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冻融法提取植物血凝素的研究
目的:采用不同缓冲液,确定冻融法提取植物血凝素的可行性.方法:在生理盐水、PBS、Tris、冰醋酸的不同缓冲液中,以吸收值、提取率和血凝效价为指标,比较传统浸提法与冻融法的差异.结果:表明采用PBS缓冲液的冻融法提取效果佳(P<0.05),提取物的蛋白含量为312.33 mg/g,提取率为7.25%,血凝效价为7.结论:认为冻融法提取PHA法可行,并以PBS缓冲液好.
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结核菌素纯蛋白衍生物对哮喘儿童外周血单个核细胞IL-12、IFN-γ/IL-4表达的影响
哮喘涉及的免疫机制复杂,主要表现为Th1/Th2细胞功能失衡,即Th1细胞功能下降和Th2细胞功能亢进[1].儿童结核菌素反应阳性提示哮喘和变应性发生率降低;随后的研究认为卡介苗及其产物有Th1类免疫调节作用[2].本文通过观察结核菌素纯蛋白衍化物(PPD)对哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMC)产生Th1类细胞因子IL-12和IFN-γ、Th2类细胞因子IL-4的影响,并与植物血凝素(PHA-m)刺激的结果比较,探讨PPD在哮喘发病中的作用及价值.
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粉尘螨两种溶性抗原糖蛋白的组分与糖链研究
目的研究水溶性和尿素溶性粉尘螨糖蛋白的组分及结合糖链的构成. 方法用粉尘螨脱脂干粉提取水溶性抗原(Der fA)和尿素溶性抗原(Der fU),经SDS-PAGE,Western blot,免疫染色,胶体金染色和糖定性检测两种抗原糖蛋白的组分,并用9种HRP-植物血凝素进行结合糖链鉴定. 结果 Der fA显示4条蛋白带,分别为18 ku、30 ku、50 ku和58 ku,Der fU显示2条蛋白带(46 ku、58 ku),其中58 ku糖蛋白检测阳性.Der fA存在α-甘露糖(α-Man)、N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAC)、α-葡萄糖(α-Glc),不存在寡糖(Oligosaccharide)、岩藻糖(α-Fuc)、β-半乳糖(β-Gal)、β-半乳糖-乙酰氨基半乳糖(β-Gal-GalNAC)及唾液酸(AS);Der fU只存在α-甘露糖,不存在其它7种糖链和唾液酸. 结论α-甘露糖是粉尘螨优势糖蛋白,其次是N-乙酰葡萄糖胺和α-葡萄糖.
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曼氏裂头蚴蛋白分解酶的糖链研究
目的研究曼氏裂头蚴蛋白分解酶结合糖链的构成.方法用SDS-PAGE分离蛋白,经酸处理、提取Frl和Fr I;用Western-blot分离出蛋白分解酶,分子质量为23 ku;用糖定性检测和9种HRP-植物血凝素进行结合糖链鉴定.结果23 ku蛋白酶与ConA、LCA、WGA、PHA-E4、UEA-1呈现明显反应.结论证明此酶至少由α-甘露糖(α-Man)、α-葡萄糖(α-Glc)、N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)2、岩藻糖(α-Fuc)、寡糖(Oligosaccharide)构成的糖链.
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PHA诱导的CIK细胞的生物学特性及其对K562细胞杀伤活性影响的研究
本研究探讨植物血凝素(PHA)诱导的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与传统方法制备的CIK细胞的体外增殖能力、效应细胞含量和对K562细胞杀伤活性影响并分析其差异.分离健康人外周血单个核细胞(PBMNC),分甲、乙两组,其中甲组用传统培养方法从PBMNC制备的传统CIK细胞,乙组采用PHA诱导单个核细胞制备获得的新型CIK细胞.在培养过程中,每3d统计各组细胞培养体系中细胞活率和细胞绝对值,并在培养至第15天时,用流式细胞仪分别检测两组细胞免疫表型,统计CD3+ CD56+、CD3+ CD8+和CD3+ CD4+细胞占各培养体系总细胞数的比例;同时用CCK-8试剂盒分别检测两组细胞在不同效靶比时对K562细胞的杀伤活性.结果表明:采用PHA诱导制备新型CIK细胞的方法比传统方法更能促进细胞增殖(P<0.05),且细胞活率都保持在90%以上.两组CD3+ CD8+、CD3+ CD56+细胞比例都显著升高.与传统方法比,新方法的CD3+ CD8+细胞升高比例存在显著差异(P<0.05),CD3+ CD56+细胞提升比例不存在差异,同时CD3+ CD4+下降的比例也不存在差异.效靶比为5:1、10:1、20:1、40:1时,PHA诱导制备的新型CIK细胞比传统方法制备的CIK细胞对K562细胞的杀伤活性更强(P<0.05),且随着效靶比的升高两种效应细胞对K562细胞的杀伤活力的差异明显性也增加.结论:与传统方法相比,PHA可明显提高CIK细胞的增殖能力,调高CD3+ CD8+细胞的比例,增强CIK细胞对K562细胞的杀伤活性,这为白血病及其他肿瘤的细胞免疫治疗提供一种新来源的CIK细胞和可靠依据.
