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一种鉴别临床常见致病性葡萄球菌方法的建立与初步评价
目的 建立一种鉴别临床常见致病性葡萄球菌的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法.方法 采用经全自动微生物鉴定系统和分子生物学方法准确鉴定的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌各3株,提取细菌DNA,PCR扩增tuf基因,扩增产物AluI、HifI双酶切后进行琼脂糖凝胶电泳,分析不同葡萄球菌酶切后带型的差异.收集临床分离葡萄球菌142株,采用建立的PCR-RFLP对其进行分类鉴别,随机选择分类鉴别的葡萄球菌各20株,PCR扩增16S rDNA,扩增产物测序,将结果与GenBank数据库进行比对,初步评价该方法的准确性.结果 金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌,溶血葡萄球菌均能扩增出长668 bp DNA片段.扩增产物经AluI、HifI双酶切后电泳条带不同,金黄色葡萄球菌出现三条带(108 bp/192 bp/217 bp),表皮葡萄球菌出现两条带(192 bp/304 bp),溶血葡萄球菌出现两条带(192 bp/217 bp).PCR-RFLP结果显示,142株葡萄球菌中金黄色葡葡球菌、表皮葡葡球菌和溶血葡葡球菌分别为67、29和46株.随机挑选的20株不同种葡萄球菌16S rDNA测序结果与GenBank数据库对应序列的相似性均＞99％,说明建立的PCR-RFLP方法能准确区分三种常见葡萄球菌.结论 PCR-RFLP能准确鉴别临床常见的致病性葡萄球菌,为葡萄球菌病的分子诊断奠定了基础.
