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一种快速DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳与银染干胶技术
介绍快速、高效、高分辨率的DNA聚丙烯酰胺电泳、银染及干胶技术,采用本文介绍的配比灌制胶,浓缩效果和分离效果十分理想,无横向扩散;染色温度提高,缩短了银染的时间;双层玻璃纸干胶法简便易行.
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新生儿疾病筛查血片微量DNA提取方法的建立及其在甲基化检测中的应用
目的 建立新生儿疾病筛查血片DNA提取的方法,探索其在甲基化检测中的应用.方法 依据性别随机将新生儿出生时的血片样本20例分为2组:传统法组(10例)、改良试剂盒法组(10例).从DNA浓度、完整性和是否适应于聚合酶链反应(PCR)研究,对抽提的DNA质量进行评估.进一步对DNA做重亚硫酸盐处理,采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测瘦素(Leptin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因启动子区域甲基化水平变化.结果 改良试剂盒法抽提的DNA浓度为(5.70 ±0.81) mg/L,显著优于传统法[(3.50±0.45)mg/L](=2.79,P＜0.05);生化分析仪分析显示DNA片段完整性更好.琼脂糖凝胶电泳显示可以扩增出有效的18S基因PCR片段,说明抽提的DNA可以用于PCR相关实验研究;MSP结果显示不同血片样本甲基化Leptin、TNF-α基因启动子区域甲基化模式不同.结论 改良试剂盒方法可以简便有效地从干血片中提取DNA,而且抽提的DNA可以较好地用于基因甲基化研究;为从DNA甲基化的角度揭示疾病的发生,提供了新的研究方案和技术方法.
关键词： 新生儿血片 DNA分离 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应 -
一步法分离石蜡切片DNA的改进与鉴定
目的：改进一种以含蛋白酶K的裂解液作用于石蜡包埋处理的细胞、分离DNA粗提液用于PCR扩增的实验方案。方法石蜡包埋组织切片经常规脱蜡处理,用蛋白酶K裂解液洗脱细胞,55℃消化3 h后离心,吸取上清液；分光光度法检测DNA酶裂解液质量和浓度；以之为模板分别扩增人线粒体基因微卫星多态D310区、ATPase6基因区和核基因HBB、BRCA1等的DNA片段,琼脂糖凝胶电泳检测分析PCR扩增情况,并测序验证扩增产物。结果以石蜡切片的DNA裂解粗提液为模板,扩增目的DNA片段阳性率可达100%；获得序列分析验证。结论改进的蛋白酶K裂解液一步洗脱消化法操作简单、过程快捷、费用低廉,能快速有效地分离石蜡组织切片DNA,用于后续PCR扩增检测,具有较高效率。
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用于毛细管电泳和芯片电泳DNA分离的筛分介质
毛细管电泳和微芯片电泳是用于核酸分子分离的强有力工具,其筛分介质的选择尤为重要,是目前研究的热点之一.本文是按照均聚物和共聚物的分类,综述了线性聚丙烯酰胺、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚环氧乙烷、聚N,N-二甲基聚丙烯酰胺、丙烯酰胺与聚N,N-二甲基聚丙烯酰胺的共聚物等各种筛分体系的性质,包括其优点以及缺点,并对各自在DNA等生物大分子分离方面的应用进展进行了评述.简要介绍了筛分机理以及添加剂的加入对提高聚合物的分离能力和稳定性的影响.
