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过度自制不利健康
人们告诉我,为了达成长期目标而拒绝当下的愉悦是一种品德,他们可能是对的.心理学家称之为“自我约束”或“自制”.自制和责任心是一项能用来合理预测一个年轻人未来的特质(或一种应对机制),自制力较差的人后随波逐流的可能性更大.即使在恶劣的环境中,自制力强、有韧性的人排除万难——贫穷、学校不好、社区治安差——而在学业和事业上取得成就的可能性也大.只是有一点,这些孩子即使真的能成功,也会在这个过程中迅速地衰老.根据西北大学和佐治亚大学近发表的研究成果,在此过程中他们的身体会受到不良影响,其中一点就是他们的细胞将明显地先于年龄老去(在DNA甲基化的基础上).
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091 无机砷和甲基化
无机砷既是一种毒物,又是一种抗癌药物.无机砷的许多作用机制与甲基化密切相关,无机砷的甲基化是其在人体内的主要代谢步骤之一;无机砷的致癌作用也与其引起基因的异常甲基化有关.本文对二者间的关系作一综述.
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072 甜菜碱的甲基供体作用及防治脂肪肝的研究进展
甜菜碱是一种广泛存在于动植物体内的多甲基供体.它参与同型半胱氨酸的再甲基化,从而降低血浆同型半胱氨酸水平.甜菜碱也可调节脂肪代谢,减少肝脏脂肪沉积,因此能有效防治脂肪肝.其作用机制是抑制脂肪的合成,促进肝脏脂肪的输出.本文主要综述了甜菜碱作为甲基供体在机体甲基化反应中所起的作用以及其防治脂肪肝的研究进展.
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无机砷甲基化产物与砷代谢相关基因研究进展
砷对人体具有致癌性,与心血管疾病、糖尿病等疾病有关.砷在体内的代谢是一个极其复杂的过程,而调控砷代谢的相关基因在砷的代谢过程中起到了重要的作用,同时也解释了砷中毒的易感性问题.目前对于砷代谢的过程存在不同学说,对于砷代谢相关基因与砷代谢产物的关系以及砷中毒的易感性等同题,不同地区的报道也有差别.本文就砷甲基化的过程和产物、砷代谢相关基因研究的进展以及今后的研究方向展开阐述.
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4-[(4,4-二甲基-7-甲氧基-1,3-二氧代-异喹啉基)乙基]苯磺酰胺的合成
以2-羧基-4-甲氧基苯乙酸为原料经环合、二甲基化两步反应合成目标产物4-[(4,4-二甲基-7-甲氧基-1,3-二氧代-异喹啉基)乙基]苯磺酰胺,研完了反应时间、温度、物料配比等因素对各步反应产率的影响,找到了佳工艺条件,并通过核磁谱图表征了目标产物的结构,在上述优化条件下,两步反应的总收率可达到70％以上.
关键词： 2 -羧基-4 -甲氧基苯乙酸 甲基化 环合 -
结直肠癌中Kiss-1基因启动子甲基化与Kiss-1基因表达的关系
目的：研究结直肠癌中Kiss-1基因启动子甲基化状态对Kiss-1基因表达的影响。方法：应用甲基化特异性PCR （MSP）方法检测73例结直肠癌、正常结直肠组织和人结直肠癌细胞HCT116、SW480、W1116、LoVo中Kiss-1基因启动子甲基化状态，应用realtime-PCR、Western-blot技术检测相应组织和细胞中Kiss-1基因mRNA和蛋白质（Metastine）的表达量。结果：结直肠癌中Kiss-1基因甲基化阳性率（82.19%）高于正常组织（6.31%）（P<0.05）；结直肠癌组织中，甲基化阳性组Kiss-1基因mRNA和Metastine表达量均明显低于甲基化阴性组（P<0.05）。而HCT116、SW116和SW480细胞中Kiss-1基因启动子甲基化阳性，LoVo 细胞甲基化阴性；定量分析 Kiss-1基因 mRNA 和 matestin 表达量，结果显示 Lo-Vo>SW480>SW1116>HCT116，差异有统计学意义（p<0.05）。结论：结直肠癌中Kiss-1基因启动子甲基化可能引起Kiss-1基因表达下调。
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胚胎发育过程中的DNA甲基化作用
胚胎发育是哺乳动物发育的基本特征,胚胎在发育的过程中是否存在问题,要取决于遗传学调控机制的运行是否有误.在胚胎发育过程中为重要的是胚胎的基因组范围内的DNA 甲基化模式的作用.胚胎发育过程中的DNA 甲基化作用是与基因印记的建立、基因表达的调控以及细胞和胚胎的形态建成都密切相关的.
