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英蓝超滤技术助力离子色谱分析
糖类是速溶咖啡的重要成分之一,速溶咖啡中的糖主要有阿拉伯糖、果糖、半乳糖、甘露糖、蔗糖等.这些糖类结构略有不同,其含量的不同会对咖啡的香气和口感产生一定的影响.因此,需要对咖啡中糖的成分和含量进行分析.
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5种不同石斛的多糖与氨基酸及甘露糖的含量比较
目的:比较不同种石斛部分化学成分的差别.方法:采用苯酚-硫酸法测定样品中多糖含量,茚三酮显色法测定样品中氨基酸的含量,内标法测定样品中甘露糖的含量,通过定量测定,比较5种石斛中总多糖、氨基酸和甘露糖的含量差异.结果:5种不同种类的石斛中多糖、氨基酸、甘露糖的含量存在较大的差异.多糖含量,细茎石斛、金钗石斛、马鞭石斛相近,其中铁皮石斛明显高于其余4种石斛,鼓槌石斛明显低于其余的4种石斛;氨基酸含量,马鞭石斛高于其他4种石斛;甘露糖含量,铁皮石斛明显高于其余4种石斛.结论:5种不同石斛的总多糖、氨基酸和甘露糖的含量存在较大的差异,但就所含的相同化学成分总体而言铁皮石斛的质量好于其他4种石斛.
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PMI基因作为选择标记的植物表达载体构建及转化白花丹参体系的建立
目的:构建含有大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶(6-phosphomannose isomerase,PMI)基因并替换潮霉素抗性(hygromycin,hyg)基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI,同时建立以PMI/甘露糖为筛选标记的白花丹参转基因体系.方法:首先从大肠杆菌Escherichia coli DH5α中克隆PMI基因,然后以PMI基因替换植物表达载体pCAMBIA1305中的hyg基因,构建了以PMI基因为选择标记基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI,并用电击转化方法导入根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens LBA4404中,用叶片浸染法转化白花丹参.结果:在白花丹参MS +6-BA 1.5 mg·L-1 +NAA0.1mg·L-1固体分化培养基中附加20 g·L-1-甘露糖和10g·L-1蔗糖为碳源的选择压力下,pCAMBIA1305-PMI的转化率为23.7％,对再生植株用PCR检测证实了PMI基因的导入.结论:建立了以PMI-甘露糖为选择系统的白花丹参转基因体系,可应用于后续目的基因的转化奠定了基础.
关键词： 6-磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因 甘露糖 白花丹参 转基因筛选标记 -
云南栽培铁皮石斛适宜采收期研究
为了确定云南省不同产地栽培铁皮石斛的适宜采收期,对云南6个产地大棚栽培的铁皮石斛进行周年采样,每月采集1次,检测样品的折干率、甘露糖与葡萄糖峰面积比、浸出物、多糖和甘露糖含量,对不同采收期铁皮石斛的产量(折干率)及质量(指标性成分)进行综合评价.实验结果表明:不同产地云南省栽培铁皮石斛样品折干率在1-4月为高峰期,醇溶性浸出物在9-12月含量较高,多糖和甘露糖含量在1-4月达到高峰期,在10月—翌年2月,甘露糖与葡萄糖峰面积比符合药典标准.根据药典标准要求,综合测定的产量及质量的结果,云南省各产地栽培铁皮石斛的适宜采收期为12月至翌年2月.
