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  • 日本血吸虫酪蛋白激酶Ⅱβ亚基的序列分析

    作者:彭寨玉;余新炳;吴忠道;徐劲;吴德;李孜

    目的发现并克隆日本血吸虫新基因.方法对已获得的日本血吸虫表达序列标签(EST)进行同源性分析,识别血吸虫新基因;根据EST设计引物,用3′RACE从mRNA中扩增获得新基因全长,用生物信息学技术对获得的编码基因进行结构与功能分析,将新基因的完整编码阅读框克隆入原核表达载体pGEX-4T-1.结果用3′RACE获得一个EST的3′端所缺序列,得到完整编码阅读框,其开放阅读框(ORF)654bp,编码217个氨基酸.利用生物信息学技术确定其为日本血吸虫酪蛋白激酶Ⅱβ亚单位的编码基因.重组质粒经双酶切及测序鉴定,证明日本血吸虫CKⅡβ原核表达质粒构建成功.结论扩增并成功克隆日本血吸虫酪蛋白激酶Ⅱβ亚单位编码基因的全长cDNA,为进一步的功能研究打下基础.