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抑癌基因RB1在小鼠不同发育阶段卵母细胞中的表达及甲基化状态的研究
目的 研究抑癌基因RB1在小鼠不同阶段卵母细胞中的mRNA表达及DNA甲基化的状态,旨在探讨RB1基因在卵母细胞生长发育中的作用,为胚胎植入前肿瘤的诊断提供理论基础. 方法 采用改良的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测RB1在不同发育阶段卵母细胞[GⅤ期(生殖泡期)、MⅠ期(第一次减数分裂中期)、MⅡ期(第二次减数分裂中期)]中的mRNA表达,即细胞裂解后直接逆转录+全转录扩增cDNA+荧光定量PCR扩增方法检测不同发育阶段卵母细胞的相对表达量.同时还进行DNA甲基化的研究:细胞裂解后直接进行亚硫酸盐处理,再进行半巢式PCR扩增出目的片段,把目的片段进行T载体(TA)克隆测序RB1在不同阶段卵母细胞中的甲基化状态. 结果 RB1在小鼠GⅤ期、MⅠ期、MⅡ期卵母细胞的表达量分别是:(0.054±0.004)、(0.080±-0.005)、(0.101±0.005),RB1在MⅡ期中的表达量约是GⅤ期的2倍,差别具有统计学意义(P＜0.05).RB1甲基化:MⅠ期和MⅡ期卵母细胞的24个CpG位点C完全变成T,所有CpG位点完全非甲基化.GⅤ期偶见1～2个CpG位点甲基化,所有CpG位点基本完全非甲基化. 结论 RB1 mRNA随着卵母细胞的生长发育表达量不断增加,RB1 DNA在卵母细胞(GⅤ～MⅡ)中尚未发生甲基化.
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WI-38细胞衰老与蛋白磷酸酶2A催化亚基甲基化的关系研究
目的 构建WI-38细胞连续培养衰老模型,并探讨WI-38细胞衰老与蛋白磷酸酶2A催化亚基(PP2Ac)去甲基化水平的关系.方法 连续培养WI-38细胞株直至细胞衰老而停止增殖,以群体倍增次数(population doubling level,PDL)记录细胞代龄并收集年轻细胞和衰老细胞,利用刃天青还原率检测细胞增殖活性,细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老率,Western blotting检测细胞内去甲基化PP2Ac的表达水平.结果 WI-38细胞连续培养至第43代时细胞停止增殖;衰老组细胞(43PDL)增殖活性明显低于年轻组(23PDL),差异具有统计学意义(P＜0.01);衰老组细胞β-半乳糖苷酶染色阳性率明显高于年轻组,达93％,是年轻组的4.5倍;衰老组细胞去甲基化PP2Ac蛋白表达水平明显上升,是年轻组的3.3倍.结论 WI-38细胞复制性衰老与细胞内蛋白磷酸酶2A催化亚基(PP2Ac)的去甲基化表达水平相关.
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结晶型硫化镍及反式-BPDE恶性转化16HBE细胞hMSH2基因甲基化的研究
目的 对结晶型硫化镍(NiS)和反式二氢二醇环氧苯并芘(anti-7,8,-dihydrodiol-9,10-epoxide benzo(a)pyrene,BPDE)恶性转化及接种裸鼠成瘤的人支气管上皮细胞(16HBE)hMSH2基因启动子甲基化状况进行研究,探讨镍及反式-BPDE的表遗传致癌机制.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)法、荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法检测结晶型NiS和反式-BPDE恶性转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因肩动子甲基化状况及其mRNA和蛋白表达,并用去甲基化因子5-Azac(5-Aza-2'-deoxycytidine)处理有异常甲基化的细胞.结果结晶型NiS和反式-BPDE恶性转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因启动子区存在CpG岛的高甲基化;与非转化16HBE细胞比较,转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因mRNA和蛋白表达下降;有异常甲基化的细胞经去甲基化处理后甲基化消失.结论结晶型NiS和反式-BPDE恶性转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因启动子区CpG岛的高甲基化使其mRNA表达下降,并可能导致hMSH2基因表达抑制,这可能是结晶型NiS及反式-BPDE诱导16HBE细胞转化和成瘤的一种表遗传致癌机制.甲基化的可逆性对今后研究其表型逆转以及药物治疗提供了重要线索.
