首页 > 文献资料
-
神经母细胞瘤中枢转移3例并文献复习
目的 探讨神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)中枢转移的发生率、临床表现、影像学特征、病理及基因特征,以提高临床医生的认识.方法 回顾分析2005年1月-2009年12月在北京儿童医院血液肿瘤中心治疗的3例NB中枢转移患儿的临床资料及其诊疗情况.结果 3例患儿的中枢转移分别表现为脑实质的孤立病灶、脑膜的弥漫转移和实质、脑膜均受累.3例患儿均有骨髓浸润、乳酸脱氢酶(LDH)升高,1例存在MYCN基因扩增,另2例未做.例1在常规化疗和手术治疗后获得部分缓解,无进展时间10个月,中枢为首次复发部位,例2、3在初诊时就存在中枢转移;例1、2终放弃治疗,例3经过联合化疗,瘤灶切除以及自体干细胞移植等综合治疗后获得完全缓解.结论 我院的NB中枢转移率为3.125%.NB中枢转移患儿通常存在骨髓浸润、LDH水平增高和不良的基因学特征.诊断依赖于临床表现和影像学检查,故定期的头颅MRI或CT检查非常必要.虽然预后很差,但积极治疗仍有希望完全缓解.
-
叶酸脂质体包裹的MYCN siRNA在裸鼠体内靶向治疗作用的初步研究
目的 研究叶酸受体为靶向的脂质体包裹MYCN基因小干扰性RNA在神经母细胞瘤裸鼠骨髓、骨转移模型中的靶向性及治疗作用.方法 16只成功建立神经母细胞瘤骨髓、骨转移模型的裸鼠,将其随机分为靶向性研究组(4只)和疗效性研究组(12只).靶向性研究组裸鼠静脉给予CY3荧光标记叶酸脂质体包裹的MYCN siRNA,荧光显微镜检测CY3在体内瘤组织及重要器官的荧光强度.疗效性研究组12只裸鼠随机分MYCN siRNA组和无关siRNA组,静脉分别给予叶酸脂质体包裹的MYCN siRNA与叶酸脂质体包裹的无关siRNA,采用荧光定量PCR检测肿瘤组织MYCN mRNA表达,原位细胞凋亡检测法(TUNEL)观察肿瘤细胞凋亡数.结果 CY3荧光标记的叶酸脂质体MYCN siRNA给药8 h后,荧光主要分布在肿瘤组织内,MYCN siRNA组瘤组织中MYCN mRNA的表达量明显较无关siRNA组降低(P ＜ 0.05),MYCN siRNA组凋亡细胞数量高于无关siRNA组(P ＜ 0.05).结论 ①叶酸脂质体MYCN siRNA经静脉给药后主要靶向瘤组织,叶酸脂质体是肿瘤基因治疗的有效载体;②叶酸脂质体MYCN siRNA在体内显著下调肿瘤MYCN mRNA的表达,促进肿瘤细胞凋亡,有望成为神经母细胞瘤治疗的新药物.
-
MYCN 基因表达变化增强神经母细胞瘤细胞SK-N-BE(2)凋亡
目的:以MYCN基因高表达神经母细胞瘤细胞株SK-N-BE(2)为研究对象,改变神经母细胞瘤细胞中MYCN基因的表达水平,观察对肿瘤细胞凋亡的影响.方法:分别构建MYCN 高表达载体和MYCN-siRNA,并转染神经母细胞瘤细胞株SK-N-BE(2),Western blot检测MYCN蛋白表达变化,使用ELISA法检验肿瘤细胞凋亡情况.结果:Western-blot结果显示转染MYCN高表达载体后SK-N-BE(2)细胞中MYCN蛋白表达显著增加(P<0.05),转染MYCN-siRNA后MYCN蛋白表达显著下降(P<0.05).肿瘤细胞在MYCN表达改变后,凋亡率均显著增加.结论:神经母细胞瘤细胞株SK-N-BE(2)中MYCN基因表达抑制或增加均可诱导肿瘤细胞凋亡.
-
MYCN和OCT4在小儿神经母细胞瘤组织中的表达及意义
目的 探讨MYCN和OCT4基因在儿童神经母细胞瘤组织中的表达及意义.方法 收集神经母细胞瘤手术标本48例及其临床病理资料,应用免疫组化染色法检测瘤组织中MYCN和OCT4的表达情况,分析两者表达情况的相互关系与临床病理资料的联系.随访术后患儿,通过Kaplan-Meier方法建立生存曲线表,分析MYCN和OCT4的表达与患儿术后生存时间的关系.结果 MYCN和OCT4在儿童神经母细胞肿瘤组织中均高表达(P＜0.01),两者存在一定的正相关,与患儿生存时间呈正相关(P＜0.01).结论 MYCN和OCT4基因的高度表达与儿童神经母细胞瘤的发生、发展、预后密切相关.