关键词: 植物血凝素 细胞因子诱导的杀伤细胞 K562细胞 杀伤活性 -
PHA对CIK细胞增殖和细胞毒作用影响的研究
为了探讨植物血凝素(PHA)对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)增殖和细胞毒作用的影响,分离健康人外周血单个核细胞,用含自体血浆的培养液培养CIK细胞和PHA先刺激24小时的PHA-CIK细胞.用51Cr释放法检测两种细胞对K562细胞、食管癌细胞和初治急性白血病病人骨髓幼稚细胞的细胞毒作用.结果表明:两种细胞体外增殖能力较强,且PHA-CIK细胞强于CIK细胞(P<0.05).两种细胞对不同靶细胞均有较强的杀伤能力.在效靶比为20:1、10:1时,PHA-CIK细胞对K562细胞和初治急性白血病病人骨髓幼稚细胞的杀伤作用强于CIK细胞(P<0.05).结论:PHA增加CIK细胞的增殖能力和抗肿瘤活性,可作为生物治疗应用于临床.
关键词: 细胞因子诱导的杀伤细胞 植物血凝素 细胞增殖 细胞毒作用 -
骨髓间充质干细胞对T细胞亚群的影响
本研究探讨人骨髓间充质干细胞对植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)刺激引起的T细胞增殖的影响和可能机制.应用CD3+磁珠分选T淋巴细胞,从骨髓分离出的间充质干细胞经照射后与T细胞共培养过夜,经PHA(5μg/ml)作用72小时后,应用BrdU检测T细胞的增殖情况,应用流式细胞术检测T细胞的Annexin V/PI的水平.对未经照射的骨髓间充质干细胞处理的T细胞,用PHA处理72小时后收集T细胞,应用流式细胞术检测CD4,CD8以及CD4和CD25的表达,同时设立未经PHA处理的T细胞与照射的骨髓间充质干细胞共培养组,及未经骨髓间充质干细胞处理的T细胞组.结果表明:骨髓间充质干细胞抑制PHA引起的T细胞的增殖,但不诱导T细胞凋亡.与未处理组相比,骨髓间充质干细胞处理组中T细胞的CD4+ CD8+细胞比例无显著变化;但在PHA作用下,骨髓间充质干细胞处理组中T细胞的CD4+亚群显著增加,且呈剂量依赖性,但CD4+ CD25+细胞亚群显著减少.结论:骨髓间充质干细胞抑制PHA刺激所引起的T细胞增殖,对CD8+T细胞的抑制作用更强,推测其可能的机制与CD4+调节性T细胞的参与有关,但与CD25+T调节细胞无明显关系.
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人骨髓间充质干细胞与脐血单个核细胞对混合淋巴细胞反应及PHA诱导转化的抑制
为研究和比较人骨髓间充质干细胞(MSC)和脐血单个核细胞在体外的免疫调控能力,从人骨髓分离培养间充质干细胞,用Ficoll分离得到脐血单个核细胞,分别以不同剂量加入到外周血混合淋巴细胞培养体系和植物血凝素(PHA)刺激的外周血淋巴细胞转化体系中,用MTT还原法测定细胞增殖,分别观察MSC和脐血单个核细胞对混合淋巴细胞反应和淋巴细胞转化的影响.结果显示,5×104,1×104MSC以及2×105脐血单个核细胞均抑制混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞增殖,而<1×104MSC和<2×105脐血单个核细胞对混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞增殖的抑制作用均不明显;5×104MSC对淋巴细胞增殖的抑制能力明显强于2×105脐血单个核细胞.结论:大剂量的骨髓间充质干细胞和脐血单个核细胞在体外对混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞转化均具有抑制作用,而且间充质干细胞的抑制能力强于脐血单个核细胞.
