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纳米晶羟基磷灰石/胶原骨与骨髓间充质干细胞的相容性
背景:组织工程支架材料表面的微观和亚微观结构对细胞的黏附与生长有很重要的影响.利用纳米技术和三维造孔技术制备的纳米晶羟基磷灰石,胶原骨模仿了天然骨的成分与微结构特征.目的:观察体外培养的人骨髓问充质十细胞与纳米晶羟基磷灰石,胶原骨的细胞相容性.设计、时间及地点:单一样本观察,于2005-0912006-12在江苏大学医学技术学院完成.材料:纳米品羟基磷灰石,胶原骨由清华大学材料科学与工程系研制.人骨髓间充质干细胞由健康成年志愿者自愿捐献,受试者对实验内容知情同意.方法:全骨髓法体外培养骨髓间充质干细胞,应用成骨诱导荆(地塞米松,维生素C、β-磷酸甘油、碱性成纤维细胞生长因子)诱导向成骨细胞表形转化.将第3代骨髓间充质干细胞与纳米晶羟基磷灰石,胶原骨复合培养14 d.主要观察指标:通过碱性磷酸酶组织化学染色、Von Kossa染色鉴定诱导培养的成骨细胞的细胞学特性.通过倒置显微镜、扫描电镜观察细胞生长及其在纳米晶羟基磷灰石/胶原骨卜的生长情况.结果:原代培养的骨髓细胞增殖迅速.10~12 d左右即可稳定传代,传代细胞7-9 d即可传代.经诱导培养的细胞碱性磷酸酶组织化学染色阳性,Von Kossa染色阳性,可见钙化的基质沉积,呈现典型的成骨细胞形态和生物学特征.构建的骨髓间充质下细胞与纳米晶羟基磷灰石,胶原骨共培养模型中,细胞可在纳米晶羟基磷灰石/胶原骨表面良好贴壁.复合培养8 d.分布于支架材料卜的细胞大量增殖、分泌细胞外基质.复合培养14 d,人量细胞在材料表面和孔隙中生长,细胞之间广泛存在突起连接.结论:纳米晶羟基磷灰石,胶原骨适合种子细胞的贴附、生长和增殖,细胞相容性良好.