-
神经母细胞瘤细胞中MYCN调控miRNA的研究进展
转录因子MYCN是MYC癌家族的一员,与人类多种肿瘤有关,常见的为神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB).MYCN通过激活和抑制靶基因的转录,以调节细胞的生命活动和肿瘤发生.近年来,越来越多的研究证实,在神经母细胞瘤中MYCN介导的致癌作用是通过调控一些与肿瘤相关的miRNAs来实现的.
-
DEAD box1基因与相关肿瘤的研究进展
DEAD box基因,DEAD box 1(DDX1),位于染色体2p24,过表达于视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中,并与MYCN基因共同扩增在神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)和原发性肿瘤的细胞系中.近研究发现在鼠的子宫内膜癌细胞中DDX1基因与MYCN基因共同扩增.经研究发现在多数生物体中都存在DEAD box蛋白.正如我们所意料,DDX1存在解旋酶区域,在体外DDX1蛋白表现有ATP酶和解旋酶的活性.目前,DDX1确切的功能和在肿瘤中的作用还在进一步的研究当中.现将DEAD box蛋白家族和DEAD box 1基因与肿瘤的关系进行综述.
-
神经母细胞瘤相关基因DDX1研究进展
神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童常见恶性肿瘤之一.MYCN基因扩增与NB不良预后密切相关,但MYCN基因作为NB临床诊断重要分子标志物存在一定局限性.研究表明,与MYCN基因邻近的DEAD box 1基因(DDX1)在NB中存在与MYCN共扩增现象.DDXl蛋白是DEAD box家族中一员,目前研究显示其可能是一种依赖ATP的RNA解螺旋酶,与肿瘤发生发展关系密切,但DDX1基因对NB的作用尚不清楚,且DDX1与MYCN基因共扩增对NB患者预后影响也存在分歧.文章根据目前DDX1基因与NB研究进展,对DDX1与NB关系进行综述.
-
荧光原位杂交检测小儿神经母细胞肿瘤MYCN基因扩增的意义
目的 探讨小儿神经母细胞肿瘤(NT) MYCN基因扩增的意义.方法 收集154例NT患儿的临床病理资料,包括患儿一般资料、病理类型、临床分期及预后等.应用荧光原位杂交(FISH)检测MYCN基因扩增情况,分析MYCN扩增与临床病理特征及预后的关系.结果 154例NT患儿年龄1 d～11岁,平均26.1个月,中位数为20.5个月;男女比例为1.48:1.00;临床分期Ⅰ期20例(13.0％),Ⅱ期23例(14.9％),Ⅲ期43例(27.9％),Ⅳ期64例(41.6％),Ⅳs期4例(2.6％);组织学预后良好型72例(46.8％),组织学预后不良82型(53.2％).20例MYCN扩增(13.0％),MYCN与2号染色体(CEP2)信号比值为4.08～ 43.29;MYCN无扩增134例,其中获得91例(68.0％),阴性43例(32.0％).MYCN的表达在不同年龄、神经母细胞瘤分型、组织学预后分组以及核分裂-核碎屑指数(MKI)高低及临床分期差异均有统计学意义(P均＜0.05),而与性别无关(P＞0.05).20例MYCN扩增病例中4例存活(20.0％),16例死亡(80.0％),生存期为(17.10±2.24)个月.MYCN无扩增134例中96例存活(71.6％),38例死亡(28.4％),生存期(28.71 ±1.28)个月.生存分析结果显示,MYCN扩增患儿预后较差(x2=19.596,P＜0.05).结论 MYCN基因扩增患儿预后差,我国儿童NT扩增率较低.
-
视网膜母细胞瘤相关基因研究进展
视网膜母细胞瘤(RB)是婴幼儿常见的眼内恶性肿瘤,严重危害患儿的视力、眼球,甚至生命.RB起源于视网膜胚胎发育阶段,其发生和发展与人类第1个分离克隆的抑癌基因RB1密切相关.RB12个等位基因的失活是RB发生和发展的基础.近年来,随着分子生物以及基因工程技术的迅猛发展,RB相关基因研究取得了一定进展.研究发现,RB的发生和发展除了存在RB1基因突变外,还存在许多染色体层面的改变,癌基因MYCN、鼠双微体4(MDM4,又称MDMX)、驱动蛋白家族成员14(KIF14)、DEK、E2F3,以及抑癌基因钙粘连素11(CDH11)等也在RB的发生和发展中发挥驱动作用.现就RB相关基因的研究进展进行综述,从DNA分子水平认识RB的发生和发展规律,为基因治疗RB以及临床医师制定治疗方案提供科学依据.
