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甘露糖敏感型绿脓杆菌制剂对肝癌细胞周期的作用机制研究
目的 探讨甘露糖敏感性绿脓杆菌制剂(pseudomonasaeruginosa mannose sensitive haemagglutination vaccine,PA-MSHA)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞周期的作用及其机制.方法 培养人肝癌细胞株MHCC97L及HepG2,以不同剂量的PA-MSHA作用于肝癌细胞.MTT实验检测PA-MSHA对细胞增殖的影响.流式细胞技术检测PA-MSHA对细胞周期的作用.Western blot检测PA-MSHA作用前后细胞周期蛋白Cyclin D1、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)以及细胞周期蛋白激酶抑制剂p21和p27的表达情况.结果 与对照组相比,PA-MSHA显著抑制MHCC97L和HepG2细胞的增殖,其作用呈剂量及时间依赖性(P＜0.05).PA-MSHA显著诱导肝癌细胞周期阻滞,PA-MSHA作用后G0-G1期和G2-M期细胞比例显著增高,而S期细胞比例则显著下降(P＜0.05).PA-MSHA显著抑制Cyclin D1、CDK2、PCNA蛋白的表达,而促进p21和p27的表达.外源性甘露糖可显著抑制PA-MSHA对肝癌细胞增殖和周期的作用(P＜0.05).结论 PA-MSHA通过调控细胞周期相关蛋白来诱导HCC细胞周期阻滞,抑制细胞增殖.这一作用是通过肝癌细胞表面的甘露糖的介导实现的.
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绿脓杆菌制剂对人肝癌MHCC97L细胞增殖和侵袭能力的影响
目的 探讨绿脓杆菌制剂(pseudomonas aeruginosa vaccine,PA)对有转移潜能的人肝癌MHCC97L细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 采用不同浓度的PA分别作用于MHCC97L细胞,观察细胞增殖、生长曲线、克隆形成率、流式细胞术分析(FCM)、侵袭、运动、迁移、VEGF和MMP2蛋白表达(ELISA法).结果 PA明显抑制MHCC97L细胞增殖和克隆形成,呈良好的剂量-效应关系.PA 48 h和72 h的IC50分别为3.1×108/ml和1. 9×108/ml.PA浓度为0.5×108/ml、1×108/ml和2×108/ml时,其细胞倍增时间依次增加,克隆形成率依次降低(P均＜0.01);FCM显示,G1期细胞比例随PA浓度增加而增加,S+G2期细胞比例随PA浓度增加而降低(P均＜0.01).PA浓度为1×108/ml时,穿过人工基底膜(侵袭实验)和上室底膜(运动实验)的细胞数(分别为4.8±1.3和8.8±2.2)明显低于对照组(8.6±2.1和15.6±1.2)(P均＜0.01);细胞经72 h培养后,对照组划痕逐渐愈合,1×108/ml的PA组细胞划痕依然明显.ELISA法检测发现,1×108/ml的PA组其VEGF蛋白和MMP2蛋白含量和对照组相比均无明显差异(P均＞0.05).结论 在一定条件下,绿脓杆菌制剂可抑制人肝癌MHCC97L细胞增殖和克隆形成,其作用部分是通过使细胞周期阻滞在G1期实现的;绿脓杆菌制剂可以明显抑制MHCC97L细胞的侵袭、运动和迁移能力,其作用和VEGF、MMP2蛋白分泌关系不明显.
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甘露糖敏感性绿脓杆菌制剂诱导肝细胞癌凋亡的机制研究
目的 探讨甘露糖敏感性绿脓杆菌制剂(pseudomonasaeruginosa mannose sensitive hamemagglutination vaccine,PA-MSHA)诱导肝细胞癌凋亡的机制.方法 将具有肺转移潜能的人MHCC97L肝癌组织块种植于BALB/c nu/nu雄性裸鼠肝脏,建立转移性人肝癌裸鼠原位模型.荷瘤裸鼠随机分为对照组、PA-MSHA腹腔注射组及皮下注射组.各组均于种植后第3天开始用药,于种植后第6周末处死动物.ELISA法检测血清TNF-α、IL-4、IL-6、IFN-γ水平,分光光度法检测肿瘤组织裂解液中Cαspase 3、Caspase 8、Caspase 9的酶活性,Western Blot检测肿瘤组织内Fas和FasL蛋白水平.结果 对照组、PA-MSHA皮下注射组和腹腔注射组裸鼠血清TNF-α分别为(25.24±3.22) pg/ml、(25.50±4.55)pg/ml(P＞0.05)和(34.22±2.42)pg/ml(P＜0.01).三组血清IL-4、IL-6及IFN-γ水平无显著差异(P＞0.01).腹腔注射组肿瘤组织裂解液中Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9的酶活性比对照组分别上调4.1倍、2.3倍和1.9倍(P＜0.01).与对照组比较,PAMSHA皮下注射组和腹腔注射组肝癌组织内Fas和FasL蛋白的表达显著增加.结论 PA-MSHA腹腔注射可通过上调TNF-α及Fas/FasL表达诱导肝细胞肝癌的凋亡,从而抑制其生长和转移.
