医院呼吸道病毒检测标本1629例,采用免疫荧光法对标本中腺病毒(AD),呼吸道合胞病毒(RSV),流感病毒A型(FluA),流感病毒B型(FluB),副流感病毒1、2、3型(PIV1、PIV2、PIV3)进行检测,采用SPSS19.0对数据进行统计学分析.结果 1629例标本中阳性病例268例,阳性率为16.5％,其中RSV 115例,占阳性病例的42.9％.全年1-6月、10-12月RSV检出率高,7-9月AD检出率高.阳性病例中0～6岁组阳性率明显高于其他年龄段.男性多于女性,均以RSV居多.结论 呼吸道病毒感染病例中以6岁以下婴幼儿多见,1-6月发病率高,RSV和AD阳性病例多,应尽早预防.
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开放性骨折患者手术部位感染对机体免疫功能及细胞因子的影响
目的 探讨开放性骨折患者手术部位感染对机体免疫功能及细胞因子的影响.方法 研究对象选取武警北京总队医院2015年6月至2017年6月间收治的开放性骨折患者120例,以开放性骨折患者手术后感染患者44例为观察组,未感染患者76例为对照组.采用酶联免疫吸附测定法检测两组T淋巴细胞亚群及NK细胞水平、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、抗血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子1 (SDF1)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白水平,同时对观察组取创面分泌物行细菌培养.结果 44例开放性骨折术后感染患者共分离44株病原菌,其中金黄色葡萄球菌占52.27％,肺炎克雷伯菌占31.81％,大肠埃希菌占11.36％;观察组的T淋巴细胞亚群及NK细胞水平均显著低于对照组,两组差异有统计学意义(P＜0.05);观察组的IL-4、IL-6、IL-10、VEGF、SDF1及TNF-α蛋白水平均显著高于对照组,两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 开放性骨折患者术后感染可引起患者免疫功能的降低,此外血清白细胞介素因子及VEGF、SDF1及TNF-α水平可作为诊断及判断预后指标.
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营养、运动疗法对衰弱综合征合并糖尿病患者的治疗效果分析
目的 探讨衰弱综合征合并糖尿病(DM)患者予以营养、运动疗法联合常规药物治疗后对血糖、胰岛素、血脂水平的影响.方法 85例衰弱综合征合并DM患者随机分为研究组(n=43)和对照组(n=42),对照组给予常规药物治疗,研究组同时给予营养、运动疗法综合干预.治疗前后检测血糖、胰岛功能、血脂指标水平及评估衰弱综合征症状.结果 治疗后研究组空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2 hFPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、C-肽(C-P)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)分别为[(4.36±1.34) mmol/L、(7.32±1.41) mmol/L、(6.54±1.79)％、(1.97±0.60) ng/L、(1.36±0.42) mmol/L、(4.50±0.82) mmol/L、(2.64±0.19) mmol/L],显著低于对照组[(5.47±1.91) mmol/L、(8.27±2.20) mmol/L、(7.43±1.60)％、(2.08±0.51)ng/L、(1.59±0.35) mmol/L、(5.39±0.69) mmol/L、(3.14±0.21) mmol/L];空腹胰岛素(INS)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)分别为[(35.29±5.66)μIU/mL、(1.21±0.19)mmol/L],显著高于对照组[(31.92±6.71) μIU/mL、(1.1 l±0.17)mmol/L],差异均有统计学意义(P＜0.05).Fried衰弱症状学量表评分中,研究组5项指标阳性率下降幅度显著大于对照组(P＜0.05).结论 营养、运动疗法联合常规药物治疗衰弱综合征合并DM,可有效改善患者糖脂代谢、胰岛功能及减轻衰弱症状.