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再生障碍性贫血患者T细胞CD69的表达
CD69又称活化诱导分子(AIM)、早期活化抗原1(EA-1),是淋巴细胞活化早表达的膜表面分子.CD69由两个相同的单体经不同的糖基化后构成,属植物血凝素C超家族Ⅱ型膜贯通型糖蛋白,细胞外区C型凝集素(钙离子依赖性)有一个N结合型糖链附着部位[1].
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白细胞分化抗原3单克隆抗体检测T细胞功能的研究
自80年代以来,发现可用CD3单克隆抗体(单抗)作为特异性刺激原激活T淋巴细胞,诱导有丝分裂反应,促进细胞因子产生[1].以检测T淋巴细胞功能.本课题探讨CD3单抗单独或协同非特异性刺激原植物血凝素(PHA)诱导外周血淋巴细胞(PBL)增殖转化、细胞因子产生情况.一、对象与方法
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甘露糖结合植物血凝素不足与儿童早期急性呼吸道感染有关
急性呼吸道感染(ARI)是儿童常见的感染,2岁以下儿童发病率尤高.感染的危险因素包括男性、被动吸烟以及生活条件拥挤.
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乙型肝炎患者外周血单个核细胞分泌IFN-γ的实验研究
目的:探讨外周血单个核细胞(PBMC)分泌γ干扰素(IFN-γ)水平在曼性乙型肝炎发生、发展中的意义.方法:采用ELISA法测定20名正常人和44例HBV感染者的PBMC经植物血凝素(PHA)刺激前后IFN-γ在上清液中的表达水平.结果:正常及患者组PBMC上清液中IFN-γ低水平的活性表达;经PHA刺激后其活性明显升高(对照组23.7±12.7升高至117.2±64.7 pe/mL,n=20,t=10.41,P<0.01;轻度组24.6±9.3升高至57.4±27.1 pg/mL,n=21,t=4.92,P<0.01;中度组30.1±15.5升高至81.6±42.2 pg/mL,n=15,t=4.45,P<0.01;重度组35.6±17.9升高至114.5±49.3 pg/mL,n=8,t=4.26,P<0.01),但患者组IFN-γ水平显著低于正常对照组(177.2±64.7vs57.4±29.1、81.6±42.2、114.5±49.3 pg/mL,t值分别为7.50、5.28和2.77,P<0.01);患者组IFN-γ与血清HBV-DNA水平呈明显负相关(γ-0.49,P<0.01).结论:乙型肝炎慢性化以及高复制状态可能与PBMC分泌IFN-γ性降低有关.
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趋化素样因子1在支气管肺损伤与重建中的作用
近,北京大学医学部马大龙教授及韩文玲博士利用反向生物学途径,创建了一种发现新细胞因子基因的方法:即根据人髓性白血病U937细胞系在有丝分裂原植物血凝素(PHA)刺激下能够产生多种细胞因子以及白细胞介素10(IL-10)能够广泛抑制细胞因子合成的生物学原理,利用抑制性减数杂交(SSH)技术,查找未被报道并受IL-10抑制的U937细胞表达的基因,结果成功地发现并克隆出一个新的细胞因子基因--趋化素样因子1(CKLF-1),获中国及国际专利.
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胰腺炎相关蛋白
胰腺炎相关蛋白(pancreatitis as-sociated protein,PAP),是在1 984年由Keim等[1]在大鼠急性胰腺炎模型的胰液中发现,由于这种蛋白在急性胰腺炎时胰液中测得,而在正常胰腺测不到,因而将其命名为"胰腺炎相关蛋白".PAP属C类植物血凝素基因家族,在急性胰腺炎时过度表达,与急性胰腺炎的严重程度、临床过程密切相关.除胰腺外,PAP还广泛存在于回肠、空肠、十二指肠等处,经表达PAP的组织及肾脏迅速从血循环清除.另外,PAP还与某些消化道肿瘤等疾病有关.现就PAP的生物学特性进行简要的介绍.一、PAP的生物学特点Keim等[1]从蛙皮素或牛磺胆酸钠诱发的大鼠急性胰腺炎模型胰液中提取了PAP,用双向PAGE推测出PAP的分子量约为16 000,等电点为8.2.进一步研究发现PAP合成于胰腺组织的粗面内织网,存储于酶原颗粒中.PAP在正常胰腺细胞及胰液中几乎测不到,而在急性胰腺炎时胰腺组织中的浓度可增加至少100倍.1. PAP的蛋白及基因结构:PAP在胰腺中以前蛋白的形式存在,由175个氨基酸组成,其N端有26个氨基酸组成的信号肽,去掉信号肽后变为PAP蛋白分泌入胰液[2].
