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维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡的作用
以人胃腺癌SGC-7901细胞为实验模型,观察了维生素E琥珀酸酯(VES)对其生长的抑制作用,并且采用电镜、流式细胞术和末端脱氧核苷酸标记检测了VES诱导SGC-7901细胞凋亡情况.结果表明,20μg/ml VES处理SGC-7901细胞4天,细胞生长抑制率达100%,本研究结果还显示VES可诱导SGC-7901细胞经历凋亡,同样在20μg/ml剂量下处理细胞2天,可引起89.96%的细胞凋亡.本研究提示在离体试验条件下VES是人胃癌细胞潜在的生长抑制剂.
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植酸对人胃癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用的研究
目的 了解植酸对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制和诱导凋亡作用.方法 MTT法检测植酸在体外对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用;AO/EB荧光染色和DNA Ladder实验检测细胞凋亡;免疫组化法检测凋亡调控基因P53蛋白的表达.结果 植酸在体外可以明显抑制人胃癌细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡.免疫组化实验结果表明,植酸可以抑制SGC-7901细胞中凋亡相关P53蛋白的表达.结论 植酸在体外可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,且对于P53蛋白表达的下调作用可能是其诱导细胞凋亡的机制之一.
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金雀异黄素诱导人胃癌细胞凋亡的机制研究
采用4',6-二乙酰基-2-苯基吲哚染色、琼脂糖凝胶电泳实验观察了金雀异黄素(Gen)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用,并采用Western Blot法检测Gen对人胃癌细胞p53、Caspase-3蛋白的表达情况.结果显示,Gen诱导了胃癌细胞凋亡,并抑制突变型p53蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达.结果提示,Gen抑制突变型p53蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的机制之一.
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大蒜3个有效部位配伍对3种人胃癌细胞的杀伤作用
目的:观察大蒜3个有效部位组合物对3种人胃癌细胞的杀伤作用,筛选有效部位组合物佳配伍比例.方法:以大蒜3个有效部位(大蒜油、大蒜总多糖、大蒜总皂苷)为研究对象,选用L16(45)正交表设计分组、给药,以胃癌细胞代谢MTT活力(抑瘤百分率)作为考察指标,采用SPSS软件对实验数据进行处理.结果:大蒜3个有效部位对MKN45细胞杀伤作用的主次顺序为大蒜油(1#)＞大蒜总多糖(2#)＞大蒜总皂苷(5#),其佳配比为1 #∶2#∶5#=1∶20∶10.大蒜3个有效部位对AGS细胞抑制率影响无明显差别,其佳配比为1#∶2#∶5#=1∶13.3∶3.3.大蒜总皂苷对人胃癌HGC-27细胞抑制率的影响显著(P＜0.01),影响的主次顺序为大蒜总皂苷＞大蒜油＞大蒜总多糖,其佳配比为1#∶2#∶5#=1∶200∶50.结论:3种人胃癌细胞对大蒜3个有效部位组合物的杀伤作用的敏感性不同,3个有效部位组合对3种人胃癌细胞杀伤作用的佳配比浓度亦不相同.
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新加良附颗粒含药血清体外诱导人胃癌细胞凋亡研究
目的:观察新加良附颗粒对人胃癌细胞(BGC-823)诱导凋亡效应.方法采用MTT法测定新加良附颗粒含药血清体外对BGC-823生长抑制率,用流式细胞仪检测其对细胞凋亡影响的同时,以倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学变化.结果:新加良附颗粒对BGC-823有生长抑制效应和促进凋亡作用,并与用药剂量呈正相关;倒置显微镜下及透射电镜下对照组无明显变化,给药各组出现细胞形态学改变并可见凋亡特征出现.结论:新加良附颗粒体外具有抑制人胃癌细胞(BGC-823),诱导其凋亡作用.
