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脱氮微生物文献资料
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Cd1-型亚硝酸盐还原酶脱氮工程菌的构建与表达
目的 用基因工程技术将铜绿假单胞菌PAO1中nirS基因定向克隆至表达载体pQE-30上,使nirS基因得到高效表达.方法 根据GenBank公布的nirS碱基序列和表达载体pQE-30的多克隆位点设计引物,以铜绿假单胞菌PAO1的基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增目的 片段nirS;之后经过BamHⅠ和HindⅢ双酶切,定向克隆到pQE-30上,化学转化DH5α,构建含有重组质粒的转化子pQE30-nirS-DH5α;经酶切和测序鉴定,扩增产物的碱基序列与GenBank公布的序列完全吻合,再将重组质粒pQE30-nirS转化表达菌株SG13009构建脱氮基因工程菌pQE30-nirS-SG13009(PNS).后用SDS-PAGE(IPTG浓度:0.05 mmol/L;诱导温度:25 ℃;诱导时间:2～3 h)和His-tag in-gel Stain鉴定cd1-型亚硝酸盐还原酶的分子量与特异性.结果 构建了高效表达cd1-型亚硝酸盐还原酶的脱氮基因工程菌PNS.结论 Cd1-型亚硝酸盐还原酶能够在脱氮基因工程菌PNS中得到正确和高效的表达.
关键词： Cd1-型亚硝酸盐还原酶 脱氮微生物 同步硝化反硝化 基因工程