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绿脓杆菌制剂抑制肝细胞肝癌生长转移的实验研究
目的 观察绿脓杆菌制剂对裸鼠肝癌生长和转移的抑制作用.方法 将具有肺转移潜能的人MHCC97L肝癌组织块种植于BALB/c nu/nu雄性裸鼠肝脏,建立转移性人肝癌裸鼠原位模型.荷瘤裸鼠随机分为对照组、绿脓杆菌制剂腹腔注射组及皮下注射组.各组均于种植后第3天开始用药,于种植后第6周末处死动物,HE染色观察肿瘤组织坏死情况,荧光Tunel法检测肿瘤组织细胞凋亡情况,测量肿瘤体积,计算抑瘤率、肺转移灶数目及肺转移率.结果 对照组、绿脓杆菌制剂皮下注射组和腹腔注射组肿瘤体积分别为(3.12±0.85)cm~3、(1.90±0.87)cm~3(P>0.05)和(0.79±0.36)cm~3(P<0.05),肺转移率分别为66.7%、66.7%(P>0.05)和0(P<0.01),平均肺转移灶数目分别为2.40±1.85,1.2±0.75(P<0.05)和0(P<0.01),凋亡指数分别为(1.4±0.37)%、(4.1±1.7)%(P<0.05)和(10.3±0.40)%(P<0.01).与对照组比较,绿脓杆菌制剂皮下注射组和腹腔注射组的抑瘤率分别为39.1%和74.7%,腹腔注射组肿瘤组织坏死明显.结论 绿脓杆菌制剂腹腔注射可明显促进肝癌组织坏死及凋亡并抑制其生长和转移.
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绿脓杆菌及其鞭毛蛋白联合rhIL-12体外对慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能的影响
目的 探讨绿脓杆菌及其鞭毛蛋白联合rhIL-12体外对慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能的影响,为rhIL-12作为佐剂应用于临床提供理论依据.方法 取健康人及慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMCs),分别与绿脓杆菌、鞭毛蛋白、rhIL-2、绿脓杆菌+rhIL-12、鞭毛蛋白+rhIL-12孵育,ELISA法检测细胞培养上清中IFNγ的含量.结果 绿脓杆菌和鞭毛蛋白组只诱导产生低水平的IFNγ,rhIL-12组诱导产生IFNγ的水平较阴性对照组显著提高;而绿脓杆菌+rhIL-12组、鞭毛蛋白+rhIL-12组诱导产生IFNγ的水平显著高于绿脓杆菌、鞭毛蛋白和rhIL-12组,差异均有统计学意义,且rhIL-12的作用呈剂量依赖性.结论 绿脓杆菌及其鞭毛蛋白联合rhIL-12体外能显著提高健康人和慢性乙型肝炎患者PBMCs产生IFNγ的水平,增强其细胞免疫应答.
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绿脓杆菌制剂与IL-12在诱导人NK细胞IFN-γ产生中的协同作用
探讨绿脓杆菌制剂(piliated Pseudomonas Aeruginosa,PPA)与IL-12协同诱导人PBMC和NK细胞IFN-γ的产生.分离健康人PBMC和纯化NK细胞分别与培养液、PPA、IL-12或PPA+IL-12共同培养,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测无细胞培养上清中IFN-γ的水平.同时采用流式细胞仪在单个细胞水平上分析PPA和IL-12诱导IFN-γ产生的淋巴细胞亚群.结果显示,单独应用亚适剂量的IL-12或PPA刺激人PBMC或纯化NK细胞,不能诱导或只能诱导低水平IFN-γ的产生.当PPA和IL-12共同与人PBMC或纯化NK细胞孵育后,PPA呈时间和剂量依赖性与IL-12协同诱导PBMC和纯化NK细胞产生大量IFN-γ.细胞亚群分析的结果表明,PPA和IL-12协同诱导CD56+NK细胞产生IFN-γ,但对CD4+T和CD8+T细胞无明显作用.PPA与IL-12协同促进NK细胞IFN-γ的产生,提示PPA和IL-12能直接刺激NK细胞发生免疫应答.
