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没药倍半萜诱导的p21WAF/CIP1蛋白参与抑制前列腺癌细胞增殖
目的 探讨没药的两个倍半萜单体化合物抑制前列腺癌细胞增殖的作用机制.方法 应用细胞增殖实验噻唑蓝(MTT)法检测化合物对人前列腺癌细胞株LNCaP的影响;流式细胞术进一步分析前列腺癌细胞经化合物处理后细胞周期时相的变化;Western blot检测化合物对细胞周期相关蛋白p21WAF/CIP1(p21)和cyclin D表达的影响;利用细胞转染技术检测化合物对cyclin D启动子表达活力的影响.结果 两个没药倍半萜单体化合物对前列腺癌细胞均有显著的抑制活力,使细胞停滞于GO/G.期;且能在蛋白水平诱导p21WAF/CIP1的表达,同时降低cyclinD的表达.结论 没药倍半萜化合物抑制前列腺癌细胞的增殖,可能是通过上调p21WAF/CIP1的表达、下调cyclinD蛋白的表达来实现的.
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大豆异黄酮诱导食管癌细胞凋亡作用研究
目的在体外实验中,探讨大豆异黄酮诱导食管癌细胞发生凋亡的可能性,揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系.方法采用MTT比色法测定大豆异黄酮对食管癌细胞的生长抑制率;以透射电镜和TUNEL 染色法,定性、定量地研究大豆异黄酮与食管癌细胞凋亡的关系;通过免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因bcl-2和bax 的表达.结果大豆异黄酮对食管癌细胞有明显抑制作用,随大豆异黄酮浓度增加和培养时间的延长而增强;透射电镜可见食管癌细胞出现典型的凋亡细胞形态,如细胞核染色质致密浓缩,或聚集于核膜呈新月形小体;TUNEL染色法可见,经大豆异黄酮处理24、48、72、96 h后,食管癌EC-9706细胞凋亡数明显随时间延长而增加.免疫组织化学法发现经大豆异黄酮处理24、48、72、96 h后,食管癌EC-9706细胞的bcl-2蛋白阳性率减少,bax蛋白阳性率增加.经大豆异黄酮处理24、48、72、96 h后,经RT-PCR检测发现食管癌EC-9706细胞bcl-2和bax的mRNA表达阳性,并显示bcl-2 mRNA条带密度随时间的延长而递减,bax mRNA条带密度随时间的延长而增强.结论诱导食管癌细胞发生凋亡是大豆异黄酮抗食管癌作用的机制之一,大豆异黄酮可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导食管癌细胞发生凋亡.
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外源核苷酸对小肠上皮细胞周期的影响
以食物核苷酸为代表的外源核苷酸对人体的营养学意义还不清楚.肠上皮可能是核苷酸发挥生理作用的关键部位.我们探讨4种单核苷酸及其按母乳组成模式配制的核苷酸混合物对肠上皮隐窝细胞株IEC-6的细胞周期的影响,现报道如下.
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新加良附颗粒含药血清体外诱导人胃癌细胞凋亡研究
目的:观察新加良附颗粒对人胃癌细胞(BGC-823)诱导凋亡效应.方法采用MTT法测定新加良附颗粒含药血清体外对BGC-823生长抑制率,用流式细胞仪检测其对细胞凋亡影响的同时,以倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学变化.结果:新加良附颗粒对BGC-823有生长抑制效应和促进凋亡作用,并与用药剂量呈正相关;倒置显微镜下及透射电镜下对照组无明显变化,给药各组出现细胞形态学改变并可见凋亡特征出现.结论:新加良附颗粒体外具有抑制人胃癌细胞(BGC-823),诱导其凋亡作用.
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天螺多糖抑制HBV复制的体外实验研究
天螺多糖是我院首次以天螺(江西巴蜗牛,Bradybana.Jiangxinensis)为原料采用溶剂提取法制取的生物活性物质[1].为进一步了解天螺多糖的药理活性及其细胞毒性,我们以HBV转染的人肝癌细胞2.2.15细胞株为靶细胞,通过细胞培养实验观察其对HBV-DNA复制的抑制作用.
