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不同刺激因子对脐血干/祖细胞体外增殖影响的比较
背景:目前细胞因子支持的脐血体外扩增是安全性较高、有可能运用于临床的方法之一.目的:比较白血病抑制因子、白细胞介素6及脂多糖对脐血干,祖细胞体外增殖的影响.设计、时间及地点:细胞学体外对照实验,于2003-08/2004-05在广东医学院附属医院中心实验室完成.材料:10例正常脐血标本取自广东医学院附属医院妇产科及湛江市妇幼保健院妇产科,白血病抑制因子为达科为试剂公司产品,白细胞介素6为晶美试剂公司产品,脂多糖由广东医学院附属医院李延平教授自制.方法:密度梯度法体外分离培养脐血单个核细胞,应用磁分选器和单克隆抗体免疫磁珠(阳性)分选法提取脐血CD34+细胞.建立液体培养体系,为含体积分数为40%的胎牛血请、20 g/L牛血清白蛋白、20 μg/L粒巨集落刺激因子、20 μg/L干细胞因子、20 μg/L白细胞介素3的RPMI 1640培养液.取2×108 L-1脐血CD34+细胞,加入配制的液体培养体系50 μL,设立8组:第1组仅加入RPMI 1640作为对照,第2～4组分别单独加入脂多糖、白血病抑制因子、白细胞介素6,第5～7组分别加入脂多糖、白血病抑制因子、白细胞介素6的两两混合液,第8组加入3种刺激因子的混合液,上述各组脂多糖、自血病抑制因子、白细胞介素6的终浓度分别为10 U/mL,10 μg/L,10 mg/L.主要观察指标:MTT法测定不同刺激因子在液体培养体系中对脐血CD34+细胞增殖的影响.结果:培养3d后与对照组比较,单用白血病抑制因子对脐血CD34+细胞具有促增殖作用(F=3.33,P＜0.01),单用脂多糖或白细胞介素6的效果均不显著(F=2.14,1.83.P＞0.05):刺激因子两两联用及3种刺激因子联用时,对脐血CD34+细胞均具有促增殖作用(F=3.54～4.06,P均<0.01),且3种刺激因子联用时的促增殖效果尤为显著.结论:在特定的液体培养体系中,单独使用白血病抑制因子可明显促进脐血干,祖细胞体外增殖,联合情况下白细胞介素6、脂多精与白血病抑制因子具有促增殖协同作用.
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严重联合免疫缺陷小鼠脐血移植后移植物抗宿主病的初探
目的 观察SCID鼠在人脐血干/祖细胞移植后免疫功能的变化,探讨移植后移植物抗宿主病(GVHD)的发生情况.方法 采集足月健康胎儿新鲜脐血,以6%HES+NH4 CL破红细胞液法分离人脐带血有核细胞.按随机原则将SCID鼠分为A、B、C三组,每组各8只:A组为脐血移植免疫功能重建、无肿瘤组;B组为脐血移植免疫功能重建、荷瘤组;C组为未重建免疫功能(免疫缺陷)、荷瘤组.A、B组分剐经尾静脉程序移植(分5次),注入人脐血有核细胞(总量5×107),两组小鼠移植前都给予低剂量的环磷酰胺(150mg/kg),并连续使用甲基强的松龙1周(自20mg/kg逐渐减量至5mg/kg)作为预处理.C组为未移植对照组.观察各组小鼠免疫功能的变化及GVHD的发生情况.结果 (1)脐血移植后第3周即可在SCID小鼠外周血测得人IgG,第4周即出现人源性CD3+细胞并随着时间的延长其数值增加;(2)在观察期间SCID小鼠无腹泻、厌食、脱毛,皮疹、体重减轻、生长落后等表现,病理检查均未见明显GVHD的特征.结论 人脐血程序移植加低荆量的环磷酰胺方案可替代照射预处理成功地在SCID鼠体内建立类似人类的细胞和体液免疫,并有效地预防GVHD的发生.