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绿脓杆菌制剂治疗恶性体腔积液34例
目的:观察绿脓杆菌制剂治疗恶性体腔积液的疗效.方法:共治疗恶性体腔积液34例,其中胸腔积液28例,腹腔积液4例,心包腔积液2例.所有患者先进行积液引流,引流后注入绿脓杆菌制剂4～6 ml和地塞米松5 mg,每周1次,连续2～3次.结果:34例体腔内注药共48次,平均1.4次.恶性胸水治疗28例有效25例(87.7%);恶性腹水4例,有效3例;心包积液2例均有效,不良反应为轻中度发热和胸痛.结论:绿脓杆菌制剂应用于恶性体腔积液的治疗,疗效较满意,毒副反应轻微.
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微管引流佐绿脓杆菌制剂治疗恶性胸腔积液的效果观察
目的:评价微管引流并灌注绿脓杆菌制剂治疗恶性胸腔积液的效果.方法:应用微管行胸腔闭式引流术,引净积液后注入绿脓杆菌制剂5ml+地塞米松5mg,1周后重复.结果:62例恶性胸腔积液病例中,胸水控制情况CR 14例(22.6%),PR 28例(45.2%),有效率67.8%(42/62),生存质量改善情况有效率66.1%(41/62).不良反应为轻中度发热和胸痛.结论:微管引流并灌注绿脓杆菌制剂,治疗中等或大量恶性胸腔积液简单易行,疗效佳,毒副反应轻微,值得推广.
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绿脓杆菌制剂治疗肿瘤体腔积液的护理
体腔积液是晚期恶性肿瘤常见的并发症之一,我科自2005年1月～2007年2月采用绿脓杆菌制剂经中心静脉导管治疗恶性体腔积液34例,现将相关护理经验总结如下.
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绿脓杆菌制剂治疗恶性胸腔积液的临床观察
我们从2006年1月至2007年3月采用胸腔内注入绿脓杆菌制剂治疗恶性胸腔积液,取得了较好的疗效,现报告如下.
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甘露糖敏感型绿脓杆菌制剂对肝癌细胞增殖的影响
目的：探讨甘露糖敏感型绿脓杆菌制剂（PA-MSHA）对肝癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法培养人肝癌细胞株HepG2和MHCC97 L并分别随机分为对照组、观察1组、观察2组和观察3组。对照组为空白组，观察1组予1．0×108/mL PA-MSHA处理，观察2组予2．0×108/mL PA-MSHA处理，观察3组予2．0×108/mL PA-MSHA＋100 mmol/L甘露糖处理；观察各组干预后1、2、3、4、5、6 h细胞增殖率、细胞周期，测定干预前后相关蛋白表达情况。结果 HepG2和MHCC97L观察1组、观察2组各时间点细胞增殖率明显低于对照组（P＜0．05），且呈浓度及时间依赖性；观察3组与对照组比较无明显差异；各观察组Cyclin D1、PCNA和CDK2表达均明显低于对照组，p21与p27蛋白表达均明显高于对照组（P均＜0．05）。结论 PA-MSHA对肝癌细胞增殖具有抑制作用，其机制主要是抑制Cyclin D1、PCNA和CDK2表达，促进p21与p27表达通过对相关蛋白进行诱导，促使肝癌细胞周期发生变化，且整个过程中是通过肝癌细胞表面的甘露糖而实现的。
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微管引流灌注绿脓杆菌制剂联合顺铂治疗恶性胸腔积液临床观察
目的 评价微管引流灌注绿脓杆菌制剂联合顺铂治疗中等量或大量恶性胸腔积液的疗效.方法 将50例中等量或大量恶性胸腔积液行微管胸腔闭式引流术,胸腔积液引净后注入绿脓杆菌制剂5ml和顺铂80mg.结果 CR18例(36%),PR21例(42%),有效率78%(39/50),中位生存期248 d;引流量(1500～6000 ml).结论 微管引流灌注绿脓杆菌制剂联合顺铂治疗中等量或大量恶性胸腔积液疗效佳,且安全、方便、易行,值得推广.
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TAC方案联合使用绿脓杆菌制剂在乳腺癌新辅助化疗中的应用研究
目的 评价TAC方案联合使用绿脓杆菌制剂在乳腺癌新辅助化疗中的价值.方法 以随机排列表法将我院2008年1月-2008年6月收治的60例女性乳腺癌患者随机分为实验组(30例)与对照组(30例),两组均采用TAC新辅助化疗方案,实验组加用绿脓杆菌制剂,治疗结束后评价两组的疗效、毒副作用、手术方式、术后并发症及疗效-成本比.结果 实验组在新辅助化疔第2、3、4疗程后总有效率(RR)均高于对照组(P<0.05);实验组化疗前后Karnofsky评分无明显差别,而对照组化疗前后Karnofsky评分显著降低(p<0.05);实验组较对照组毒性反应发生率及反应程度明显降低;两组患者手术方式的选择无明显差异;实验组患者出现皮下积液、皮瓣坏死及感染的几率较对照组降低;实验组患者经2次新辅助化疗后即行手术治疗比例较对照组显著增加(p<0.01);第2次新辅助化疗后实验组每增加1%化疗有效率需花费人民币较对照组显著减少(P<0.01).结论 绿脓杆菌制剂在新辅助化疗中的联合使用能增加化疗的疗效,同时能增加患者的化疗承受能力,减轻化疗的毒副作用,而且能减少患者术后并发症的出现,没有加重患者的经济负担,值得临床推广.