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人胚肺成纤维细胞衰老过程中P66Shc 启动子区CpG岛甲基化状态
目的 探讨人胚肺成纤维细胞复制性衰老及过氧化氢诱导的早衰过程中P66Shc的表达改变及其启动子 区域的甲基化水平变化.方法 荧光定量PCR方法检测细胞衰老过程中的mRNA表达改变,甲基化特异性PCR(MSP)定性检测甲基化的变化情况,亚硫酸氢盐修饰基因组结合克隆测序定量检测启动子区域CpG岛甲基化水平.结果 人胚肺成纤维细胞复制性衰老及过氧化氢诱导的早衰过程中,P66Shc的mRNA表达水平逐渐升高,中年细胞组及复制性衰老细胞组mRNA表达分别升高至1.78和1.73倍,而早衰组却显著增高,至7.16倍；年轻细胞组、复制性衰老细胞组及早衰组P66Shc启动子区域CpG岛呈高甲基化水平,分别为94％、90％和90％.结论 人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中P66Shc的mRNA表达水平逐渐升高,其启动子区CpG岛呈高的甲基化水平,不参与该基因表达调控.
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细胞衰老过程中P53表观遗传学修饰
目的 检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导细胞早衰阶段P53的表观遗传学修饰.方法 荧光定量采用聚合酶链式反应法(PCR)检测P53的mRNA表达,甲基化特异PCR检测启动子区甲基化改变情况,染色质免疫沉淀结合定量PCR检测其组蛋白修饰,包括组蛋白H3,H4乙酰化和H3(Lys4)及H4(Lys20)甲基化修饰.结果 细胞复制性衰老过程中,P53的mRNA表达在中年细胞组显著升高,复制性衰老细胞组也升高,早衰组无明显改变;细胞复制性衰老过程中,其启动子区-820 bp～-656 bp甲基化水平随增龄而降低,早衰组降低明显;复制性衰老细胞组及早衰组的组蛋白修饰在启动子区-889 bp～-676 bp以组蛋白H3(Lys4)甲基化修饰为主;-199 bp～-30 bp的修饰,复制性衰老细胞组以组蛋白H3,H4乙酰化修饰为主,早衰组以H4乙酰化,H3K4甲基化修饰为主.结论 细胞衰老过程中,P53启动子区组蛋白修饰参与其mRNA表达调控,复制性衰老与早衰存在调控机制的差异.
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香烟烟雾处理对BEAS-2B细胞FHIT基因甲基化及其mRNA表达的影响
目的 观察永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)经香烟烟雾长期处理后FHIT基因甲基化状况及其mRNA表达改变,探索吸烟致肺癌的机制.方法 BEAS4B以20％烟雾浓度,每次10min作为染烟条件,细胞连续染烟2次作为染烟1代.细胞染烟30代且传代40代后,应用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡和软琼脂克隆法检测克隆形成率判断其恶性转化程度,用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测FHIT基因甲基化状况,并通过Q-PCR检测FHIT的mRNA表达量.结果 与对照组比较,各染烟组细胞出现了一定的S期阻滞,染烟后传代至40代细胞凋亡率较对照组下降明显(P＜0.05).染烟20代传代至40代细胞(Sm20-40)与染烟30代传代至40代细胞(Sm3040) FHIT基因启动子区呈高甲基化状态,且Q-PCR结果显示Sm20-40和Sm30-40组细胞FHIT基因mRNA均低于对照组(P＜0.05).结论 香烟烟雾可导致BEAS4B细胞FHIT基因启动子区呈高甲基化状态,引起FHIT基因mRNA表达降低,可能是吸烟致肺癌的机制之一.
