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miR-499-5p调控AKT2基因对骨肉瘤MG63细胞凋亡和迁移的影响
目的 探讨miR-499-5p在骨肉瘤MG63细胞中的表达及其对MG63细胞凋亡和迁移的影响.方法 运用生物信息学软件TargetScan和miRanda对miR-499-5p和AKT2基因的靶向配对关系进行预测.未转染细胞设为空白对照组(control组),脂质体2000转染miR-499-5p模拟物为mimics组,转染干扰AKT2基因的siRNA为siRNA组.Real-time PCR检测3组细胞中miR-499-5p和AKT2 mRNA的表达情况,westernblot检测AKT2蛋白的表达情况,流式细胞术检测3组细胞凋亡情况,细胞划痕实验检测体外的迁移情况.结果 TargetScan和miRanda显示miR-499-5p和AKT2基因二者靶向配对良好.Real-time PCR检测结果表明转染mimics后,AKT2 mRNA的表达量降至(45.06±8.12)％,与control组(100％)比较,差异有显著性意义(P＜0.05).Western blot检测结果表明mimics组AKT2蛋白相对表达量为(0.32±0.05),与comtrol组(0.69±0.11)比较,明显降低,P＜0.05.流式细胞术和细胞划痕实验结果显示mimics组MG63细胞凋亡率(18.97±2.41)％及细胞划痕愈合率(63.54±5.43)％,与control组(10.35±2.56)％和(90.35±6.81)％相比差异均有显著性意义(P＜0.05).结论 miR-499-5p能够下调骨肉瘤MG63细胞中AKT2基因的表达,促进癌细胞的凋亡以及抑制细胞的迁移.
关键词： 微小RNA 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2 骨肉瘤MG63细胞 -
巴戟天含药血清对人骨肉瘤MG63细胞凋亡及JNK信号通路的影响
目的 观察巴戟天含药血清对人骨肉瘤MG63细胞凋亡的影响,并探讨其潜在机制.方法 取4周龄SD大鼠12只,随机分4组,分别给予低、中、高三种浓度巴戟天溶液(0.54、1.08、2.16 g/kg)及蒸馏水灌胃,分离血清.体外培养人骨肉瘤MG63细胞,采用不同浓度的巴戟天含药血清干预,以空白血清为对照.采用MTT法检测巴戟天含药血清干预MG63细胞24、48 h的增殖率,流式细胞术检测凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡形态,Western-blotting法检测JNK信号通路相关蛋白JNK、p-JNK、Bad、p-Bad、Cleaved caspase-3的表达情况.结果 中、高浓度的巴戟天含药血清能有效抑制MG63细胞增殖(P＜0.01或P＜0.05),但干预48 h对比24 h并无显著差异;同时,高浓度组MG63细胞较对照组凋亡率显著增加(P＜0.01),细胞分布散乱,胞核固缩,细胞透亮,呈现典型的凋亡形态学特征;高浓度的巴戟天含药血清能显著增加MG63细胞JNK总蛋白及磷酸化p-JNK蛋白的表达(P＜0.01或P＜0.05),上调p-Bad和Cleaved caspase-3蛋白表达(P＜0.01),但对Bad总蛋白表达无明显影响.结论 巴戟天含药血清能促进人骨肉瘤MG63细胞凋亡,其作用机制与激活JNK信号通路有关.