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槲寄生植物血凝素用于预防表浅性膀胱癌复发的评价:二期随机临床研究报告
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苦参碱联合T淋巴细胞对人胃癌细胞的杀伤作用
苦参碱是从中药苦参的干燥根中提取的一类活性物质,它在防治肝炎、抗肝纤维化、抗病毒、抗肿瘤等方面有重要应用价值[1-2].研究结果表明,它的毒副作用小,能提高机体免疫力[3-4].本研究利用植物血凝素(PHA)-L、单克隆抗淋巴细胞抗体(OKT)-3、白细胞介素(IL)-2诱导活化T淋巴细胞,探讨苦参碱对人外周血T细胞增殖的影响及其联合T细胞对体外胃癌细胞的杀伤的影响.
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4种小儿血液病对植物血凝素皮试反应的观察
植物血凝素(PHA)是一种低聚糖与蛋白质的复合物,属高分子糖蛋白类,有促进淋巴细胞有丝分裂的作用.注射于皮内可引起红斑,在一定程度上反映人体的非特异性细胞免疫功能[1,2].
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PHA、CD3、与IL-2协同诱导PBMC过继免疫治疗恶性脑胶质瘤的实验研究
目的 提高人脑胶质瘤过继免疫治疗的效果,探索治疗脑胶质瘤的新途径。方法 用植物血凝素(PHA)、抗CD3单抗(CD3)和IL-2共同诱导人外周血单个核细胞(PBMC),诱导、扩增新型抗胶质瘤效应细胞PHA-CD3AK细胞,并与CD3AK细胞在某些生物学方面进行了比较。结果 两组效应细胞增殖曲线均于第6天达高峰,峰值可见,PHA-CD3AK细胞>CD3AK(P<0.05);PHA-CD3AK细胞扩增倍数明显高于CD3AK细胞(P<0.05);两组效应细胞于培养的第6、8、10天所测得的杀伤胶质瘤细胞BT325活性可见,PHA-CD3AK细胞>CD3AK细胞(P<0.05)。结论 PHA、CD3和IL-2具有协同增强作用,使PHA-CD3AK细胞成为较CD3AK细胞增殖能力、杀伤活性更强的免疫效应细胞,且IL-2用量减少,为胶质瘤的过继免疫治疗打下了理论基础。
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人间充质干细胞Stro-1+和Stro-1-亚群免疫抑制作用差异的体外研究
目的 探讨人Stro-1+和Stro-1-间充质干细胞(MSCs)体外免疫抑制作用的差异.方法 从骨髓细胞中分离单个核细胞接种于75cm2的培养瓶中,培养体系为Dexter培养液.当细胞在瓶底贴壁生长达50%融合时消化,并与Stro-1抗体共孵育.再将所获Stro-1+和Stro-1-MSCs扩增15天(中位数)后进行流式细胞仪分析.设立单向混合淋巴细胞反应(MLR,于96孔板中加入反应淋巴细胞及刺激淋巴细胞各1×105/孔)及非特异性丝裂原刺激的淋巴细胞增殖反应体系(于96孔板中加入人外周血淋巴细胞1×105/孔、植物血凝素10μg/ml及白介素-2 500U/ml).在两反应体系中分别加入1×103~3×104个经照射的Stro-1+或Stro-1-MSCs,检测其对淋巴增殖反应的影响.结果 原代贴壁细胞中含中位数为9%(5%~26%)的Stro-1+MSCs,该细胞亚群表达更高的MSCs表型;在MLR和非特异性丝裂原刺激的淋巴增殖体系中,Stro-1+和Stro-1-MSCs均可引起数量依赖性的增殖抑制效应(单向MLR中,当Stro-1-MSCs的数量为1×103时,该抑制效应消失);各个剂量组中,Stro-1+MSCs的抑制效应均显著高于相同剂量的Stro-1-MSCs(P<0.05).结论 人MSCs中的Stro-1+亚群具有更强的免疫抑制作用,推断该细胞亚群为更原始、均一性更佳的骨髓基质细胞.
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广西1999年医药卫生科研进展(上)
1.CD3AK/IL-2加中药治疗原发性肝癌的研究:广西肿瘤防治研究所(肿瘤医院)采用正常人外周血单个核细胞(淋巴细胞)经加用抗CD3单克隆抗体辅助以少量的基因重组人白细胞介素2(IL2)和植物血凝素(PHA)诱导外周血淋巴细胞,成功地研制出一种能识别并具有抗瘤活性和免疫效应的抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(CD3AK细胞).