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抑癌基因RB1在小鼠不同发育阶段卵母细胞中的表达及甲基化状态的研究
目的 研究抑癌基因RB1在小鼠不同阶段卵母细胞中的mRNA表达及DNA甲基化的状态,旨在探讨RB1基因在卵母细胞生长发育中的作用,为胚胎植入前肿瘤的诊断提供理论基础. 方法 采用改良的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测RB1在不同发育阶段卵母细胞[GⅤ期(生殖泡期)、MⅠ期(第一次减数分裂中期)、MⅡ期(第二次减数分裂中期)]中的mRNA表达,即细胞裂解后直接逆转录+全转录扩增cDNA+荧光定量PCR扩增方法检测不同发育阶段卵母细胞的相对表达量.同时还进行DNA甲基化的研究:细胞裂解后直接进行亚硫酸盐处理,再进行半巢式PCR扩增出目的片段,把目的片段进行T载体(TA)克隆测序RB1在不同阶段卵母细胞中的甲基化状态. 结果 RB1在小鼠GⅤ期、MⅠ期、MⅡ期卵母细胞的表达量分别是:(0.054±0.004)、(0.080±-0.005)、(0.101±0.005),RB1在MⅡ期中的表达量约是GⅤ期的2倍,差别具有统计学意义(P＜0.05).RB1甲基化:MⅠ期和MⅡ期卵母细胞的24个CpG位点C完全变成T,所有CpG位点完全非甲基化.GⅤ期偶见1～2个CpG位点甲基化,所有CpG位点基本完全非甲基化. 结论 RB1 mRNA随着卵母细胞的生长发育表达量不断增加,RB1 DNA在卵母细胞(GⅤ～MⅡ)中尚未发生甲基化.
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同仁堂红参与高丽红参品质的初步比较研究——人参皂苷和人参多糖的含量测定
目的:测定人参总皂苷,人参皂苷Rg1,Re,Rb1和人参多糖含量,比较同仁堂红参与高丽红参的质量.方法:建立大孔吸附树脂比色法测定人参总皂苷含量;采用二元梯度洗脱程序的高效液相色谱法测定人参皂苷Rg1,Re,Rb1的含量;优化试验条件,采用苯酚-硫酸显色方法测定人参多糖含量.结果:同仁堂红参中人参总皂苷含量不低于高丽红参中总皂苷的含量;人参皂苷Rg1,Rb1的含量与高丽红参中的含量相近,人参皂苷Re含量略低于高丽红参中的含量,而人参多糖含量则高于高丽红参中的含量.结论:同仁堂红参中人参皂苷含量不低于高丽红参中的含量且人参多糖含量高于高丽红参.建立的测定人参总皂苷、人参皂苷Rg1,Re,Rb1以及人参多糖含量的方法准确、快速、重复性好,可以作为人参质量定量评价的方法,初步比较不同来源的人参品质.
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HPLC-ELSD法测定参芍片中人参皂苷Rg1和Rb1的含量
目的 用HPLC-ELSD法测定参芍片中人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量.方法 HPLC-ELSD法.结果 人参皂苷Rg1回收率为99.8%,RSD1.66%;Rb1回收率为100.1%,RSD为1.21%.结论 本法简便、准确,可作为该制剂的质量控制方法.
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高效液相色谱法同时测定大鼠血浆中人参皂苷Rg1,Re,Rb1及其在参麦注射液药动学研究中的应用
本文建立了一种灵敏、高效的同时测定大鼠血浆中三种人参皂苷Rg1,Rb,Re1的高效液相色谱法.采用C18(150 mm×4.6 mm)色谱柱进行分离;以乙腈-水为流动相梯度洗脱.通过研究发现标准曲线相关系数高于0.998,线性范围分别如下:人参皂苷Rg1为1.0-30.0 μg/mL;人参皂苷Re为0.5-15.0 μg/mL;人参皂苷Rb1为0.5-200.0μg/mL.人参皂苷(Rg1、Re、Rb1)三个质控浓度的样品在4℃放置24小时,-20℃保存30天,三次冻融循环后均稳定.样品的日内、日间精密度的RSD值均小于6.0％,平均回收率在96.1％-118.6％之间.人参皂苷Rg1、Re、Rb1的低定量限分别为1.0,0.5,0.5 μg/mL.实验证明,本研究所建立的方法能够成功地应用于大鼠血浆中参麦注射液三种人参皂苷成分(Rg1、Re、Rb1)的药动学研究.