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铁皮石斛茎、叶多糖含量及多糖部位柱前衍生化-高效液相色谱指纹图谱比较研究
为更好地开发利用铁皮石斛叶资源,该文采用苯酚-硫酸比色法和PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)柱前衍生化-HPLC-DAD-ESI-MSn对铁皮石斛茎、叶中多糖含量、单糖组成、多糖中甘露糖和葡萄糖的含量及多糖部位HPLC指纹图谱进行了比较研究;并用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价软件2004A”建立了对照图谱和进行了相似度评价.结果表明,铁皮石斛茎与叶多糖含量,组成多糖的单糖种类,各单糖组成比例及单糖含量明显不同.叶中多糖含量约为相应茎中多糖含量的1/3.茎多糖主要由甘露糖和葡萄糖组成;叶多糖为酸性杂多糖,由甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,但茎和叶多糖中均以甘露糖组成比例高.茎中甘露糖和葡萄糖的含量均比相应叶中高.14个不同种植基地铁皮石斛茎和叶多糖部位指纹图谱相似性较好,相似度均在0.9以上.该文为进一步研究铁皮石斛叶多糖中各单糖连接顺序、连接位置和多糖药理活性及申报铁皮石斛叶新资源提供了研究资料.
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慢性HBV感染者甘露糖结合蛋白基因多态性与疾病进展及与HBV DNA相关性的研究
目的 探讨慢性HBV感染者甘露糖结合蛋白(MBP)基因多态性对慢性乙型肝炎患者疾病进展的影响及与HBV DNA载量的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法和实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术对244例慢性乙型肝炎患者、151例肝硬化患者和88名正常对照者的MBP基因第54号密码子多态性和血清HBV DNA载量进行检测.结果 CHB轻、中度组患者MBP基因GGC/GAC基因型频率和GAC等位基因频率与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；CHB重度组、代偿性LC组、失代偿性LC组MBP基因GGC/GAC基因型频率和GAC等位基因频率显著高于正常对照组(P＜0.05)；其中失代偿性LC组突变率高,为36.5％.慢性HBV感染者MBP基因GGC/GAC基因型频率和GAC等位基因频率不随HBV DNA载量而变化(P＞0.05).结论 MBP基因第54号密码子突变与HBV DNA载量无明显关系,而与慢性HBV感染进展有关.
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尿路致病性大肠杆菌fimC和fimH基因诱导小鼠免疫应答的初步研究
尿路致病性大肠杆菌(UPEC)是引起尿路感染的主要病原菌.此类大肠杆菌80%携带Ⅰ型菌毛.现已证明UPEC的Ⅰ型菌毛的编码基因位于染色体上,由9个基因组成.其中fimH基因编码的蛋白--FimH粘附素,能与泌尿道上皮细胞表面甘露糖受体结合并可诱导细菌的细胞内在化.FimC蛋白是FimH蛋白的伴侣分子,在保持Ⅰ型菌毛的折叠和长度上起着关键的作用,可增强FimH蛋白的免疫原性[1].Langermann等制备FimH和FimC纯化蛋白混合疫苗,可以诱发动物产生抗Ⅰ型菌毛抗体,使猴对UPEC的感染有保护作用[2,3].
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甘露糖结合植物血凝素不足与儿童早期急性呼吸道感染有关
急性呼吸道感染(ARI)是儿童常见的感染,2岁以下儿童发病率尤高.感染的危险因素包括男性、被动吸烟以及生活条件拥挤.
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甘露糖结合蛋白基因突变与肝硬化及肝癌关系的研究
目的探讨甘露糖结合蛋白(MBP)基因突变与肝硬化及肝癌的关系.方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法和实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术针对代偿性肝硬化(CC)患者73例、失代偿性肝硬化(DC)患者78例、肝细胞癌(HCC)患者35例和对照组88例健康者的MBP基因第54位密码子多态性进行检测.结果 HCC组的MBP基因GGC/GAC基因型频率和GAC等位基因频率与对照组比较,差异无统计学意义(P ＞ 0.05).CC组、DC组MBP基因GGC/GAC基因型频率和GAC等位基因频率均显著高于HCC组和对照组(P ＜ 0.05),其中DC组突变率高(36.5%).结论 MBP第54位密码子与肝硬化进展相关,但可能并非HCC发展中的重要因素.
