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成骨细胞自噬文献资料
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雌激素受体抑制下氯化锂对成骨细胞AKT-mTOR通路的影响
背景:氯化锂可以通过Wnt通路激活来治疗骨质疏松,并能激活诱导骨细胞自噬,推测提高氯化锂在Akt,mTOR磷酸化表达可以作为提高成骨细胞分化的作用机制之一.目的:分析雌激素受体抑制下氯化锂对大鼠成骨细胞AKT-mTOR通路作用机制.方法:SPF级出生3 d的SD乳鼠,购买于黑龙江中医药大学动物实验中心.麻醉下分离乳鼠颅骨成骨细胞,采用酶消化法和茜素红染色法获得和鉴定成骨细胞.将成骨细胞随机分为空白组(正常培养细胞)、抑制剂组(ICI182780)、治疗组(氯化锂+ICI182780).倒置显微镜下观察细胞形态;加入不同浓度的氯化锂(0,1,2,5 nmol/L)处理细胞24 h,采用CCK-8检测各组细胞增殖情况;采用茜素红染色及碱性磷酸酶活性检测成骨细胞分化情况;Western blot法测定成骨细胞中p-AKT,p-mTOR的表达.结果与结论:①倒置显微镜下观察细胞多为单核、多边形及梭形,局部有细胞密集的细胞团;②不同浓度的氯化锂都能对成骨细胞增殖产生促进作用,在一定范围内随着氯化锂浓度的增加促进作用逐渐增强;③与空白组比较,抑制剂组成骨细胞矿化能力明显降低,与抑制剂组比较,治疗组成骨细胞矿化结节能力明显增加;④与空白组比较,抑制剂组中碱性磷酸酶活性明显降低,与抑制剂组比较,治疗组中碱性磷酸酶活性明显增加;⑤与空白组比较,抑制剂组中细胞p-AKT,p-mTOR蛋白表达明显降低,与抑制剂组比较,治疗组中p-AKT,p-mTOR蛋白表达显著增加;⑥结果说明,雌激素受体抑制下氯化锂可以通过激活AKT-mTOR通路促进成骨细胞增殖分化.