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藤莪清瘀方提取物对人胃癌BGC-823细胞抑制和凋亡影响的研究
目的:探讨藤莪清瘀方对人胃癌BGC-823细胞株的抑制及凋亡诱导作用.方法:采用不同浓度的藤莪清瘀方提取物(25.00、12.50、6.25、3.12、1.25mg/mL)体外处理人胃癌BGC-823细胞24、48、72h;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察藤梨根不同浓度和不同作用时间对人胃癌BGC-823细胞增殖的抑制率;采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况.结果:藤莪清瘀方提取物原液药物浓度(50mg/mL)经稀释8倍(6.25mg/mL)后,抑制率强(68.67±3.50)％,随着药物浓度的降低,抑制率随之下降;藤莪清瘀方对胃癌细胞作用48h抑制作用强.藤莪清瘀方提取物处理细胞48h后,凋亡比率达33.15％.结论:藤莪清瘀方对胃癌细胞有明显抑制作用,并诱导其凋亡.
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蝎毒抗癌多肽对人白血病细胞生长的影响
目的:观察蝎毒抗癌多肽(APBMV)对体外培养的人早幼粒白血病细胞株 HL-60生长的影响.方法:细胞毒性实验(MTT法)和生长抑制实验.结果:APBMV可使HL-60代谢MTT的能力显著低于对照组,其IC50值为10.74μg/ml;在适当浓度,APBMV可显著抑制HL-60细胞的生长(P＜0.01),剂量效应与时间效应关系明显,24h、48h和96h的IG50值分别为19.41μg/ml、9.90μg/ml、11.41μg/ml,且24h与48h间、48h与96h间效应相比,均有显著相关关系(r=0.9660,P＜0.05;r=0.9940,P＜0.01);APBMV对HL-60细胞的生长抑制作用以48h为著,96h时效应不增强.结论:APBMV是东亚钳蝎蝎毒中有效低毒的抗肿瘤成分,可显著抑制白血病细胞的生长.
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温肾活血法中药对人乳腺癌MCF-7细胞株体内外生长的影响
目的：通过对MCF-7细胞株体内外的研究，揭示温肾活血法中药抑制乳腺癌的作用机理。方法：体外实验用MTT法测定药物血清对细胞的杀伤作用，并用FCM检测各组肿瘤细胞的细胞周期，体内实验观察药物对体内移植瘤生长的影响。结果：温肾活血中药血清在培养液中浓度为10%、20%和30%时，对MCF-7的体外生长抑制率达22.7%、33.1%和37.4%(P<0.05)。温肾活血法中药灌饲MCF-7荷瘤裸小鼠后，在剂量为8g/kg、4g/kg、2g/kg时抑瘤率分别为47.5%、44.2%、51.0%。结论：温肾活血法中药可以抑制乳腺癌，其机理可能是通过抑制癌细胞的DNA合成而达到抑制癌细胞的生长。
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乳宁Ⅱ号对人乳腺癌MDA-MB-435细胞株生长转移的影响
材料与方法1 乳宁Ⅱ号对裸鼠MDA-MB-435人乳腺癌抑瘤抗转移作用的动物体内观察1.1 模型制备采用BALB/C雌性裸小鼠,SPF级,体重20g±2g,35～40日龄,购自中国科学院上海药物研究所.人乳腺癌MDA-MB-435细胞株(由上海市肿瘤医院分子生物学实验室邵志敏教授惠赠).参照文献方法[1],无菌条件下,将MDA-MB-435人乳腺癌细胞接种于裸小鼠左侧第二乳头下的脂肪垫(细胞数为1×106/只).2周后皮下明显触及肿块生长时随机分组.给药时间为10周,停药后3d将动物脱颈处死.1.2 药物乳宁Ⅱ号:由生黄芪、太子参、仙灵脾、枸杞子、莪术、生米仁、露蜂房等组成.按传统工艺制备成中药水煎剂,按<中药药理研究方法学>[2]附表"人和动物间按体表面积折算表"计算出3组用量为12g/kg、24g/kg、48g/kg,减压缩至浓度为0.5g/ml、1g/ml、2g/ml(含生药量).环磷酰胺(CTX)由上海华联制药有限公司生产.以30mg/kg,每次给药前用生理盐水配制所需浓度.三苯氧胺(TAM)由上海华联制药有限公司生产.以2.7mg/kg,每次给药前用生理盐水配制所需浓度.