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反左金丸水提物对人胃癌细胞SGC-7901凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响
目的:观察反左金丸水提物(water extracts of Retro.zuojin Pill,WERZP)对人胃癌细胞(SGC-7901)生长的抑制和凋亡诱导效果,及其对bel-2和bax表达的影响.方法:采用MTT比色法观察不同浓度的WERZP对SGC-7901的生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Hoechst 33258染色观察细胞形态学变化以及Western blot方法检测WERZP xCX胃癌细胞SGC-7901中bel-2、bax蛋白表达的影响.结果:WERZP作用SGC-7901细胞24 h后,细胞存活率显著降低(P<0.05),且与时间、剂量呈依赖关系.流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析,0.1,0.5,1,5和10 mg·mL-1 WERZP作用SGC-7901细胞24 h,细胞凋亡率分别为(4.02±1.33),(36.10±O.23),(55.91±O.95),(56.50±1.55)和(60.27±3.58)%,其中(0.5-10)mg·mL-1组与对照组(2.66±1.33)%比较差异均有统计学意义(P<0.01).Hochest染色结果显示细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征.WERZP可降低SGC-7901细胞bcl-2基因表达和增加bax基因表达.结论:WERZP对SGC-7901生长有明显的抑制作用并可诱导SGC-7901的凋亡,bcl-2基因表达降低和bax基因表达增加可能是其凋亡机制之一.
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中药复方肠胃清含药血清对胃癌SGC7901细胞凋亡的影响
目的 观察中药复方肠胃清含药血清对胃癌SGC7901 细胞凋亡的影响,探讨其作用机制.方法 将人胃癌SGC7901 细胞分为6 组:空白对照组及肠胃清药物血清低、中、高剂量组和5-氟尿嘧啶(5-FU)组、5-FU 联合肠胃清中剂量组.用MTT 法观察肠胃清药物血清对SGC7901 细胞增殖活性的影响;用流式细胞术检测肠胃清药物血清对细胞凋亡的影响;用Western blot 检测方法 测定细胞P53、Bax 与Bcl-2 蛋白表达水平;RT-PCR 方法 检测肿瘤细胞P53、Bax 及Bcl-2 基因表达.结果 肠胃清药物血清能抑制胃癌SGC7901 细胞增殖,并诱导细胞凋亡,同时明显抑制Bcl-2蛋白和基因的表达(P <0.05 或P <0.01),增强P53、Bax 蛋白和基因表达水平(P <0.05 或P <0.01).结论 中药复方肠胃清能抑制胃癌SGC7901 细胞增殖,并诱导细胞凋亡,其机制可能与促进P53、Bax 基因及抑制Bcl-2 基因蛋白表达有关.
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天佛参口服液治疗中晚期恶性肿瘤的临床与实验研究
目的：观察天佛参口服液(TFS)对中晚期恶性肿瘤的临床疗效并探讨其作用机理。方法：对用TFS治疗的71例恶性肿瘤患者按实体瘤疗效标准进行疗效分析，评定其生存质量、3年存活率及免疫功能的变化。并经实验用集落形成法测定对人胃癌(MGC803)细胞、人肝癌(SMMC7721)细胞、小鼠乳腺癌(EMT6)细胞肿瘤克隆原细胞的抑制作用和应用以上3种肿瘤染料排斥实验测定对肿瘤细胞生长率的影响。结果：临床观察71例患者总缓解率为45.1%，有效率为71.8%，生存质量改善，机体免疫力增强，治疗1、2及3年的生存率分别为78.5%、38.5%及10.8%，中位生存时间24.2个月。实验研究表明，TFS不但有直接杀伤肿瘤细胞的作用和抑制单个细胞克隆的增殖能力；并且具有广谱的抗肿瘤作用和一定的量效关系，与对照药物比较差异有显著性(P＜0.05)。结论：TFS对中晚期恶性肿瘤有明显疗效，其抗癌作用与机体免疫力增强和直接抑杀肿瘤细胞有关。
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宁夏密点麻蜥含药大鼠血清对人胃癌BCG-823细胞凋亡的影响
目的 研究宁夏密点麻蜥高、中、低剂量对人胃癌(gastric cancer,GC)BCG-823细胞增殖凋亡的影响,同时测定细胞P53、Bax、基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)及E-cad蛋白表达水平,阐明宁夏密点麻蜥对GC细胞的干预作用及其机制.方法 50只SPF级♂SD大鼠,随机分为生理盐水对照组(S组),宁夏密点麻蜥高(XH组)、中(XM组)、低(XL组)剂量组、华蟾素片对照组(HC组),共5组,每组10只.各组用生理盐水及相应浓度宁夏密点麻蜥药物灌胃1 wk后处死,腹主动脉取血,离心,制备含药血清.用MTT法检测药物血清对人GC BCG-823细胞增殖活性的影响;用Westem blot检测方法测定GC细胞P53、Bax、MMP-9及E-cad蛋白表达水平,并进行统计分析.结果 含药大鼠血清各干预组OD均值小于生理盐水对照组;宁夏密点麻蜥高、中、低剂量组之间比较,P＜0.05;P53、Bax以及E-cad蛋白表达水平与生理盐水组比显著升高,MMP-9蛋白表达水平与生理盐水组比降低.随着血清药物浓度的增高,MMP-9的表达呈依赖性降低,P53、Bax以及E-cad的表达呈依赖性增强.结论 宁夏密点麻蜥能影响P53、Bax、MMP-9及E-cad蛋白表达水平,抑制人GC BCG-823细胞增殖,并诱导细胞凋亡,具有良好的抗癌作用.
