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视网膜母细胞瘤动物模型的制作探讨
目的 建立兔和裸小鼠前房内视网膜母细胞瘤(Rb)移植瘤模型,对比两组之间的成功率.方法 将Y79细胞制成细胞悬液,A组注入10只兔(10眼)的前房,每眼注0.1ml;B组注入10只裸小鼠(10眼)的前房.每眼注0.4μl.结果 A组有2眼形成了移植瘤,B组均形成了移植瘤,移植瘤对NSE呈阳性反应,对GFAP呈阴性反应.结论 裸小鼠比兔更适合作为Rb细胞前房移植瘤的动物模型.
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砷剂诱导人视网膜母细胞瘤Y79细胞系P16基因去甲基化及转录
目的 探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人视网膜母细胞瘤(RB)Y79细胞系P16基因去甲基化及转录激活的可能机制. 方法四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)法检测As2O3对Y79细胞生长和增生的抑制作用;流式细胞仪DNA含量分析法探讨As2O33对Y79细胞周期的影响;巢式甲基特异性聚合酶链反应法(n-MSP)及DNA克隆测序分析法检测As2O3作用前后Y79细胞P16基因甲基化状态;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测P16基因、DNA甲基转移酶(DNMT3A、DNMT3B)基因mRNA的表达. 结果 As2O3能明显抑制Y79细胞生长,使细胞阻滞于G0~G<,1>期;未处理组细胞P16基因不表达,As2O3作用48 h后P16基因表达增强,甲基化程度减弱,甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B mRNA表达下降. 结论 RB Y79细胞系存在P16基因高甲基化,As2O3通过抑制DNA甲基转移酶mRNA表达诱导P16基因去甲基化,显著上调P16基因mRNA表达,将细胞阻滞于G0~G<,1>期,抑制Y79细胞增生.
关键词: 视网膜母细胞瘤/病理生理学 砷剂/拮抗剂和抑制剂 去甲基化 Y79细胞