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苦参碱对白血病细胞株Jurkat侵袭转移的影响
目的 研究不同浓度苦参碱对人急性淋巴细胞白血病细胞株Jurkat侵袭转移的抑制作用.方法 Jurkat细胞体外培养,经0 g/L、0.1 g/L、0.15 g/L、0.2 g/L苦参碱分别处理细胞,细胞黏附实验检测细胞黏附能力,细胞迁移实验检测细胞运动能力,肿瘤细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力,RT-PCR检测细胞基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)mRNA的表达,并采用直线相关分析Jurkat细胞MMP-9 mRNA的表达与细胞侵袭力之间的线性相关程度.计量资料的多组比较采用方差分析.结果 与对照组比较,0.15 g/L、0.2 g/L苦参碱能有效抑制Jurkat细胞与纤维粘连蛋白(FN)的黏附能力(P<0.05),0.1 g/L、0.15 g/L、0.2g/L苦参碱能显著降低Jurkat细胞的运动能力和侵袭能力(P<0.01).MMP-2在Jurkat细胞中无明显表达,MMP-9在Jurkat细胞中高表达,0.1 g/L、0.15 g/L、0.2 g/L苦参碱能明显下调Jurkat细胞MMP-9 mRNA的表达(P<0.01),Jurkat细胞MMP-9 mRNA的表达与细胞侵袭力呈正相关(r=0.940,P<0.01).结论 苦参碱能全面抑制Jurkat细胞的黏附能力、运动能力和侵袭能力,其作用机制可能与下调MMP-9 mRNA的表达有关,是一种较好的抗白血病细胞侵袭转移的药物.
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三氧化二砷与肿瘤细胞凋亡的关系
中药砒霜(三氧化二砷,As2O3)及砷制剂对肿瘤的治疗是近年来的研究热点,特别是对白血病的治疗为人们所关注.砷作为抗肿瘤药物在我国已有百年历史,中医传统方剂青黄散、十味丸等治疗不同类型的白血病确有一定疗效,经鉴定其中有效成分为含砷中药.1992年,哈尔滨医科大学确定了三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocyte leukemia, APL)的疗效[1].20世纪90年代中期,上海第二医科大学附属瑞金医院陈国强等[2]从细胞和分子生物学角度阐明了其作用机理,确定As2O3对全反式维甲酸(ATRA)耐药的病例可获较高的完全缓解(CR)率,但并无严重的骨髓抑制等副作用.用砒霜制成的亚砷酸注射液1999年下半年被批准为我国二类新药.美国食品和药品管理局(FDA)也正式批准用砒霜治疗急性早幼粒细胞白血病的方案.体外研究发现As2O3能诱导APL细胞株NB4细胞凋亡,抑制白血病细胞生长[3].细胞凋亡是一种相对于细胞坏死的、主动的、程序化的细胞死亡形式.有人认为当细胞生长和细胞死亡的平等被破坏时,肿瘤就会发生.现已发现许多因素包括不少化疗药物均可引起肿瘤细胞凋亡.细胞凋亡为肿瘤治疗提供了新思路和靶点.近发现As2O3同样能诱导非APL急性髓系白血病(AML)细胞株HL60细胞产生凋亡[4],但有关As2O3诱导凋亡的机制,目前仍处于起步阶段.以往发现As2O3不仅能诱导APL细胞株NB4细胞产生凋亡,也通过诱导细胞凋亡进而对非APLAML细胞株HL60产生增殖抑制作用[5].
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白花蛇舌草注射液对多发性骨髓瘤细胞株增殖的抑制作用
目的 探讨白花蛇舌草注射液(HDI)对多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI 8226、U266增殖抑制作用及机制. 方法 将RPMI 8226、U266细胞以1×106/ml的浓度接种于含10％胎牛血清RPMI 1640培养液中,取对数生长期的细胞进行实验.检测HDI对RPMI 8226、U266抑制作用并筛选研究浓度；观察不同浓度HDI对RPMI 8226、U266细胞凋亡、细胞周期、细胞因子及细胞株相关基因mRNA表达的影响. 结果 筛选出0、20、40、60 μl/ml HDI作用于RPMI 8226、U266细胞株,HDI可抑制RPMI 8226、U266增殖,诱导RPMI 8226凋亡,且有G1/S期阻滞作用.HDI可下调RPMI 8226、U266上清液血管内皮生长因子(VEGF)水平,且呈浓度依赖,同时上调RPMI 8226白细胞介素-6(IL-6)水平、下调U266 IL-6水平(P＜0.05或P＜0.01).经40 μl/ml HDI处理后,RPMI 8226及U266细胞株相关基因除Bax、Caspase-3外其余基因mRNA表达均有改变(P＜0.05或P＜0.01). 结论 HDI可抑制MM细胞株RPMI 8226、U266增殖,其作用机制可能促进细胞凋亡、阻滞细胞周期及改变细胞因子及细胞株相关基因mRNA表达有关,但途径不尽相同.