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ERK1/2信号通路阻断剂PD98059对胃癌细胞MGC-803中RECK、MMP-9基因表达的影响
目的:探讨ERK1/2信号通路在RECK基因抑制侵袭转移中的作用.方法:体外培养人胃癌MGC-803细胞,采用MTT法观察胃癌细胞MGC-803增殖情况,Western blot检测P-ERK的蛋白表达,RT-PCR法和Western blot法检测RECK和基质金属蛋白酶9(MMP-9) mRNA和蛋白表达.结果:MTT法显示PD98059在一定范围内能够明显抑制胃癌MGC803细胞增殖,其作用具有时间依赖性及浓度依赖性,PD98059的有效浓度为25 μmol/L,在此浓度下有效时间为24 h;Western blot法检测结果显示PD98059能够抑制ERK1/2的磷酸化,即下调P-ERK1/2,从而使得ERK1/2信号传导途径失活;RT-PCR法和Western blot法检测结果显示PD98059能够浓度依赖性(25-100μmol/L)和时间依赖性(12-48h)刺激培养的胃癌MGC803细胞RECK mRNA和蛋白表达增加,MMP-9 mRNA和蛋白表达下降.结论:PD98059可以通过抑制ERK1/2信号途径,上调RECK的表达,下调MMP-9的表达,从而抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖、生长.
关键词： ERK1/2信号通路 人胃癌细胞 RECK基因 基质金属蛋白酶9 PD98059 -
反义RNA对胃癌细胞MT1-MMP基因表达和侵袭性的抑制作用
目的:膜研究膜型-1基质金属蛋白酶(MT1-MMP)反义RNA对人胃癌细胞BGC823靶基因表达和侵袭特性的影响.方法:利用基因重组技术构建人MT1-MMP反义RNA真核表达载体,转染人胃癌细胞BGC823,应用RT-PCR、MTT、明胶酶谱和体外侵袭实验等方法观察人胃癌细胞BGC823转染前后,MT1-MMP mRNA表达水平、细胞生长、明教酶A活性及细胞体外侵袭能力等指标的变化.结果:成功构建了MT1-MMP反义RNA真核表达载体pasMMP14,将其转染胃癌细胞BGC823后,与阴性对照组相比,实验组MT1-MMP mRNA表达水平降低,抑制率为36%.转染48 h,明教酶A的活化受到了明显抑制.转染72 h,细胞增殖明显受抑(t=2.358,P＜0.01 vs 空白组;t=2.727P＜0.01 vs 阴性组).实验组的穿膜细胞数明显低于空白对照组和阴性对照组(t=5.744,P＜0.01;t=5.695,P＜0.01).结论:反义RNA对人胃癌细胞MT1-MMP基因表达和侵袭能力具有明显的抑制作用,MT1-MMP基因可作为胃癌抗侵袭治疗的分子靶点.
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KDR启动子驱动双自杀基因靶向杀伤人胃癌细胞的作用
目的:探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的双自杀基因体系对人胃癌细胞SCG7901的靶向杀伤作用.方法:应用重组腺病毒AdEasv-KDR-CDglyTK体外感染实验组SCG7901细胞株和对照组HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞杀伤效应及其旁观者效应.结果:携带双自杀基因和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达.已转染腺病毒的SCG7901和未转染SCG7901的细胞在细胞生长方面无显著性差异(t=0.224,P=0.823).已转染腺病毒的HepG2细胞和未转染HepG2的细胞在细胞生长方面也无显著性差异(t=0.120,P=0.904).在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性,SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性(F=109.43,P=0.000).融合基因的疗效优于单一自杀基因(F=162.22,P=0.000).将感染腺病毒细胞与未感染细胞以不同比例混和培养,观察到该体系明显的旁观者效应.结论:KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并存在旁观者效应.
