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姜黄素联合白藜芦醇诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的作用机制
目的 利用姜黄素及其联合白藜芦醇在体外作用于喉癌细胞Hep-2,观察其对人喉癌细胞的影响,并探讨可能的抗肿瘤作用机制.方法 采用MTT法检测各组药物对喉癌细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258染色法观察各组药物对喉癌细胞核的形态影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测p65和c硒pase-3的基因表达情况;Western blot法检测各组药物对喉癌细胞p65蛋白和caspase-3蛋白表达情况的影响.结果 MTT结果显示姜黄素联合白藜芦醇组抑制喉癌细胞增殖的作用要明显高于单独姜黄素组和单独白藜芦醇组(P＜0.05);Hoechst 33258染色法的结果显示,经各组药物处理后的细胞核形态与对照组相比呈凋亡特征性改变;流式细胞术分析结果显示姜黄素联合白藜芦醇组的细胞凋亡率明显高于单独姜黄素组和单独白藜芦醇组(P＜0.05);RTPCR结果显示姜黄素联合白藜芦醇组的p65基因表达量与二者单独使用时相比明显降低(P＜0.05),而姜黄素联合白藜芦醇组的caspase-3基因表达量与二者单独使用时相比明显升高(P＜0.05);Western blot结果显示与对照组比较,单独姜黄素组和单独白藜芦醇组的p65蛋白表达明显下调,caspase-3蛋白表达则明显上调,而姜黄素联合白藜芦醇组对p65和caspase-3表达调控的影响与单独姜黄素组和单独白藜芦醇组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 姜黄素联合白藜芦醇在诱导人喉癌细胞Hep-2的凋亡时具有协同效应,其作用机制可能是通过阻断转录因子NF-κB(p65)信号通路的活化,上调caspase-3蛋白的表达来实现的.
关键词： 姜黄素 白藜芦醇 人喉癌细胞Hep-2 细胞凋亡 NF-κB信号通路 -
表达凋亡素基因的重组禽痘病毒对人喉癌细胞Hep-2的抑制效应研究
目的:探讨含鸡贫血病病毒(CAV)凋亡素(Apoptin)基因的重组禽痘病毒vFVApoptin诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的作用及其作用方式.方法:用vFVApoptin感染体外培养的人喉癌细胞Hep-2,运用MTT染色法检测重组质粒对肿瘤细胞的抑制作用;并运用流式细胞仪检测肿瘤细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)和细胞内活性氧(ROS)水平变化情况;通过免疫印迹检测细胞色素c(Cyto c)释放;应用底物显色法检测Caspase-3/9活性.结果:vFVApoptin感染可明显抑制Hep-2肿瘤细胞,并具有下调肿瘤细胞ΔΨm,上调其ROS水平,促进Cyto c释放和激活Caspase-3/9的功能.结论:vFVApoptin通过上调Hep-2肿瘤细胞内线粒体ROS产生,造成Cyto c的释放,激活Caspase-9,进而激活Caspase-3等下游凋亡因子,终通过线粒体途径诱导细胞凋亡抑制Hep-2肿瘤细胞.
关键词： 禽痘病毒 凋亡素基因 人喉癌细胞Hep-2 细胞凋亡
