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甲氨喋呤长循环脂质体对人骨肉瘤细胞的体外抗瘤活性
背景：脂质体作为一种新型给药系统，具有不良反应小、无免疫原性和可生物降解等优点，将甲氨喋呤包载入脂质体中可显著降低药物毒性，改善药物抗肿瘤效果。
目的：制备甲氨喋呤长循环脂质体，考察其对人骨肉瘤细胞MG-63的抗瘤活性。
方法：采用薄膜分散法制备传统甲氨喋呤脂质体，后插入法制备甲氨喋呤长循环脂质体(甲氨喋呤初始质量浓度分别为9.1，1.82，0.364 g/L)，分别采用超速离心法、葡聚糖凝胶G-10微柱离心法和葡聚糖凝胶G-50微柱离心法去除甲氨喋呤长循环脂质体未包载的游离药物，对3种方法纯化后脂质体的回收率、粒径、形态、包封率及药脂比等理化性质进行表征。分别以0，1，5，25 mg/L 甲氨喋呤长循环脂质体(选择超速离心法与葡聚糖凝胶G-50微柱离心法纯化的脂质体)和游离甲氨喋呤稀释液培养人骨肉瘤细胞MG-63，24，48 h后采用MTS法检测细胞毒性。
结果与结论：①甲氨喋呤长循环脂质体的粒径在200 nm左右，为均匀的球形或近球形；②回收率实验结果显示，葡聚糖凝胶G-50微柱离心法是合适的甲氨喋呤长循环脂质体纯化方法，具有回收完全和快速的优点；③甲氨喋呤初始质量浓度相同时，超速离心法、葡聚糖凝胶G-10微柱离心法纯化的脂质体包封率与药脂比明显低于葡聚糖凝胶G-50微柱离心法纯化的脂质体；④体外细胞毒性实验表明，在同质量浓度条件下，甲氨喋呤长循环脂质体的细胞毒性远高于游离甲氨喋呤，葡聚糖凝胶G-50微柱离心法纯化的甲氨喋呤长循环脂质体细胞活性普遍比超速离心法纯化的脂质体细胞毒性高；⑤结果表明，甲氨喋呤长循环脂质体对于人骨肉瘤细胞具有较强的体外抗瘤活性。 -
miR-335靶向Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移的实验研究
背景与目的：微小RNA(microRNA，miRNA)是一类小分子内源性RNA，主要在转录后水平调节靶基因的表达。microRNA-335(miR-335)作为一种肿瘤抑制因子，参与了多种人类肿瘤的发生、发展过程。本研究旨在探讨miR-335是否靶向抑制Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(Rho associated coiled-coil forming protein kinase，ROCK1)基因的表达，并以此调控人骨肉瘤细胞MG-63侵袭及转移。方法：理论预测并通过荧光素酶基因报告验证miR-335与ROCK1基因的3'-非翻译区(untranslated region，UTR)的特异性结合作用；real-time PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别从基因和蛋白水平检测miR-335对ROCK1表达的负性调控作用；Transwell小室法检测miR-335过表达及下调ROCK1表达后MG-63侵袭及转移能力的变化。结果：Targetscan预测显示，miR-335与ROCK13'-UTR存在结合位点。荧光素酶基因报告实验结果显示，miR-335 mimic和ROCK13'-UTR能够靶向结合；miR-335在MG-63细胞中低表达，ROCK1则呈高表达。Western blot检测结果显示，转染miR-335 mimic或转染ROCK1 siRNA后ROCK1的蛋白表达减少。Transwell小室法检测结果显示，过表达miR-335或下调ROCK1后穿过基膜的细胞数目明显下降。结论：miR-335能特异性结合于ROCK1基因的3'-UTR并下调ROCK1的表达，抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移。
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工频磁场对不同细胞密度人骨肉瘤细胞MG-63体外增殖的影响
目的 研究工频磁场对不同细胞密度人骨肉瘤细胞MG-63体外增殖的影响,为揭示磁场所致生物学效应的作用机制提供实验依据.方法 在某一细胞密度下(0.90×104个/ml),用不同磁感应强度(1 mT、2 mT、3 mT、4 mT)的工频磁场对MG-63细胞进行体外辐射,然后改变细胞密度进行重复实验(细胞接种密度分别为0.95×104个/ml、1.00×104个/ml、1.10×104个/ml和1.50×104个/ml).完成磁场辐射处理后,采用四唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖水平.结果 磁场对MG-63细胞的增殖有明显的诱导效应,不同细胞密度所对应的磁效应明显不同,其中2 mT磁刺激组的增值诱导效应显著.结论 工频磁场对MG-63细胞体外增殖的影响不仅与磁场强度有关,也与细胞密度密切相关.
关键词： 工频磁场 人骨肉瘤细胞MG-63 增殖 细胞密度 -
人参皂苷 Rh2对人骨肉瘤细胞 MG－63凋亡的影响
目的：探讨人参皂苷Rh2对人骨肉瘤细胞MG－63凋亡的影响，并初步探讨可能的分子机制。方法：采用流式细胞术Annexin V－PI双染法和MTT法检测MG－63细胞的凋亡变化；免疫印迹法检测Bcl－2、Bax、Cyt C和激活型caspase－3的蛋白水平。结果：流式细胞术和MTT法结果显示人参皂苷Rh2呈浓度依赖性促进MG－63细胞的凋亡。免疫印迹法结果表明，与空白对照组相比，给药组细胞Bax的蛋白表达显著增加，Bcl－2的蛋白表达显著减少，Bcl－2／Bax比值减少；线粒体中Cyt C蛋白表达显著减少，而胞浆中表达显著增加；激活型caspase－3蛋白水平显著增加（P＜0．05）。结论：人参皂苷Rh2呈浓度依赖性促进MG－63细胞的凋亡，其凋亡过程可能与调控线粒体凋亡通路相关蛋白有关。
关键词： 人参皂苷rh2 人骨肉瘤细胞MG-63 细胞凋亡