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葡萄糖神经酰胺合成酶基因在人胃癌细胞SGC-7901及SGC-7901/VCR的表达和意义
目的:研究葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)基因在人胃癌细胞SGC-7901和SGC-7901/VCR的表达并探讨其对人胃癌发生、发展的意义.方法:体外培养人亲本敏感胃癌细胞SGC-7901和人耐长春新碱胃癌细胞SGC-7901/VCR.采用MTT法检测半数细胞抑制浓度(IC50)和SGC-7901/VCR耐药倍数;RT-PCR法检测SGC-7901和SGC-7901/VCR两种细胞GCS mRNA的表达,免疫组化法测定GCS蛋白表达水平.结果:SGC-7901和SGC-7901/VCR的IC50分别为1.40±0.06和86.20±0.50 mg/L.SGC-7091/VCR细胞耐药指数是亲本细胞SGC-7901的61倍,SGC-7901和SGC-7901/VCR两种细胞均有GCS mRNA表达,且SGC-7901/VCR细胞GCSmRNA表达水平(GCS指数为3.9)较SGC-7901细胞(GCS指数为0.5)有显著升高(P＜0.05),耐药细胞GCS蛋白表达阳性率(65%)显著高于亲本细胞(18%)(P＜0.05).结论:GCS基因在人胃癌耐药细胞和亲本敏感细胞均有表达,耐药细胞GCS mRNA及蛋白均高表达.GCS可能参与了胃癌的发生过程,且与肿瘤多药耐药有密切关系.
关键词： 人胃癌细胞 葡萄糖神经酰胺合成酶 基因表达 多药耐药 -
温热对BGC-823胃癌细胞HSP70表达及超微结构的影响
目的:探讨热处理BGC-823人胃癌细胞后,HSP70表达与细胞凋亡及超微结构改变的关系.方法:采用MTT法及流式细胞术对BGC-823胃癌细胞株在42℃及43℃两个温度,分别热处理2、7、12 h后,进行细胞增生、凋亡及HSP表达测定,同时在透射电镜下观察肿瘤细胞的超微结构特点.结果:高热对肿瘤细胞的杀伤作用明显,各加热组均可使BGC-823细胞高表达HSP70,在43℃条件下热休克7 h后,HSP70表达量高,并与细胞的凋亡有关.随着时间延长,对肿瘤细胞超微结构的影响加大.大多数细胞表现出染色质浓缩、DNA分裂的形态学特征.结论:热处理对肿瘤细胞具有杀伤作用,43℃/7 h为诱导BGC-823细胞凋亡的适宜条件,凋亡是BGC-823细胞热诱导死亡的重要机制,热处理后HSP70过表达可能与肿瘤细胞凋亡有关.
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塞来昔布对胃癌细胞生长的抑制作用
目的:观察特异性COX-2抑制剂塞来昔布对体外培养的SGC7901胃腺癌细胞生长及环氧化酶活性的作用.方法:采用MTT比色法观察不同浓度的塞来昔布对COX2高表达的人胃癌细胞SGC7901生长的影响,免疫细胞化学方法检测COX-2蛋白的表达;同时用相差显微镜动态观察细胞形态及生长方式的改变.结果:塞来昔布25 μmol/L对SGC7901细胞生长无抑制作用,作用72 h后细胞存活率为80.0%;50-100μmol/L的塞来昔布与SGC7901细胞相互作用24 h细胞存活率分别为88.5%,80.7%,42.3%,48 h细胞存活率分别为79.8%,60.2%,40.1%,72 h细胞存活率分别为58.6%,37.8%、21.2%.塞来昔布同时减少COX-2蛋白表达;当浓度为50μmol/L的塞来昔布与胃癌SGC7901细胞作用后,COX-2表达明显下降,并呈剂量依赖关系.结论:塞来昔布能抑制SGC7901胃癌细胞株的生长及COX-2蛋白表达.