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人胚肺成纤维细胞衰老过程中Foxa2启动子区组蛋白修饰变化
目的 检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导细胞早衰阶段Foxa2启动子区的组蛋白修饰变化.方法 按传代情况将人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞(22 population doubling levels,22PDL)组、中年细胞(35PDL)组、复制性衰老细胞(49PDL)组和氧化应激诱导的早衰细胞(premature senescence,PS)组.采用荧光定量PCR检测Foxa2的mRNA表达水平,染色质免疫沉淀方法检测其启动子区IP1(-740 bp～-596 bp)、IP2(-187 bp～ +84bp)的组蛋白修饰,包括组蛋白H3、H4乙酰化及H3(Lys4)、H4(Lys20)甲基化修饰.结果 与年轻细胞组比较,复制性衰老细胞组和早衰组人胚肺成纤维细胞Foxa2 mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P＜0.05),中年细胞组无明显变化.在Foxa2 IP1启动子区,衰老的细胞具有降低的H3组蛋白乙酰化和增加的H4(Lys20)甲基化修饰；在IP2启动子区,衰老的细胞具有降低的H3(Lys4)甲基化修饰特征.结论 在细胞衰老过程中,Foxa2启动子区特异的组蛋白修饰参与调控其mRNA表达水平.
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二氯乙酸对人尿路上皮细胞膀胱癌相关基因甲基化、转录和蛋白表达的影响
目的 探讨二氯乙酸对人尿路上皮SV-HUC-1细胞膀胱癌相关癌基因c-myc和抑癌基因APC、SFRP1、SFRP5甲基化、转录水平以及蛋白表达量的影响,为阐明其毒性机制提供科学依据.方法 采用CCK-8法检测二氯乙酸对SV-HUC-1细胞的细胞毒性,确定不显著影响细胞存活率的浓度及处理时间.以1和2 mmol/L浓度二氯乙酸分别对SV-HUC-1细胞染毒24、48和72 h,采用甲基化特异性PCR(MSP)和real-time PCR对细胞中c-myc、APC、SFRP1和SFRP5基因的甲基化状态和mRNA表达量进行检测.以2 mmol/L浓度二氯乙酸对SV-HUC-1细胞染毒72 h,采用Western blot 对c-myc蛋白进行蛋白表达量检测.结果 二氯乙酸可使SV-HUC-1细胞中c-myc基因非甲基化程度升高,mRNA和蛋白表达量上升;可使APC、SFRP1和SFRP5基因甲基化程度升高,mRNA表达量下降.结论 二氯乙酸可影响SV-HUC-1细胞癌基因c-myc和抑癌基因APC、SFRP1、SFRP5的甲基化和表达,提示其可能有一定的表观遗传毒性.
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镉铅对泥鳅DNA甲基化水平的影响
目的研究镉(Cd2+)、铅(pb2+)以及二者联合(Cd2++pb2+)作用对泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)肝胰脏、肾脏及鳃DNA甲基化水平的影响.方法 0.05和5.00mg/L Cd2+、pb2+及Cd2++pb2+对泥鳅染毒,染毒2、7、14、21、28和35 d时取样,用高效液相色谱(HPLC)分析DNA甲基化水平.结果 5.00mg/L Cd2+、Pb2+及Cd2++Pb2+染毒2 d导致DNA异常高水平甲基化;Cd2+及Cd2++pb2+的毒性影响大于pb2+(P＜0.05).0.05 mg/L Cd2+与Pb2+作用下,鳃DNA甲基化水平在第7天时明显升高,而肝胰脏和肾脏则在第14天时升高(P＜0.05);染毒21 d后,3种组织甲基化水平均下降,并维持异常低度甲基化.结论 Cd2+、Pb2+及Cd2++Pb2+对泥鳅DNA甲基化水平的影响与离子种类、浓度及其作用的时间、靶器官等均具有相关性.
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人胚肺成纤维细胞衰老过程中胰岛素样生长因子2表观遗传活化作用
目的 观察体外培养人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导早衰持续阶段胰岛素样生长因子2(IGF2)表观遗传学修饰.方法 荧光定量PCR检测 IGF2的mRNA表达,甲基化特异PCR检测其启动子区甲基化改变,染色质免疫沉淀结合定量PCR检测组蛋白修饰,包括组蛋白H3、H4乙酰化,H3(Lys4)及H4(Lya20)甲基化修饰.结果 细胞复制性衰老过程中,中年细胞组及复制性衰老细胞组IGF2的mRNA表达升高,早衰持续组升高显著;细胞衰老过程中,仅复制性衰老细胞组在启动子区-658～ -456 bp具有一定的甲基化水平;复制性衰老细胞组的组蛋白修饰在启动子区-856 ～ -634 bp以H4乙酰化,H3甲基化修饰为主;+9 ～ +145 bp的修饰,复制性衰老细胞组受组蛋白H3及H4甲基化联合修饰,早衰持续组以H3甲基化修饰为主.结论 细胞衰老过程中,IGF2启动子区组蛋白修饰联合调控其mRNA表达,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异.
