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Dickkopf-1、LRP-5和LRP-6基因在卵巢上皮性癌中的表达及意义
目的 探讨Dickkopf-1(DKK-1)、低密度脂蛋白受体相关蛋白-5(LRP-5)和低密度脂蛋白受体相关蛋白-6(LRP-6)在卵巢上皮性癌中的表达和临床意义.方法 2002年1月至2008年4月在中国医科大学附属盛京医院采用RT-PCR的方法检测56例卵巢上皮性癌、35例卵巢上皮性良性肿瘤和12例正常卵巢组织中DKK-1mRNA、LRP-5mRNA和LRP-6mRNA的表达情况,分析3种基因与各临床病理参数的关系及其在癌组织中的表达相关性.结果 DKK-1mRNA,LRP-5mRNA和LRP-6mRNA在卵巢上皮性癌组织中的表达强度分别为0.90±0.32,0.71±0.27,0.80±0.28;明显高于卵巢上皮性良性肿瘤组织0.58±0.23,0.58±0.29,0.54±0.22和正常卵巢组织0.36 ±0.29,0.40±0.25,0.32 ±0.27(P均<0.0001).DKK-1 mRNA、LRP-5mRNA和LRP-6mRNA表达强度与临床分期(P=O.003～0.020)和病理分级(P=0.000～0.028)密切相关.DKK-1mRNA与LRP-5mRNA和LRP-6mRNA在卵巢上皮性癌中的表达强度存在统计学相关性(r=0.341,P<0.0001;r=0.815,P<0.0001).结论 DKK-1、LRP-5和LRP-6 mRNA在卵巢上皮性癌中表达增强,其表达强度存在相关联系.DKK-1、LRP-5和LRP-6在卵巢上皮性癌的发生、发展过程中起重要作用.
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人源Dickkopf-1真核表达质粒的构建
目的 构建人源Diekkopf-1(DKK-1)基因的真核表达质粒,为进一步探讨DKK-1的生物学功能奠定基础.方法 Trizol法从人新鲜胎盘组织中抽提总RNA,RT-PCR法反转录为cDNA,以cDNA为模板扩增人源DKK-1的基因序列,将真核表达载体pcDNA3.1和DKK-1的PER产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pcDNA3.1-DKK-1,转化至大肠杆菌后经菌落PER、NHe I和EcoR I双酶切及测序鉴定.结果 RT-PCR法从人胎盘中扩增出816 bp大小的目的 片段,重组质粒转化至大肠杆菌后菌落PER同样扩增出816 bp大小的目的 片段,NHe I和EcoRI双酶切重组质粒能切出两条目的 条带,测序后与C,enbank中DKK-1的cDNA对比,证明DKK-1的基因序列完全正确.结论 成功构建了pcDNA3.1-DKK-1重组质粒,为研究人源DKK-1的功能及其在细胞系中的作用奠定了基础.
关键词： Diekkopf-1 重组质粒 测序 -
亚低温对局灶性脑缺血再灌注大鼠Dickkopf-1表达的影响
目的 研究亚低温对局灶性脑缺血再灌注大鼠Diekkopf-1(Dkk-1)表达的影响,进一步探讨亚低温脑保护作用的机制.方法 线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,分假手术组、假手术+亚低温组、模型组及模型+亚低温组.应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blotting和免疫组化技术分别检测再灌注后不同时相缺血侧皮质Dkk-1 mRNA和蛋白水平的表达.结果 假手术组、假手术+亚低温组Dkk-1 mRNA及蛋白有少量表达.脑缺血2 h再灌注3 h,Dkk-1 mRNA和蛋白表达开始增加,随再灌注时间的延长表达量逐渐增加,至再灌注24 h达高峰,然后明显减少,再灌注72 h时仍高于假手术组的水平.每一相同再灌注时间点,模型+亚低温组Dkk-1 mRNA和蛋白表达量均明显低于模型组.结论 Dkk-1可能参与了局灶性脑缺血再灌注损伤的病理过程.亚低温可通过抑制Dkk-1的表达而发挥一定程度的脑保护作用.
关键词： 亚低温 脑缺血 再灌注 Diekkopf-1
