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单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1) 载体文献资料
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单纯疱疹病毒Ⅰ型基因治疗载体的快速构建
背景:单纯疱疹病毒Ⅰ型载体因具有独特的优点目前被广泛应用,但其构建尚缺乏一种快速有效的方法.目的:利用Cre/Loxp 高效重组系统构建单纯疱疹病毒Ⅰ型载体.方法:分离单纯疱疹病毒HSV-1,将含Cre 重组酶的c66-SV40-cre 质粒转染Vero 细胞,构建一株带有Loxp 位点的重组HSV-1 框架载体HSVLoxp.构建穿梭载体pShuttle- SV40-Cre-Loxp-IRES 及重组单纯疱疹病毒Ⅰ型载体HSV-GDNF,用HAT 培养基筛选出阳性毒株后用GDNF 引物做PCR 鉴定,扩增培养后测定滴度.结果与结论:成功构建pHV-TK-GFP 质粒,并在Vero细胞内发生重组,分离出缺失了Us3基因的重组病毒HSVtk-Loxp-GFP01.成功构建HSV-1 框架载体HSVLoxp 及穿梭载体pShuttle-SV40-Cre-Loxp-IRES,成功获得GDNF 基因,并将其转移到了HSV-1 基因组上,成功构建了表达GDNF 的单纯疱疹病毒HSV-1 载体,测定其滴度约为2.25×106 IU/mL.