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动脉粥样硬化病人雌激素受体基因的甲基化与高同型半胱氨酸血症关系的研究
目的 探讨动脉粥样硬化(AS)患者雌激素受体(ER-α)基因启动子区CpG岛的甲基化改变,及其与血总同型半胱氨酸(tHcy)水平的关系.方法 82例研究对象分为AS组(54例),对照组(28例),所有入选对象均行颈部血管彩超检查.巢式甲基化特异性PCR(nMSP)法检测研究对象ER-α启动子区CpG岛的甲基化状态,荧光生化法检测血tHcy水平,spearman等级相关分析甲基化程度与tHcy的相关关系.结果 54例AS患者中有38例ER-α基因启动子区CpG岛甲基化,甲基化率为70.4%;28例健康对照者中有8例ER-α基因启动子区CpG岛甲基化,甲基化率为28.6%;两组甲基化率差异有显著性(P<0.05).同时,AS组tHey水平显著高于对照组(P<0.05),经spearman等级相关分析,ER-α基因启动子区甲基化程度与tHey相关系数为r=0.809(P<0.05).且随tHcy升高,AS病损程度亦递次加重.结论 AS患者ER-α基因启动子区CpG岛高度甲基化,且甲基化程度与血tHcy浓度呈正相关.提示高Hcy血症很可能通过干扰ER-α基因的甲基化而促进AS的发生、发展.
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饮水型砷暴露对人群甲基化代谢能力的影响
目的 探讨饮水型砷暴露对人群甲基化代谢能力的影响.方法 以带有砷化物预处理装置的原子吸收分光光度计测定砷暴露人群及无砷暴露对照人群血、尿中无机砷(iAs)、甲基胂(MMA)、二甲基胂(DMA)含量.以iAs、MMA及DMA的总和表示总胂(tAs)水平;以(MMA+DMA)/tAs及DMA/(MMA+DMA)分别计算一甲基化率(PMI)和二甲基化率(SMI)水平.结果 砷暴露人群血中iAs、MMA、DMA、tAs及PMI水平均显著高于相应对照人群的水平,而SMI水平显著低于对照人群.尿中MMA水平分别与血中PMI及SMI水平呈显著正相关(r=0.419,P＜0.01)及负相关(r=-0.326,P＜0.05).暴露组和对照组血中各种砷化物水平及甲基化率水平在男女间差异无显著性.结论 砷暴露人群与无砷暴露人群相比甲基化率有差异,PMI显著增高,SMI显著降低.人群甲基化率无显著性别差异.
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三价砷甲基转移酶mRNA相对表达与砷甲基化关系的研究
目的 观察三价砷甲基转移酶[As(Ⅲ)MT]mRNA在砷中毒患者、病区对照和非病区对照人群中的表达及其与尿砷甲基化水平的关系.方法 选取饮水型砷中毒中重度患者、轻度患者、病区对照和非病区对照各6例.采用实时定量RT-PCR技术测定研究对象的淋巴细胞中三价砷甲基转移酶AB(Ⅲ)MTmRNA表达,采用原子荧光AFS-9130、形态分析SAP-10检测尿无机砷(iAs)、一甲基肿酸(MMA)、二甲基砷酸(DMA)、总砷(TAs)含量.按PMI=(MMA+DMA)/TAs,SMI=DMA,(MMA+DMA)分别计算一甲基化指数和二甲基化指数.结果 中重度组,轻度组、病区对照组人群iAs、MMA、DMA、Tas、PMI、As(Ⅲ)MT mRNA均显著高于非病区对照人群(P＜0.05);As(Ⅲ)MT mRNA分别与MMA%(r=0.485,P=0.041)和PMI(r=0.476,P=0.046)呈显著正相关.结论 砷暴露可能促进As(Ⅲ)MT mRNA高表达进而引起PMI水平增高导致MMA产生过多.