-
靶向人神经母细胞瘤MYCN基因慢病毒载体的构建及鉴定
目的 构建靶向人神经母细胞瘤MYCN基因慢病毒表达载体并检测其对目的基因MYCN的沉默效应.方法 根据MYCN基因信息设计并构建4个靶向MYCN基因的干扰质粒,鉴定后与pLenti6.3/V5 Dest载体重组,并包装成为慢病毒表达载体Lenti-EGFP-MYCN-1/2/3/4-miR,感染人神经母细胞瘤SK-N-BE(2)细胞株,并应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot检测4个慢病毒表达载体对MYCN mRNA和蛋白表达的沉默效应,筛选出佳干扰靶序列慢病毒表达载体.结果 酶切和测序结果证实4个靶向MYCN基因的慢病毒载体构建成功,感染SK-N-BE(2)细胞后,应用FQ-PCR和Western blot检测MYCN mRNA和蛋白的表达水平分别为0.577±0.015、0.333 ±0.016、0.090±0.010、0.197 ±0.015和0.833±0.049、0.563±0.040、0.300±0.020、0.387±0.015,其中Lenti-EGFP-MYCN-3-miR对MYCN基因抑制作用为显著,为佳干扰靶序列慢病毒表达载体.结论 成功构建慢病毒表达载体可高效感染体外培养的人神经母细胞瘤SK-N-BE(2)细胞株,并可显著抑制靶基因MYCN mRNA和蛋白的表达.
-
熊果酸对神经母细胞瘤细胞增殖凋亡及MYCN表达的影响
目的 实验研究熊果酸作用于体外培养的神经母细胞瘤细胞株(SH-SY-5Y),对肿瘤细胞增殖、凋亡及MYCN基因mRNA表达的影响,探讨熊果酸对儿童神经母细胞瘤的治疗的作用.方法 以终浓度为4 uM/L、8 uM/L、12 uM/L的熊果酸作用于神经母细胞瘤细胞SH-SY-5Y,WST-1法检测SH-SY-5Y细胞增殖情况,流式细胞术检测SH-SY-5Y细胞凋亡情况,采用Real time PCR方法检测MYCN mRNA的表达情况.结果 熊果酸对SH-SY-5Y细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强;熊果酸对SHSY-5Y细胞凋亡的促进呈明显的剂量依赖性,随剂量的增加,促进凋亡效果逐渐加强;熊果酸对SH-SY-5Y细胞MYCN表达有抑制作用并有明显的剂量依赖性,随剂量的增加,抑制效果逐渐加强.12 uM/L作用72 h后神经母细胞瘤细胞增殖抑制效率达98.3%,MYCN基因mRNA表达抑制率达52.37%.结论 应用熊果酸在体外环境作用SH-SY-5Y细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、促进细胞凋亡、抑制原癌基因MYCN mRNA的表达.
-
苦参碱抑制神经母细胞瘤LA-N-5细胞增殖及MYCN基因mRNA的表达
目的 神经母细胞瘤是4岁以下儿童常见的恶性实体肿瘤,MYCN基因的高表达导致预后更加恶劣.苦参碱作为中药苦参的重要成分对多种肿瘤有治疗作用,该实验拟应用苦参碱作用神经母细胞瘤细胞(LA-N-5),对肿瘤细胞增殖及MYCN基因mRNA表达受抑制情况进行初步研究,希望可以为神经母细胞瘤的治疗开拓新的思路.方法 以终浓度为0.25 mg/mL,0.50 mg/mL,0.75 mg/mL,1.00 mg/mL苦参碱作用神经母细胞瘤LA-N-5细胞,MTT法检测LA-N-5细胞增殖情况变化,采用SYBR绿色荧光染料I的实时荧光定量Rt-PCR检测MYCN因mRNA表达受抑制情况.结果 苦参碱对LA-N-5细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强.1.00 mg/mL作用72h后肿瘤细胞增殖抑制效率达36.3%,单细胞MYCN基因mRNA表达9.7±0.35拷贝,抑制效率达44.6%.结论 应用苦参碱在体外环境作用LA-N-5细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、原癌基因MYCN mRNA的表达,为临床上神经母细胞瘤的治疗开拓了新的思路.