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甘露糖敏感型绿脓杆菌制剂对肝癌细胞周期的作用机制研究
目的 探讨甘露糖敏感性绿脓杆菌制剂(pseudomonasaeruginosa mannose sensitive haemagglutination vaccine,PA-MSHA)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞周期的作用及其机制.方法 培养人肝癌细胞株MHCC97L及HepG2,以不同剂量的PA-MSHA作用于肝癌细胞.MTT实验检测PA-MSHA对细胞增殖的影响.流式细胞技术检测PA-MSHA对细胞周期的作用.Western blot检测PA-MSHA作用前后细胞周期蛋白Cyclin D1、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)以及细胞周期蛋白激酶抑制剂p21和p27的表达情况.结果 与对照组相比,PA-MSHA显著抑制MHCC97L和HepG2细胞的增殖,其作用呈剂量及时间依赖性(P＜0.05).PA-MSHA显著诱导肝癌细胞周期阻滞,PA-MSHA作用后G0-G1期和G2-M期细胞比例显著增高,而S期细胞比例则显著下降(P＜0.05).PA-MSHA显著抑制Cyclin D1、CDK2、PCNA蛋白的表达,而促进p21和p27的表达.外源性甘露糖可显著抑制PA-MSHA对肝癌细胞增殖和周期的作用(P＜0.05).结论 PA-MSHA通过调控细胞周期相关蛋白来诱导HCC细胞周期阻滞,抑制细胞增殖.这一作用是通过肝癌细胞表面的甘露糖的介导实现的.
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Toll样受体与慢性病毒性肝炎
Toll样受体(toll-like receptor,TLRs)是近年来发现的在天然免疫和获得性免疫中起重要作用的一类模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)家族,通过识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP)主要指一类或一群特定的微生物病原体(及其产物)共有的某些非特异性、高度保守的分子结构,其可被非特异性免疫细胞所识别,如脂多糖(LPS)细菌内毒素、磷酸壁酸(LTA)、肽聚糖(PGN)、甘露糖、细菌DNA和病毒单链和双链RNA等.
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甘露糖化羧甲基壳聚糖与依替膦酸复合物纳米粒靶向结合M2型巨噬细胞的实验研究
目的 研究甘露糖化羧甲基壳聚糖与依替膦酸复合物纳米粒对M2型巨噬细胞的靶向性结合能力,为以M2型巨噬细胞为靶点治疗恶性肿瘤提供实验依据.方法 将甘露糖接枝于壳聚糖,再与依替膦酸通过离子交联反应形成纳米粒.体外应用荧光酶显微镜及荧光酶标仪观察M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞、成纤维细胞、人肺癌细胞株A549和人结肠癌细胞株SW620对该纳米粒的摄取情况,评估该纳米粒对5种细胞的靶向结合能力.结果 通过荧光显微镜观察发现,该纳米粒对M2型巨噬细胞有较为特异的靶向能力.荧光酶标仪检测M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞、人结肠癌细胞株SW620、人肺癌细胞株A549和成纤维细胞的相对荧光值(RFU)分别为(3.59±0.23)、(18.80±0.47)、(3.45±0.05)、(3.39±0.17)和(3.41±0.29).经单因素方差分析结果显示,5种细胞的RFU值比较,差异有统计学意义(P﹤0.01);其中,M2型巨噬细胞的RFU值高,而其他细胞之间的RFU值相近.结论 甘露糖化羧甲基壳聚糖与依替膦酸复合物纳米粒对M2型巨噬细胞具有靶向结合能力,以M2型巨噬细胞为靶点的药物载体研究可能为肿瘤的靶向治疗提供依据.