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中华眼镜蛇毒诱导人类小涎腺腺样囊性癌细胞凋亡报告
我们尝试应用近年发展起来的对恶性实体肿瘤有较高可评估率的新方法三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法(ATP-TCA法),测定眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌(NACC)细胞株的抑制作用,测定眼镜蛇毒与癌细胞存活的量效和时效关系,应用HE染色观察眼镜蛇毒作用NACC细胞后其细胞形态学的改变,以及流式细胞术检测眼镜蛇毒作用后的NACC细胞凋亡等方面的实验,为眼镜蛇毒的抗肿瘤临床应用提供实验依据.
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稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白细胞的构建
获得稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA细胞株.采用RT-PCR方法扩增乙型流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建pcDNA3.1(+)-HA重组质粒.将已鉴定正确的pcDNA3.1(+)-HA质粒与辅助质粒PLV-EF1a-EGFP(2A) Puro通过脂质体介导法共转染HEK293细胞,经嘌呤霉素筛选后得到重组细胞株HEK293-HA,通过流式细胞术法(FCM)来检测细胞中HA的表达情况.所得到的重组细胞经扩大培养后再连续培养15代,采用间接免疫荧光法(IFA)和蛋白免疫印迹法(WB)来检测HA蛋白表达的稳定性.结果表明重组质粒pcDNA3.1(+)-HA经双酶切及测序鉴定正确;共获得3株高表达阳性细胞株.细胞扩大培养后连续传代培养15代后进行Western blot和IFA检测结果表明,重组细胞的HA蛋白得到稳定的表达.已成功获得了能稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA细胞,可为乙型流感病毒HA蛋白的进一步研究提供良好的基础.
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锌指蛋白ZNF580定位在MGC803细胞核
新基因(AF184939)ZNF580是由本组克隆并于Genbank 注册的C2H2型锌指蛋白转录因子基因,其cDNA 748～1266 bp之间的碱基构成一个完整的开放阅读框,编码172个氨基酸.蛋白功能基序分析表明:其羧基端序列中含有3个重复串联的C2H2型锌指蛋白主构域:CX2CX3FX5LX2HX3H(X代表保守性差的氨基酸),富含脯氨酸残基的氨基端序列为转录激活结构域[1].利用绿色荧光(green fluorescence protein,GFP)在活细胞内的示踪作用[2],我们将GFP与ZNF580cDNA开读框融合,导入胃癌MGC803细胞株中,直观地观察到ZNF580基因在细胞内的表达及亚细胞定位,为阐明新基因ZNF580的功能奠定了基础.
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稳定表达α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸受体GluA1亚基单克隆细胞株的构建
目的 构建稳定表达α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体GluA1亚基的细胞株.方法 PCR扩增GluA1目的基因,并将其装载至慢病毒表达载体PLV.0-绿色荧光蛋白(GFP),采用4质粒系统转染HEK293T细胞包装慢病毒.嘌呤霉素抗性筛选细胞,挑选单克隆细胞株用Real-time PCR、Western blotting、免疫荧光和全细胞膜片钳鉴定GluA1的表达与功能.结果 菌落PCR鉴定扩增产物与GluA1分子量(2724 bp)一致,经测序插入慢病毒载体序列与GluA1序列一致;慢病毒感染并抗性筛选的HEK293T细胞经Real-time PCR、Western blotting和免疫荧光实验证明,GluA1在过表达GluA1组的HEK293T细胞正确表达,空载体组不表达.单克隆挑选的稳定细胞株免疫荧光染色显示,各细胞膜表面GluA1蛋白表达相对一致.单克隆细胞在电压钳模式下,细胞外液加10 mmol/L谷氨酸诱导,空载体组检测不到电信号,而过表达GluA1组可记录5～ 40 pA电信号.结论 成功构建了稳定表达AMPA受体GluA1亚基的HEK293T细胞株.