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UPLC法评价硫磺熏蒸对西洋参皂苷类成分的影响
目的:评价硫磺熏蒸对西洋参皂苷类成分的影响.方法:建立超高效液相色谱法,测定并比较分析硫磺熏蒸前后西洋参中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的含量.结果:硫磺熏蒸后西洋参中人参皂苷Rg1、Re和Rb1总量仍符合《中国药典》规定;但当硫磺熏蒸致二氧化硫残留量大于400 mg·kg-1时,人参皂苷Re、Rb1的含量及人参皂苷Rg1、Re和Rb1三者的总量显著降低.当二氧化硫残留量不大于150 mg·kg-1时,人参皂苷Rg1、Re和Rb1的含量及其总量基本不受影响.结论:《中国药典》规定的西洋参二氧化硫残留量不得大于150 mg·kg-1有其科学合理性,硫磺过度熏蒸西洋参(二氧化硫残留量大于400mg·kg-1)对西洋参中皂苷类成分的含量有显著影响.
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超微粉碎对西洋参中人参皂苷体外溶出的影响研究
[目的]#考察超微粉碎技术对西洋参中人参皂苷成分溶出的影响，为西洋参的开发和应用提供实验依据。[方法]采用恒温水浴磁力搅拌方式进行体外溶出实验，超高液相色谱法（UPLC）测定西洋参超微粉和粗粉中人参皂苷Re、Rb1的含量，计算累积溶出度，绘制溶出曲线，比较两者中人参皂苷的溶出速率。[结果]西洋参超微粉中人参皂苷Rb1的累积溶出度高于粗粉，差异有统计学意义（P＜0.01），人参皂苷Re的累积溶出度，超微粉与粗粉比较，差异无统计学意义（P＞0.05），西洋参中人参皂苷Rg1含量过低，未做溶出考察。[结论]超微粉碎可以促进西洋参中人参皂苷Rb1的溶出，对人参皂苷Re的溶出无影响。
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三七总皂苷及其主要单体成分在肾脏疾病中的作用研究进展
三七(panaxnotoginseng)又名田七、参三七,为五加科多年生草本植物三七的根茎,主产于云南、广西等地,味甘,微苦,性温,归肝,胃经,药用广泛,毒副作用小,在中国和东方国家使用已经有近2000年的历史.其主要有效成分是三七总皂苷(panaxnotoginseng saponins,PNS),目前已经从三七各部位分离出40多种达玛烷型皂苷,而人参二醇型皂苷Rb1(ginsenoside Rb1,G-Rb1)、人参三醇型皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,G-Rg1)在三七中的总含量较人参高[1].
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七叶神安片的药理学研究及临床应用
人们现已从三七叶中分得7种皂苷(占总成分的8%),其中4种为已知人参皂苷Rb1、Rb3、Rc和七叶胆苷,还有3种为新皂苷为三七皂苷Fa、Fc和Fe,3者均为原人参二醇型皂苷.三七叶中还含有1种黄酮醇苷类成分,经鉴定为槲皮素-3-O-槐糖苷.
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人参皂苷单体Rb1及Rg1对白血病细胞K562增殖的影响
背景:国内外研究发现人参皂苷及其单体在抑制白血病细胞增殖、增加化疗药物的敏感性和逆转耐药等方面均有疗效,目前主要集中于对实体瘤和急性白血病的研究,涉及慢性白血病的报道非常少.目的:探讨人参皂苷单体Rb1,Rg1对人慢性粒细胞白血病细胞K562增殖的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/2009-03在重庆医科大学干细胞与组织工程研究室和眼科实验室完成.材料:K562细胞由重庆医科大学临床检验系提供.纯度为98.6%的人参皂苷单体Rb1,Rg1由南京艾斯替么中药研究所提供.方法:取对数生长期的K562细胞,调整密度为7×108L-1,空白对照组予以常规培养;人参皂苷单体Rb1组分别加入20,40,80,160 μmol/L的Rb1:人参皂苷单体Rg1组分别加入5,10,20,40,80 μmol/L的Rg1.主要观察指标:MTT比色法、锥虫蓝拒染法检测K562细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化.结果:人参皂苷单体Rb1,Rg1在体外对K562细胞增殖均有明显的抑制作用,在20～160 μmol/L Rb1和5～20 μmol/L Rg1浓度范围内,其抑制作用呈浓度依赖性,且均在作用48 h时抑制率达高峰.与空白对照组比较,体外培养48 h后160 μmol/LRb1组细胞周期分布无变化;20 μmol/L Rg1组S期细胞比例明显增加(P<0.05),G1期细胞比例明显下降(P<0.05),且160 μmol/L Rb1组、20 μmol/L Rg1组均未出现"亚二倍体"峰.结论:人参皂苷单体Rb1,Rg1均可抑制K562细胞增殖,Rg1增殖抑制作用可能是通过将K562细胞阻滞于S期而实现的,而Rb1的增殖抑制作用与细胞周期的关系有待进一步分析.
