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血管生成因子对先天性食管闭锁大鼠肺发育的影响
目的 研究血管生成因子Efnb2和Ephb4在先天性食管闭锁并食管气管瘘(esophageal atresia and tracheoesophageal fistula,EA-TEF)大鼠肺组织中的表达情况,探讨血管调控因子Efnb2及其受体Ephb4对EA-TEF大鼠肺组织发育的影响.方法 24只雌性Wistar大鼠随机分成实验组(EA-TEF组)和对照组(CON组),每组各12只,妊娠第7～9天实验组给予阿霉素1.75 mg/kg腹腔灌注建立EA-TEF大鼠模型,分别在胚胎第15天(El5)、18天(El8)和21天(E21)剖宫产取胎鼠肺组织,采用Q-PCR和免疫组织化学检测Efnb2、Ephb4的表达情况.结果 (1)两组胎鼠肺发育过程中Efnb2 mRNA与Ephb4的变化趋势基本一致,小管期(El8)含量高,囊泡期(E21)降低并恢复至假腺体期(El5)水平.胎肺小管期Efnb2mRNA表达水平EA-TEF组(50.65±12.65)明显高于对照组(23.63±11.31) (P ＜0.05),假腺体期和囊泡期两组比较无统计学意义;假腺体期Ephb4 mRNA表达水平EA-TEF组(4.32±2.88)明显高于对照组(1.01±0.19) (P ＜0.05),小管期和囊泡期两组无统计学意义.(2)胎肺不同发育时期,Efnb2、Ephb4蛋白在血管上皮、肺泡及支气管上皮表面均有表达,分布模式无统计学意义.EA-TEF组小管期Efnb2(162.70±10.04)和Ephb4(152.20±12.32)蛋白表达量增多,而囊泡期回复至正常水平.结论 血管生成因子Efnb2及其受体Ephb4可调控胎肺组织的分支发育,阿霉素诱导的EA-TEF模型鼠胎肺发育小管期两者同时升高可能是对肺发育不良的代偿机制.
关键词： 食管闭锁并食管气管瘘 胎肺 大鼠 EphB4 Efnb2 -
人EFNB2基因shRNA表达载体的构建及表达
目的:构建针对人EFNB2基因的特异性shRNA真核表达载体,并在宫颈癌Hela细胞中表达.方法:运用基因工程技术构建pEFNB2-shRNA载体,转染Hela细胞,通过RT-PCR及Western blot检测干扰效率,筛选抑制作用明显的载体.结果:构建获得的pEFNB2-shRNA表达载体能够有效抑制EFNB2基因的表达(P＜0.05),其中以pEFNB2-shRNA1的抑制作用强,对EFNB2mRNA表达的抑制率为81.2%,对蛋白表达的抑制率为69.7%.结论:shRNA EFNB2能有效下调EFNB2基因表达水平.
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miR-497靶向调控疾病易感基因EFNB2的分子机制研究
目的 用分子克隆和双荧光素酶报告基因的方法研究miR-497对精神分裂症易感基因EFNB2的靶向调控作用,为miR-497在精神分裂症中的分子功能研究奠定基础.方法 运用生物信息学在线软件预测,发现与精神分裂症相关的miR-497可能直接调控疾病易感基因EFNB2.随后采用分子生物学技术扩增EFNB2基因3'-UTR中包含与miR-497种子序列相结合的片段,将该片段连接入pmirGLO质粒载体构建野生型的重组体(WT),并突变EFNB2基因3'-UTR与种子序列相结合的碱基序列,构建突变型的重组体(MUT).后将miR-497阴性对照(NC)和模拟物(mimics)分组转染HEK293T细胞系,并在24、48 h后分别进行双荧光素酶报告基因活性测定.结果 测序结果表明EFNB2基因3'-UTR的野生型(WT)和突变型(MUT)分别成功构建入pmirGLO载体中,表明WT和MUT的重组体均构建成功.转染24、48 h后的双荧光素酶报告基因活性检测结果表明,miR-497 mimics与NC相比,显著性降低了报告基因的活性.结论 本研究在细胞水平证明了miR-497可直接调控精神分裂症易感基因EFNB2,为后续miR-497在精神分裂症中的功能研究提供了新思路和新线索.