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绿脓杆菌制剂治疗恶性体腔积液的观察及护理
目的 探讨绿脓杆菌制剂治疗恶性体腔积液的护理要点.方法 对34例恶性体腔积液患者注射绿脓杆菌制剂全程观察治疗过程并给予相应的护理及心理和饮食指导.结果 本组34例恶性体腔积液患者局部应用绿脓杆菌制剂总有效率88.2%,其中恶性胸水有效率89.3%,恶性腹水有效率75%,心包积液有效率100%.结论 患者通过严密的病情观察,强化环节护理、心理护理及饮食护理,及时观察、处理毒副反应,才能保证治疗的顺利进行.
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绿脓杆菌制剂联合顺铂治疗肺癌所致恶性胸腔积液的临床观察
目的:观察绿脓杆菌制剂联合顺铂治疗肺癌所致恶性胸腔积液的疗效.方法:选择56例肺癌合并有中等量以上胸腔积液的恶性肿瘤患者,均经X线、B超、CT及脱落细胞学检查诊断为恶性胸腔积液,随机分成治疗组和对照组,各28例.治疗组胸腔内注入生理盐水40.0ml+绿脓杆菌制剂5.0ml +顺铂60-80mg+地塞米松5.0mg;对照组胸腔内注入生理盐水40.0ml+顺铂60-80mg+地塞米松5.0mg.结果:治疗组:完全缓解12例,部分缓解10例,总有效率为78.6%;对照组:完全缓解9例,部分缓解7例,总有效率为57.1%,P<0.05,治疗组毒副作用主要为发热和轻度胸痛,对症处理均缓解.结论:绿脓杆菌制剂联合顺铂治疗肺癌所致恶性胸腔积液疗效确切,耐受性好,值得进一步临床推广.
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绿脓杆菌制剂联合顺铂治疗恶性胸腔积液的临床观察
目的:观察绿脓杆菌制剂联合顺铂治疗恶性胸腔积液的疗效.方法:选择52例合并有中等量以上胸腔积液的恶性肿瘤患者,均经X线、B超、CT及脱落细胞学检查诊断为恶性胸腔积液,随机分成治疗组和对照组,各26例.治疗组胸腔内注入生理盐水40.0ml+绿脓杆菌制剂4.0ml+顺铂40mg/m2+地塞米松5.0mg;对照组胸腔内注入生理盐水40.0ml+顺铂40.0mg/m2+地塞米松5.0mg.结果:治疗组完全缓解10例,部分缓解13例,总有效率为88.5%;对照组完全缓解3例,部分缓解9例,总有效率为46.2%(P<0.05).治疗组不良反应主要为发热和轻度胸痛,对症处理均缓解.结论:绿脓杆菌制剂联合顺铂治疗恶性胸腔积液疗效确切,耐受性好,值得进一步临床推广.
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洛铂联合绿脓杆菌制剂治疗恶性胸腔积液的临床观察
目的：观察洛铂联合绿脓杆菌制剂治疗恶性胸腔积液的临床效果。方法：将62例恶性胸腔积液患者引流排净积液后，32例患者注入洛铂和绿脓杆菌制剂（A 组）；30例患者注入顺铂和白介素－2（B 组），观察疗效、不良反应。结果：A 组32例患者中，CR 19例，SD 11例，有效率为93．8％；B 组30例患者中，CR 10例， SD 12例，有效率73．3％，两者差异有统计学意义（P ＝0．029）。在 A 组32例患者中，生活质量改善者29例（90．6％）；B 组30例患者中生活质量改善者16例（53．3％），两者差异有统计学意义（P ＝0．001）。A 组有效率和生活质量改善率显著优于 B 组。两组不良反应主要以Ⅰ、Ⅱ度恶心、呕吐，疲乏为主，不良反应两组比较差异均无统计学意义（P ＞0．05）。结论：洛铂联合绿脓杆菌制剂治疗恶性胸腔积液安全有效，不良反应轻微，值得临床应用和推广。
