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超低温储存文献资料
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来源于人胚纹状体区神经干/祖细胞的培养、冻存及鉴定
目的 分离人胚胎纹状体组织的神经干/祖细胞,运用细胞培养上清液作为冻存液和贴壁法培养扩增、合理的冻存密度及有效的复苏时间,在体外建立稳定培养、保存体系,给中枢神经系统疾病的治疗提供技术支持.方法 将来源于胚胎的纹状体神经干/祖细胞,利用无血清培养基进行体外培养扩增.采用细胞培养上清液作为冻存液,冻存密度为5×106/ml～5×107/ml,分别复苏冻存1、3、6个月的细胞各3支,并用台盼蓝染色计数,计算细胞存活率.将此细胞传代培养p3、p9、p15、p21,用Nestin免疫组化进行化学染色鉴定.结果 应用贴壁培养法细胞能够稳定传代p21以上,冻存1、3、6个月后,细胞存活率可达87％左右,仍然保持生长分化能力,Nestin表达阳性率为85％以上.结论 本方法培养人胚胎纹状体神经干/祖细胞能传代扩增、低温保存,为中枢神经系统疾病细胞治疗研究提供技术依据.