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三七皂苷单体 Rb1、Rg1对局灶性脑缺血运动功能及体感诱发电位的影响
目的观察三七皂苷(PNS)及单体 Rb1、Rg1对局灶性脑缺血所致体感诱发电位(SEP)、运动功能、电镜超微结构的影响。方法选用 Wistar大鼠 35只，随机分为 5组: 1组为对照组,2组为大脑中动脉梗死(MCAO)组,3、4、5组 MCAO前后给予 NIM、Rb1、Rg1。结果 4组MCAO后 4、8、16 h运动功能障碍程度与 2组比较有显著区别(P< 0.05)。 4、5组均能缩短 SEP潜伏期，与 2组比较有显著统计学意义(P< 0.05)。电镜超微结构显示 4、5组神经细胞膜、核膜结构正常，毛细血管内皮完整，嵴清晰，粗面内质网丰富。结论(1)Rb1能改善缺血神经的传导功能，减轻运动功能障碍程度。(2)Rg1保护缺血脑组织损伤及神经元的坏死作用弱于Rb1、NIM，对神经功能无明显改善作用。
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人参皂甙单体Rb1对大鼠在体心脏收缩性能的影响
本文作者为进一步探讨人参皂甙单体Rb1对心肌收缩的影响,完善人参对心肌保护作用的系统性研究,拟在在体工作鼠心上,以心肌收缩性能为指标,对比观察Rb1对心肌收缩的影响.
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一种真菌转化人参皂苷的研究
目的 研究利用真菌转化人参根总皂苷的方法,测定其含量变化.方法 利用实验室的菌株,对柱层析分离后的人参根皂苷进行微生物转化,运用HPLC对转化后的皂苷成分进行含量测定.结果 该菌株能将人参皂苷Rb1转化为人参皂苷Rd,为稀有人参皂苷Rd的制备提供了新的方法.结论 筛选出的真菌对二醇型皂苷具有转化活性,Rb1质量浓度明显减少,Rd的含量增多,由此得出结论该真菌能将皂苷Rb1转化为Rd.利用真菌转化人参根总皂苷方法是适条件,为其规模化操作提供一定参考依据.
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RB1在恶性肿瘤中的研究进展
视网膜母细胞瘤基因1(Retinoblastoma1,RB1)是人类发现的第一个抑癌基因,因为初在视网膜母细胞瘤中发现该基因所以命名为视网膜母细胞瘤基因1. RB1作为一种负性调控因子在细胞周期中有重要作用,通过与转录因子E2 F结合来调控细胞的增殖. 研究还发现RB1在抗细胞凋亡中也扮演着重要的角色,RB1的敲除可以增强抗肿瘤药物导致细胞死亡的敏感性. RB1的这种双重作用提示其可能是恶性肿瘤的发病原因,并且可能成为肿瘤进展及临床治疗效果的预测指标.
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miR-222通过靶向RB1促进视网膜母细胞瘤细胞生长与侵袭
背景与目的：视网膜母细胞瘤基因1(retinoblastoma 1，RB1)能够抑制多种肿瘤的发生、发展，且与细胞周期、分化、衰老、凋亡及生长抑制等调控密切相关。该研究旨在明确miR-222是否通过靶向RB1表达而促进视网膜母细胞瘤细胞的生长与侵袭，进一步揭示miR-222促瘤作用的分子机制。方法：将miR-222(miR-222模拟物)+RB1-wt(野生型RB1的3’-非翻译区的荧光素酶报告载体)、miR-NC(无关序列对照)+RB1-wt、miR-222+RB1-mut(突变型RB1的3’-非翻译区的荧光素酶报告载体)及miR-NC+RB1-mut共转染人视网膜母细胞瘤细胞株Y79，并采用单光子检测荧光素酶活性。采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测RB1表达水平的改变。将miR-222与miR-NC、RB1(pcDNA3.1-RB1)与vector(pcDNA3.1)、miR-222+RB1及miR-NC+vector转染Y79细胞，MTS检测细胞生长增殖活性，Transwell侵袭实验检测Y79细胞生长与侵袭能力的影响。结果：与miR-NC+RB1-wt组比较，共转染miR-222+RB1-wt组的荧光素酶活性强度降低了约56.67%(P<0.05)。与miR-NC比较，miR-222组RB1蛋白水平显著下调(P<0.05)。转染miR-222组细胞生长速度显著高于miR-NC组(P<0.05)。与pcDNA3.1组比，pcDNA3.1-RB1组可显著抑制Y79细胞的生长(P<0.05)，而miR-222+pcDNA3.1-RB1组和miR-NC+pcDNA3.1组比较，细胞生长速度差异无统计学意义(P>0.05)。转染miR-222组穿过基底膜的细胞数分别为(193±10)，与对照组(144±11)比较能明显加快Y79细胞的穿膜能力，差异有统计学意义(P<0.05)。而miR-NC+pcDNA3.1组和miR-222+pcDNA3.1-RB1组比较，穿过基底膜的细胞数差异无统计学意义(P>0.05)。结论：miR-222通过靶向调控RB1表达而促进视网膜母细胞瘤细胞的生长与侵袭。
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人RB1及其突变体的表达与定位
目的 研究人RB1及其缺失突变体蛋白在细胞内的表达与定位.方法 以含人RB1全长cDNA序列的质粒为模板,通过PCR方法分别扩增出RB1全长及其三段缺失突变体序列,然后分别构建其表达载体,利用Western blot法和免疫荧光法检测其在细胞株中的表达与定位.结果 成功构建了pCDNA3.1-FLAG-RB1及其缺失突变体的表达载体,Western blot法结果证明其在细胞中都能有效地表达,免疫荧光的结果显示了RB1主要分布在细胞核,但其缺失突变体在细胞质中也有分布.结论 人RB1在HEK 293T、COS7细胞中均有表达,且主要分布在细胞核内,其缺失突变体在胞质中也有分布,这为进一步了解人RB1的功能提供了一定的基础.