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温郁金对胃癌细胞的抑制作用及其对IGF-I、IGF-Ⅱ表达的影响
目的:探讨温郁金对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用及其作用机制.方法:采用超临界二氧化碳萃取法提取温郁金挥发油成分,以氟尿嘧淀(5-Fu)为阳性对照药物,采用MTr法,测定温郁金提取物对体外培养胃癌细胞SGC-7901增生的影响;应用放射免疫测定法分析温郁金提取物对细胞培养液中IGF-I、IGF-Ⅱ浓度水平的影响.结果:超临界二氧化碳萃取法提取温郁金获得温郁金提取物1和提取物2.温郁金提取物1、提取物2对胃癌细胞的生长有显著的抑制作用(均P＜0.01),且抑制率随药物浓度的升高而增高,存在明显的量效关系.200 mg/L浓度的温郁金提取物1和提取物2对胃癌细胞生长的抑制率分别为64.44%、60.80%,在这个浓度水平,其抑制肿瘤细胞生长作用与阳性对照药物5-Fu效果相当.温郁金提取物1、提取物2能降低胃癌细胞培养液中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ的浓度水平(均P＜0.05).结论:温郁金提取物对人胃癌细胞SGC-7901生长有抑制作用,其抑癌作用的机制可能与抑制胃癌细胞分泌IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ有关.
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中药复方胃康宁对人胃癌细胞VEGF及其受体表达的作用
目的:研究胃癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt、KDR的表达与中药胃康宁的调控作用.方法:以不同剂量的中药复方胃康宁制剂给SD大鼠灌胃制备含药血清,然后以含药血清培养胃癌细胞,共同培养两代后,分别用免疫组化法和RT-PCR检测不同剂量组胃癌细胞中VEGF及其受体Flt、KDR的表达情况.结果:与对照组(VEGF162.78±0.58,Flt:172.65±0.65)相比,VEGF及其受体Flt在用药组胃癌细胞中的表达减弱,染色变浅(VEGF:186.82±0.22,195.35±0.45,1 72.62±0.52,Flt:198.44±0.44,188.66±0.46,197.01±0.91,P＜0.05),并且与用药剂量有一定的关系;VEGF mRNA及其受体Flt mRNA、KDR mRNA在用药组胃癌细胞中的表达也受到抑制.结论:中药胃康宁对胃癌细胞血管内皮生长因子及其受体Flt、KDR的表达有抑制作用.
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大黄素诱导人胃癌细胞MKN45凋亡及其分子机制的研究
目前国内外一些学者的研究成果表明:大黄素具有诱导多种肿瘤细胞的凋亡效应,具有细胞毒潜能,其诱导凋亡的信号转导途径主要有Bax-caspase途径、PKC途径、Fas途径及ROS途径等[1-3].本研究旨在观察大黄素对人胃癌细胞MKN45的抑制作用并探讨其作用机制.
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苦参碱联合T淋巴细胞对人胃癌细胞的杀伤作用
苦参碱是从中药苦参的干燥根中提取的一类活性物质,它在防治肝炎、抗肝纤维化、抗病毒、抗肿瘤等方面有重要应用价值[1-2].研究结果表明,它的毒副作用小,能提高机体免疫力[3-4].本研究利用植物血凝素(PHA)-L、单克隆抗淋巴细胞抗体(OKT)-3、白细胞介素(IL)-2诱导活化T淋巴细胞,探讨苦参碱对人外周血T细胞增殖的影响及其联合T细胞对体外胃癌细胞的杀伤的影响.
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不饱和脂肪酸对人胃癌细胞蛋白激酶B信号通路的调控作用
目的 研究不饱和脂肪酸对人胃癌细胞蛋白激酶B(PKB/Akt)信号通路的调控作用.方法 取胃癌患者肿瘤组织,移植到重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠上,将移植瘤组织酶解消化,分离出细胞进行传代培养.然后将传代细胞分为5组:低中高3个浓度实验组(不饱和脂肪酸0.3,0.6,1.2 mg· L-1),对照组(5-氟尿嘧啶10 mg·L-1),溶剂对照组(二甲基亚砜30 μL·L-1),给药后培养48 h.用噻唑蓝(MTT)法检测不饱和脂肪酸对人胃癌细胞的增殖抑制作用,用酶联免疫吸附法检测胃癌细胞中p21、双微体基因(MDM2)及PKB/Akt表达水平.结果 高中低3个浓度实验组入胃癌细胞增殖抑制率比对照组分别升高了31.7％,55.51％,68.28％;这3组的p21和MDM2水平比对照组分别升高了4.39％,80.12％,161.36％和19.81％,97.76％,207.35％;这3组的PKB/Akt水平比对照组降低了13.31％,57.69％,78.71％.结论 不饱和脂肪酸对人胃癌细胞增殖的抑制作用主要与升高肿瘤细胞内p21与MDM2水平和抑制PKB/Akt信号通路的活性有关.
关键词： 不饱和脂肪酸 人胃癌细胞 重症联合免疫缺陷小鼠
