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退行性变椎间盘的细胞培养
背景:目前尚未见成熟的成年人退行性变椎间盘的细胞培养模型报道.目的:采用组织块细胞培养法及酶消化细胞培养法进行成人退行性变椎间盘细胞培养的可行性.设计、时间及地点:对比观察的细胞学实验,于1998-12/1999-04在青岛大学医学院山东省创伤骨科研究所完成.材料:5份标本来源于青岛大学附属医院骨科确诊为退行性椎间盘病变患者.方法;①组织块法培养椎间盘细胞:将组织块剪碎至小于1 mm×1 mm×1 mm,牢固敷贴于培养瓶底壁上;第1份标本加入含青霉素100 μ/mL,链霉素100 mg/L,体积分数为0.1的胎牛血清的HAMF12培养基,第18天培养基中胎牛血清的体积分数更换为0.2继续培养.第2份标本初始胎牛血清体积分数为0.2,其余条件与第1份相同.第50天用2.5 g/L的胰蛋白酶溶液对细胞进行消化传代.②酶消化法培养椎间盘细胞:将组织块剪碎加入2.5 g/L的胰蛋白酶溶液消化髓核30 min,离心去除上清液;消化的组织加入2 g/L的胶原酶,静止消化4 h;离心直至胶原酶完全清洗干净;取离心沉淀物置于培养瓶中;第1份标本加入足量的含青霉素100 U/mL,链霉素100 mg/L,含体积分数为0.1胎牛血清的HAMF12培养基,第10天培养基中胎牛血清的体积分数更换为0.2继续培养;第2,3份标本初始胎牛血清体积分数为0.2,其余条件与第1份相同.第50天用2.5 g/L的胰蛋白酶溶液对细胞进行消化传代.主要观察指标:细胞的传代情况,细胞的形态学、超微结构观察.结果:①在生长及增殖过程中,体积分数为0.2胎牛血清培养细胞增殖速度明显高于体积分数为0.1胎牛血清时的速度.②髓核软骨细胞多呈星形或多角形,细胞核偏于细胞的一侧而贴近细胞膜,来源于纤维环的成纤维细胞呈梭形,细胞核位于梭形细胞的正中央,细胞的纤丝较长.③来源于髓核组织的细胞透射电镜下可见两类形态、结构截然不同的细胞:脊索细胞和软骨样细胞.结论:两种方法均能获得大量的退行性变椎间盘细胞,并成功地进行细胞传代.
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成人退行性变椎间盘髓核细胞的体外培养研究
目的:采用组织块细胞培养法或酶消化细胞培养法进行成人退行性变椎间盘细胞培养,并探讨不同浓度胎牛血清对成人髓核细胞体外培养的影响.方法:采用组织块细胞培养法与酶消化细胞培养法培养成人退行性变椎间盘细胞,分析两种方法是否能成功获得细胞,并比较不同浓度胎牛血清对成人髓核细胞体外培养的影响.结果:采用组织块细胞培养法及酶消化细胞培养法两种方法都可获得原代髓核细胞;髓核细胞在胎牛血清20%浓度组的开始贴壁时间、50%细胞贴壁时间、90%细胞贴壁时间均短于15%浓度组及10%浓度组(P均＜0.01).结论:两种细胞培养方法均成功建立髓核细胞体外培养模型;20%的胎牛血清浓度相比15%及10%浓度胎牛血清更有利于成人退变髓核细胞的体外培养.