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颈痛片中人参皂苷Rb1的HPLC测定方法
目的对颈痛片产品中Rb1的含量进行质量监控.方法采用高效液相色谱法,使用C18柱,乙腈-甲醇-纯水-0.05%磷酸水溶液(20:40:10:30)为流动相,检测波长为203nm.结果方法线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为96.87%,RSD为1.18%.结论此法可有效测定复方颈痛片中Rbl含量,方法准确可靠.
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视网膜母细胞瘤相关基因研究进展
视网膜母细胞瘤(RB)是婴幼儿常见的眼内恶性肿瘤,严重危害患儿的视力、眼球,甚至生命.RB起源于视网膜胚胎发育阶段,其发生和发展与人类第1个分离克隆的抑癌基因RB1密切相关.RB12个等位基因的失活是RB发生和发展的基础.近年来,随着分子生物以及基因工程技术的迅猛发展,RB相关基因研究取得了一定进展.研究发现,RB的发生和发展除了存在RB1基因突变外,还存在许多染色体层面的改变,癌基因MYCN、鼠双微体4(MDM4,又称MDMX)、驱动蛋白家族成员14(KIF14)、DEK、E2F3,以及抑癌基因钙粘连素11(CDH11)等也在RB的发生和发展中发挥驱动作用.现就RB相关基因的研究进展进行综述,从DNA分子水平认识RB的发生和发展规律,为基因治疗RB以及临床医师制定治疗方案提供科学依据.
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高效液相色谱法测定蛭龙血通胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1的含量
目的 用高效液相色谱法(HPLC)法测定蛭龙血通胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1的含量.方法 色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶 ,流动相为乙腈 -水 ,梯度洗脱.结果 三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1分别在0.106～2.650 μg, 0.424～10.600 μg,0.423 2～ 10.587 μg之间呈良好的线性关系 ;制剂中 3种成分的平均回收率分别为 92.7%,93.4%和95.7%; RSD分别为2.10% (n=6),2.11% (n=6)和1.39% (n=6).结论 该方法简便、准确、分离效果好,无干扰,可用于蛭龙血通胶囊的质量评价.
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反相高效液相色谱梯度洗脱法同时测定三七不同饮片中人参皂苷Rg1,Rb1含量
目的建立三七中人参皂苷Rg1,Rb1的含量测定方法,并比较加工炮制对三七不同饮片中人参皂苷Rg1,Rb1含量的影响.方法 Zorbax SB-C18分析柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液梯度洗脱:0～7 min,25:75;7～10 min,35:65,流速为1.1 ml/min,柱温为室温,检测波长为205 nm.结果人参皂苷Rg1,Rb1回收率分别为99.46%,98.79%,RSD分别为1.87%,2.13%.各样品中,以三七生药粉中人参皂苷Rg1,Rb1含量为高.结论该方法稳定、准确、简便、快速,为三七质量评价提供参考.三七临床以生品打粉入药为宜.
关键词： 三七 人参皂苷Rg1 RB1 反相高效液相色谱梯度洗脱法 -
人参皂苷Rb1对体外条件下大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的影响
本研究旨在观察人参皂苷Rb1在体外条件下对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨分化的影响.一、材料与方法实验于南方医科大学实验中心完成.1.材料:5周龄SD大鼠6只,体质量150～200 g.试剂:人参皂苷Rb1干粉由中国药品生物制品检定所提供.