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我国建起了细胞培养细胞库--基础性科技工作建设项目
细胞是一切有机体的基本生命单位,是一切生命科学研究的基础材料.体外培养细胞要求绝对无菌等苛刻的条件,否则容易引起支原体感染或变异,使科研数据不够准确或难以重复. 长期以来我国在此领域仅有零星尝试,由于缺乏可靠的细胞来源和培养材料,常常难以使体外细胞长期健康成活和传代.一些珍贵的科研成果如单克隆抗体或传染特定基因的细胞株常因传代保存不善而造成损失.为了取得令国际同行信服的科研数据,国内很多实验室都在国外购买标准细胞.没有我国自己的符合国际标准的细胞培养细胞库,已成为我国科技发展的瓶颈.1999年启动国家细胞库建设项目.2000年10月,中国医科院基础医学细胞中心成立.与国内有关单位一起研制生产了大型液氮冻存设备 ,完成了原保存的100余株、系细胞的整理和登记,扩容入库细胞60株、系,同时建立健全了各种规章制度,制定了符合国标标准的操作规程,并开始对外提供细胞等服务.中科院上海生化细胞所1991年就建成中科院细胞库,这次改建了生物防护实验室,对外服务细胞千余种.科技部、卫生部专家希望这两个细胞库加速基地建设和国际化进程,继续为国家重要科研项目提供标准的细胞株,并在今后基因组计划、干细胞的深入研究中,发挥优质技术平台作用 .引自<健康报>
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间皮瘤相关特异性抗体的研究进展
自1979年Singh等[1]用培养的人反应性间皮细胞悬液作免疫原制备多克隆抗间皮细胞抗体以来,陆续用人恶性间皮瘤(MM)细胞株研制了MAb45,anti-MS和ME1等抗体.另外,识别卵巢肿瘤抗原的抗体OV632和K1及抗维尔姆斯瘤抗体anfi-WF1,在MM中亦有较高的敏感性和特异性.
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羟基磷灰石纳米粒子对卵巢癌作用的体外实验研究
目的 探讨羟基磷灰石(Hydroxyapatite,HAP)纳米粒子对卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用.方法 通过细胞毒性试验观察HAP纳米粒子对细胞生长的作用,测定HAP纳米粒子的量效曲线和时效曲线.通过丫啶橙/溴化乙啶染色荧光显微镜观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期来观察HAP粒子对细胞凋亡的作用.结果 HAP纳米粒子对SKOV3细胞生长具有抑制作用,当细胞的抑制率为30%、50%和70%时,该纳米粒子的浓度分别为8.53mg/L、26.52mg/L和61.99mg/L.形态学和定量的检测均证实HAP纳米粒子有诱导细胞凋亡的趋势,其凋亡率为(38.32±17.87)%,而对照组为(11.88±7.69)%,两组间差异显著,P＜0.05.并且HAP纳米粒子作用后,S期细胞明显少于对照组,而G0/G1期细胞明显多于对照组,两组间差异显著,P＜0.05.结论 HAP纳米粒子对卵巢癌细胞株SKOV3的生长具有明显的抑制作用,其作用机制可能是诱导肿瘤细胞凋亡.
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氨肽酶抑制剂对全反式维甲酸诱导人急性早幼粒白血病细胞株NB4细胞分化作用的影响及其机制的初步探讨
为了研究氨肽酶抑制剂乌苯美司(bestatin)对全反式维甲酸(ATRA)诱导人APL细胞株NB4细胞分化作用的影响及其可能机制,NB4细胞经bestatin和ATRA单用或联合应用处理一定时间后,用光学显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测CD11b表达,四氮唑蓝(NBT)还原实验检测分化细胞功能,RT-PCR法检测c-myc和c-EBPεmRNA表达,Western blot检测c-Myc蛋白表达.结果显示:NB4细胞经100μg/ml bestatin和10 nmol/L ATRA联合处理72小时后,其分化的形态更明显;100μg/ml bestatin与不同浓度ATRA联合处理72小时,能增强NB4细胞的NBT还原能力,与单用相应浓度ATRA组相比,差异显著(P＜0.01);从48-96小时,100μg/ml bestatin能增强10 nmol/L ATRA诱导NB4细胞的NBT还原能力,且呈时间依赖性,与相应时间点ATRA组相比,差异明显(P＜0.01);与单用10 nmol/L ATRA组相比,ATRA(10 mmol/L)和bestatin(100μg/ml)联用处理72小时,NB4细胞CD11b阳性表达率明显增加(P＜0.01);与单用10 nmol/L ATRA组相比,联用100μg/ml bestatin处理4小时后,NB4细胞c-myc mRNA表达的降低更明显(P＜0.05);50、75、100μg/ml bestatin与10 nmol/L ATRA联合处理8小时后,NB4细胞c-Myc蛋白表达水平明显降低,与单用ATRA组相比差异显著(P＜0.05);药物联用各组NB4细胞c-Myc蛋白表达水平与NBT还原能力之间呈负相关(r=-0.940,p=0.017);与100μg/ml bestatin联用不能增强10 nmol/L ATRA上调c-EBPεmRNA的表达;50、75、100μg/ml bestatin单独处理对NB4细胞的分化无影响.结论:氨肽酶抑制剂bestatin能够增强ATRA对NB4细胞的诱导分化作用,这可能与bestatin协同ATRA下调c-myc的表达有关.