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中国汉族军人甘露糖结合凝集素基因多态性分析
目的:分析中国汉族人群甘露糖结合凝集素(mannose binding lectin,MBL)基因分型及单倍体分型.方法:联合应用引物序列特异性PCR扩增(PCR-SSP),序列特异性寡核苷酸探针杂交(PCR-SSOP)方法对AB,HL,PQ和XY多态性位点进行基因分型及单倍体分型,并利用该方法对212名中国汉族军人的DNA样品进行4个多态性位点的系统筛查.结果与结论:MBL基因4个多态性位点以5种单倍体型形式存在:HYPA,LYPA,LYPB,LXPA和LYQA,212份样本的单倍体型频率从高到低依次为HYPA(52.15%),LXPA(16.05%),LYPB(11.75%),LYQA(10.10%),LYPA(9.85%),共发现15种基因型,频率高的3种为:HYPA/HYPA(27.4%),HYPA/LXPA(14.2%)和HYPA/LYPB(12.7%).与已有研究比较,发现各民族之间的基因型频率相差较大,中国汉族人群的频率分布与亚裔人较为接近.
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甘露糖化hLYZ/eGFP融合蛋白的表达纯化及巨噬细胞定位
目的 利用毕赤酵母表达蛋白具有高甘露糖修饰的特性,在毕赤酵母中表达甘露糖化修饰的人溶菌酶(human lysozyme,hLYZ);进而利用巨噬细胞(macrophage,M)表面的甘露糖受体(mannose receptor,MR)将甘露糖化的人溶菌酶内吞入胞,为研究可入巨噬细胞杀灭其胞内感染菌的人溶菌酶提供基础.方法 为使人溶菌酶可以在酵母中产生N-甘露糖化修饰,在人溶菌酶的C端设计2个N-糖基化位点;通过在其C端融合增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP),观察人溶菌酶在巨噬细胞RAW264.7中的亚细胞定位;同时在其C端引入了His标签便于融合蛋白的纯化.毕赤酵母表达的hLYZ/eGFP与RAW264.7共孵育,借助激光共聚焦显微镜观察该融合蛋白能否进入RAW264.7;通过巨噬细胞甘露糖受体(macrophage mannose receptor,MMR)的竞争性配体甘露聚糖(mannan)的阻断实验,检测甘露糖化的人溶菌酶是否通过MMR介导内吞.结果 毕赤酵母表达的hLYZ/eGFP融合蛋白是相对分子质量(Mr)为(66～97)×103的弥散条带,肽N-糖苷酶F(PNGaseF)酶切后,该融合蛋白变为Mr均一的条带,与非糖基化hLYZ/eGFP融合蛋白的理论Mr一致.该融合蛋白与RAW264.7共孵育后,可见细胞质中存在eGFP的绿色荧光,而加入甘露聚糖可以抑制这一现象发生.结论 毕赤酵母表达的hLYZ/eGFP融合蛋白为高甘露糖型糖基修饰蛋白,该蛋白可以通过MMR介导内吞进入巨噬细胞.
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芦荟多糖的提取与含量测定
目的 研究芦荟多糖的提取和含量测定方法.方法 采用水提醇沉法提取芦荟多糖,以甘露糖标准液绘制标准曲线,用苯酚-硫酸、紫外分光光度法于490 nm波长处测定芦荟多糖的含量.结果 芦荟多糖含量为8.796 mg/ml.结论 该测定方法准确,重复性好,对芦荟多糖含量的测定获得满意结果.
