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  • 二氢生物蝶呤还原酶基因启动子核心调控区域的定位及研究

    作者:刘蓉蓉;玉敏;赵海玲;张浩军;孙斯凡;李平

    目的:前期结果表明 QDPR 参与糖尿病肾病的发生发展。本研究对 QDPR 基因启动子核心调控区域定位,分析其转录调控功能。方法:构建含有大鼠 QDPR 基因翻译起始位点上游2092 bp 序列的萤火虫萤光素酶报告基因重组质粒。生物信息学预测潜在的核心启动子区域,并构建该区域多个片段缺失的萤火虫萤光素酶报告基因重组质粒。分别瞬时转染 HEK293T 细胞,通过双萤光素酶报告基因活性分析,定位 QDPR 基因启动子的核心调控序列。结果:与-2092~-1序列相比,缺失 QDPR 基因上游-529~-116序列的萤光素酶活性只有原来的1%(P ﹤0.01),而仅保留-529~-1序列的萤光素酶活性是原来的64%(P ﹤0.05)。将 QDPR 基因上游-529~-116序列逐段缺失后发现,分别缺失-529~-429,-428~-250,-141~-116三段序列的萤光素酶活性都显著升高(P ﹤0.01),而缺失-249~-142序列的萤光素酶活性则显著下降(P ﹤0.05)。结论:大鼠 QDPR 基因的核心启动子可能位于翻译起始密码子上游-529~-116区域内,该区域内存在多个转录因子 Sp1的结合位点,可能是 QDPR 基因潜在的正性调控区和负性调控区。

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