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抗原免疫对外周淋巴器官中细胞凋亡的影响

顾云娣;钟翠平;王燕平

摘要: 日的:观察抗原免疫刺激后外周淋巴器官中细胞凋亡的情况.方法:用完全佛氏佐剂免疫B10.A小鼠,21天后解剖,取出腹部淋巴结,制成冰冻切片.采用TUNEL原位染色法,步骤如下:1.制备冰切片,过夜;2.用4%多聚甲醛(PBS,pH7.4)固定10分钟,然后PBS洗30分钟;3.用3%H2O2(甲醇稀释)封闭,室温下10分钟,然后PBS洗30遍;4.用0.1%Triton X-100(0.1%柠檬酸钠)在冰上(4℃)作用2分钟 ,然后PBS洗2遍;5.擦干切片,每张加50μl TUNEL反应混合液,置于湿盒中放于37℃反应30分钟,然后PBS洗3遍;6.擦干切片,每个样品加50ul POD,置于湿盒中放于37℃反应30分钟,然后P BS洗3遍;7.每个样品加50-100ul DAB底物混合物((DAB:H2O2:Tris =1:1:1);8.室温下孵育10分钟,然后PBS洗3遍;9.脱水,封片,拍照.10.同时,用不加末端脱氧核糖核酸转移酶作为阴性对照.结果:切片中出现核深棕色的为阳性结果,即凋亡细胞.正常淋巴结中已经存在凋亡细胞, 而用抗原免疫后的淋巴结中凋亡细胞的数量明显增多.结论:活化激活的淋巴细胞凋亡是调节免疫反应的一种主要机制.

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