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铁皮石斛中多糖和甘露糖含量测定方法的改进及与齿瓣石斛的比较研究
目的：改进铁皮石斛中多糖和甘露糖的含量测定方法并对铁皮石斛与齿瓣石斛中的多糖和甘露糖含量进行分析比较。方法：采用硫酸-苯酚法测定石斛中多糖的含量；采用高效液相色谱法测定石斛中甘露糖的含量。结果：多糖在2.54～12.87 mg· L-1范围线性关系良好（r＝0.9990），平均回收率为99.02％，RSD为2.6％（n＝6）；甘露糖的平均回收率为101.5％，RSD为1.7％（n＝9）。6批铁皮石斛药材多糖平均含量为45.94％，甘露糖平均含量为32.33％；9批齿瓣石斛药材多糖平均含量为45.12％，甘露糖平均含量为37.88％。结论：所建方法操作比较简单，准确可靠，重现性好，可用于控制铁皮石斛的质量。铁皮石斛与齿瓣石斛多糖含量相当，齿瓣石斛甘露糖含量高于铁皮石斛。
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柱前衍生化HPLC分析不同来源、不同生长年限铁皮石斛多糖的组成和含量
目的 建立柱前衍生化HPLC分析不同种植基地、不同生长年限铁皮石斛多糖中单糖的组成和主要单糖的含量,并根据含量水平进行聚类分析及判别分析.方法 铁皮石斛药材用乙醇脱脂,沸水提取得到的铁皮石斛多糖,用3.0 mol·L<'-1>盐酸水解,水解产物加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)进行衍生化,采用HPLC测定单糖衍生物;并利用SPSS16.0进行聚类分析及判别分析.结果 铁皮石斛多糖主要由甘露糖和葡萄糖组成,不同生长年限、9个种植基地的13批铁皮石斛样品甘露糖的含量范围为19.65%～34.27%,均符合药典标准;并随着生长年限的增加,甘露糖含量降低.不同生长年限的铁皮石斛甘露糖与葡萄糖峰面积比差异较大.聚类分析将13批样品按生长年限聚成3类;并建立了判别函数,回判准确率100%.结论 铁皮石斛多糖中单糖的组成和主要单糖的含量结合化学计量学方法 判别铁皮石斛的生长年限是切实可行的,该研究为铁皮石斛的质量评价和开发利用提供了实验依据.
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气相色谱法测定燕窝中醛糖的含量
目的建立燕窝中4种醛糖的分离分析方法.方法燕窝中的4种醛糖首先在2 mol·L-1的盐酸甲醇中水解20h,用氢氧化钾-甲醇中和后再在吡啶乙酸酐溶液中乙酰化.采用毛细管气相色谱法,HP-5柱,程序升温法进行测定.结果甘露糖、半乳糖、N-乙酰半乳糖和N-乙酰葡萄糖在0.032 2～0.161,0.316～1.58,0.104～0.520和0.212～1.06mg·L-1内线性良好;平均回收率分别为95.7%,96.1%,95.1%和97.0%.结论本方法具有分辨率好、灵敏度高等特点,同时也为真假燕窝的鉴别提供了一种行之有效的方法.
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采收期内铁皮石斛多糖类成分含量比较
目的 研究采收期内铁皮石斛多糖类成分含量比较.方法 利用苯酚-硫酸法测定多糖的含量,高效液相法测定甘露糖的含量及甘露糖与葡萄糖的峰面积比值.结果 铁皮石斛多糖含量为26.52％～46.78％,甘露糖含量为13.36％ ～25.25％,甘露糖与葡萄糖峰面积比值为2.48 ～5.91.结论 不同来源的铁皮石斛中多糖类成分含量有较大差异,但均符合药典标准,其中云南产的多糖类成分含量高于浙江产,2年生及以上样品甘露糖含量高于1年生.
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马兰多糖的分离纯化及初步结构分析
目的 马兰多糖类组分为其抗实验性胃溃疡作用的物质基础之一,为了探讨马兰多糖结构与功能之间的关系,对马兰多糖进行了分离纯化和结构分析.方法 以马兰为原料,采用热水提取,酶法结合Sevag法除蛋白,经DEAE-52纤维素柱精制得纯品马兰多糖(KIP-1).采用凝胶色谱、红外光谱(FTIR)、GC、GC-MS甲基化分析等方法对其化学结构进行初步分析,并通过原子力显微镜(AFM)观察其微观结构.结果 KIP-1是一重均分子质量(Mw)为11 592,由甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)以物质的量比2.523∶1.162∶1组成的多糖.主链为1,3→连接的G1c和1,2→连接的Gal,Man构成糖链的末端,该糖链的分枝点残基为1,3,6→ Man,分枝点应在O-3上.KIP-1结构为颗粒状,不规则圆形及椭圆形,平均粒径大小1～2 nm,空间中同样呈现不规则形状,高度起伏约1nm.结论 KIP-1由甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,具有分枝结构,为首次从马兰中分离得到.