关键词： 苦参碱 神经母细胞瘤 MYCN 荧光定量RT-PCR 细胞株 -
荧光定量RT-PCR检测神经母细胞瘤细胞MYCN基因mRNA的表达
目的 MYCN基因表达对神经母细胞瘤的治疗及预后评估有指导意义,目前国内对于MYCN基因mRNA的定量检测未见报道,该研究拟采用SYBR绿色荧光染料Ⅰ(SYBR GREEN Ⅰ)实时检测的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测神经母细胞瘤细胞系LA-N-5细胞MYCN基因mRNA的表达,并对其可行性及实用性进行研究,力争探索出微量瘤标本的MYCN基因mRNA定量检测的可行方法.方法 提取神经母细胞瘤细胞系LA-N-5细胞总RNA,采用SYBR GREEN Ⅰ实时检测的RT-PCR检测其MYCN基因mRNA的表达,并用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为内参照,将MYCN基因的mRNA拷贝数与GAPDH的拷贝数相除,结果为单细胞MYCN基因mRNA的表达水平.结果 反应标准曲线有良好的相关性(R2＞0.99),PCR产物特异,神经母细胞瘤细胞系LA-N-5 MYCN基因mRNA的表达水平为17.4±1.2.结论 只要严格控制PCR反应条件,SYBR GREEN Ⅰ定量RT-PCR法可以作为一种良好的定量PCR方法对神经母细胞瘤细胞系LA-N-5 MYCN基因mRNA的表达进行检测,此方法为临床微量神经母细胞瘤瘤组织的MYCN基因mRNA的定量检测提供了可能.
关键词： 神经母细胞瘤 MYCN 荧光定量RT-PCR 绿色荧光染料Ⅰ -
9-顺式维甲酸联合细胞毒药物对MYCN扩增型神经母细胞瘤细胞毒性及MYCN、MDR1表达的影响
目的:观察9-顺式维甲酸(9-cis retinoic acid,RA)联合细胞毒药物对MYCN扩增型神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞的毒性及MYCN、MDR1表达的影响,为临床合理用药提供依据.方法:RA分别与长春新碱(VCR)、顺铂(CDDP)、足叶乙甙(VP16)、阿霉素(ADR)双药联合或单独作用IMR32细胞株24 h后:(1) CCK-8法测定细胞生长抑制率;(2)流式细胞仪检测细胞凋亡率;(3)实时荧光定量PCR法检测MYCN、MDR1的mRNA表达.结果:(1)细胞生长抑制率:各双药组高于相应单药组(P＜0.01).(2)细胞凋亡率:双药组高于相应单药组(P＜0.01),RA +CDDP高于其他双药组(P＜ 0.05). (3)MYCN表达:各双药组均低于相应单药组(P＜0.05),RA+VCR低于其他双药组(P＜ 0.05);MDR1表达:双药组高于相应单药组(P＜0.05),RA+ADR高于其他双药组(P＜0.01).结论:RA联合细胞毒药物对NB生长抑制、凋亡及下调MYCN表达有协同作用,可上调MDR1表达,综合分析RA与VCR或CDDP的组合可能为临床联合用药提供较合理的选择.
-
miR-221对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y裸鼠移植瘤生长的影响
目的 研究高表达miR-221对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的分子机制.方法 将18只裸鼠按照随机区组法分成3组:SH-SY5Y组(空白对照组)、miR-221-up组(实验组)和miRNA-NC组(阴性对照组),分别接种SH-SY5Y细胞、稳定转染miR-221的SH-SYSY-miR-221细胞及稳定转染对照质粒的SH-SY5 Y-miRNA-NC细胞,观察裸鼠体内成瘤及生长情况,30 d后处死取瘤体测量肿瘤体积、质量;qRT-PCR检测各组肿瘤组织中miR-221和MYCN mRNA水平的表达;Western blot和免疫组织化学法检测肿瘤组织中MYCN蛋白的表达水平.结果 与SH-SY5Y组相比,miR-221-up组裸鼠的瘤体体积和质量明显增加(P＜0.01),miRNA-NC组无统计学差异(P＞0.05);与SH-SY5Y组相比,miR-221-up组中miR-221、MYCN mRNA以及MYCN蛋白的表达明显升高(P＜0.01),而miRNA-NC组与SH-SY5Y组相比无统计学差异(P＞0.05).结论 miR-221可能通过上调MYCN的表达,促进SH-SY5Y细胞在裸鼠体内的生长.
