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神经纤维快速染色改良法

毕彦忠;金晓明;陈福来;黄琪;罗英铎

摘要: 神经纤维的染色方法很多,技术操作也比较复杂,特别是镀银法,若操作不当,不易成功.本染色法是在镀银法原理的基础上,加以改进而建立的神经纤维快速染色法.此方法快捷简便易行可靠,光镜下的神经纤维分布和形态改变清晰可见.本染色法目前尚无文献报导.1.材料和方法 1.1 材料:大白鼠周围神经、腓神经.主要试剂:硝酸银.由北京化工厂提供.1.2 方法:1)所需试剂①0.5%酸性高锰酸钾水溶液50ml,0.5%硫酸水溶液50ml,临用前等量混合.②2.5%铁明矾水溶液:硫酸铁胺2.5g,蒸馏水 100ml.③胺银溶液:以四张组织切片的用量为例.取浓氨水2滴,滴入洁净的50m l烧杯中,然后逐滴向氨水中滴加10%硝酸银,边滴边摇动烧杯,当胺银混合液微呈乳白色的半透明状态下即可使用,无需滤过.2)染色步骤:①周围神经取材后经10%甲醛固定 3 ~4天,制备石蜡切片(8μm);②切片脱蜡,入流水;③酸化高锰酸钾氧化10min ,流水洗三次;2.5%草酸漂白2min,流水洗三次;④2.5%铁明矾媒染5min ,流水洗,蒸馏水洗二次;⑤用滴管将胺银滴加在组织片上,约5~8sec,弃去染液, 将组织切片立即放入10%甲醛溶液中还原10~15sec,在光镜下见组织切片呈棕色为止,流水洗三次;⑥放入0.2%氯化金液中分化1~2min,流水洗;⑦0.2%亮绿复染,流水洗二次;⑧脱水透明,中性树胶封固.2.结果神经纤维呈黑色,胶原纤维淡绿色,背景绿色.3.讨论神经纤维的嗜银性很强,经高锰酸钾氧化后,再经铁明矾媒染剂促染,使胺银液重大银盐沉积于神经纤维处,经过还原剂作用,将银离子还原为黑色的金属银而显现出来. 用氯化金将神经纤维中的未反应出来的银盐除掉.神经纤维镀银法成败的关键是胺银液的配制是否恰到好处.通常配制方式都是向20%硝酸银液中滴加氢氧化铵,形成沉淀,再加氢氧化铵使之刚溶即停,这对经验不足的操作者如果掌握不准,染色就会失败.本染色法与其它神经纤维的镀银法所不同之处,就是胺银溶液的配制方式加以省略和简化.与之相反的是向浓氨水中加硝酸银,这样更便于掌握和操作.这种染色法的优点是操作简单容易掌握,省药品,省时间,光镜下的神经纤维清晰可见,层次分明,没有多余的银颗粒污染现象.染色效果优于其它的神经纤维染色法.注意事项:所用染色材料必须洁净;当组织再还原中呈棕黄色即可.

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