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DNA条形码技术在鱼种鉴定中的应用
鉴于世界鱼种多达3万种,传统的形态学分类方法已不能满足对鱼种进行准确鉴定的需要,DNA条形码技术为这一问题的解决开辟了一条新思路.本文就DNA条形码的发展史、技术原理以及在鱼种鉴定中的应用进行综述.
关键词： DNA条形码 鱼种鉴定 细胞色素氧化酶亚基Ⅰ -
陶氏颚口线虫成虫的扫描电镜观察及基于ITS2和COX1基因的系统发生分析
目的 观察野猪体内分离的陶氏颚口线虫(Gnathostoma doloresi)成虫体表的超微结构,并基于其核糖体第二内转录间隔区(ITS2)和细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COX1)基因分析其分子系统发生关系. 方法 用戊二醛和锇酸双固定法固定从野猪胃壁分离的陶氏颚口线虫成虫2条,扫描电镜下观察其体表超微结构.PCR法分别扩增成虫ITS2和COX1基因并测序,测序获得的序列经校正处理后使用BLAST在线工具进行比对,并运用MEGA 6.0软件将所测序列与GenBank中颚口线虫属相关序列进行多重比对,采用邻位相连法构建系统发生树. 结果 扫描电镜结果显示,陶氏颚口线虫成虫呈酒瓶状,全身布满小棘;头球呈扁球体状,头部与体部间凹陷成一颈沟,沟内无棘;颈乳突和体中部膨大区域的体棘形状区分明显.所获ITS2和COX1基因序列的长度分别为418和381 bp,与GenBank中陶氏颚口线虫的ITS2(登录号AB181156)和COX1(登录号AB180100)基因的序列一致性分别为99％和98％,提交至GenBank获得登录号分别为JN408329和JN408299.ITS2和COX1种系发生树结果显示,2条陶氏颚口线虫独立分支自展值分别为100％和85％,与刚刺颚口线虫(G.hispidum)也分别构成自展值为99％和93％的独立分支. 结论 本研究为陶氏颚口线虫成虫的扫描电镜形态和系统发生关系提供了资料.
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高氧对早产大鼠肺组织细胞色素氧化酶亚基Ⅰ表达的影响
目的 探讨85%高体积浓度氧暴露对早产新生大鼠肺组织中线粒体DNA编码细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)动态表达的影响.方法 早产SD大鼠生后d2随机分为空气组、高氧组.高氧组持续暴露于 85%氧气中,空气组置于同一室内常压空气中.两组分别于暴露满1、4、7、10和14 d时,提取肺组织RNA,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定COXⅠmRNA表达;采用免疫组织化学、免疫印迹(Westem-blot)法检测COXⅠ蛋白表达.结果 1.与空气组相比,高氧d1和d4COXⅠmRNA的表达显著增强(P＜0.05,0.01),其后开始下降,d7时两者无显著性差异(P＞0.05),d10时较空气组显著降低(P＜0 01),d14时又增高(P＜0.01).2.COXⅠ蛋白水平表达,与空气组相比,高氧d1和d4时,COXⅠ表达显著增强(P＜0 01,0 05),d7时两者无显著性差异(P＞0.05),其后开始下降,d10和d14时较空气组显著降低(P＜0.01,0.05).结论 85%高体积浓度氧暴露诱导早产新生大鼠线粒体DNA编码COXⅠ异常表达,这种变化可能参与高氧肺损伤的发生.
关键词： 高氧 大鼠 早产 细胞色素氧化酶亚基Ⅰ -
提取COⅠ基因片段鉴定嗜尸性蝇类
目的 通过扩增蝇类CO Ⅰ基因片段,结合形态学特征鉴定嗜尸性蝇类的种类.方法 运用改良平衡酚—tris饱和酚法提取蝇类DNA,进行CO Ⅰ序列扩增和测序,与数据库序列进行比对和分析.结果 改良平衡酚-tris饱和酚提取DNA方法可获得有效的蝇类DNA,并可应用于CO Ⅰ基因片段扩增,进而进行蝇类种类的鉴定.结论 平衡酚-Tris饱和酚法提取的噬尸性蝇类虫体DNA作为模板,用于CO Ⅰ序列扩增,测序后与数据库目的序列分析比对,可准确鉴定嗜尸性蝇类的种类;和传统的昆虫形态学特征鉴定方法比较,该体系更准确,应用范围更广.
关键词： 法医昆虫学 嗜尸性蝇类 鉴定 DNA提取 细胞色素氧化酶亚基Ⅰ
