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丹酰氯柱前衍生化-高效液相色谱法测定单胺类神经递质及其代谢物
目的 建立丹酰氯柱前衍生化-高效液相色谱法测定单胺类神经递质及其代谢产物的实验方法.方法 采用C18色谱柱(150 mm×4.6mm×5 μm)并以丹酰氯(10 mg/ml)为衍生试剂,在水浴50℃,缓冲液pH11时进行柱前衍生反应,20μl醋酸丙酮溶液(1.0mol/L.)被加入以终止反应,冷却至室温,进样,采用0.1 mol/L的醋酸锌乙腈四氢呋喃溶液,以体积比为62∶ 35∶3为流动相,在0～ 10 min时流速为1.0 ml/min,10 ～ 35 min时流速为2 0ml/min进行洗脱,紫外检测波长286 nm.采用上述方法分别测试了单胺类神经递质及其代谢物,并对方法的检测限、精准度和准确度进行评价.结果 在1～20 μg/ml范围内,各组分线性关系良好(r=0.999).去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺及其代谢产物3-甲氧-4-羟苯乙二醇、高香草酸、5-羟吲哚乙酸低检出限分别为0.60、0.80、0.41、0.21、0.19、0.1 ug/ml,各待测物质的平均回收率为78.5％～95.9％,RSD分别为6.62％、7.64％、2.98％、3.60％、5.09％、3.09％.在色谱条件的选择和优化过程中,观察到金属离子对分离的重要作用.并对衍生反应的温度、缓冲液pH及丹酰氯用量进行了探讨.在上述条件下衍生反应完全,各待测物质基线分离.结论 建立了丹酰氯柱前衍生化-高教液相色谱法测定单胺类神经递质及其代谢产物的实验方法.
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柱前衍生RP-HPLC测定女贞子中21种氨基酸含量
目的:建立一种采用柱前衍生RP-HPLC检测女贞子中游离氨基酸和水解氨基酸含量的方法.方法:采用HPLC,用异硫氰酸苯酯进行柱前衍生,采用梯度洗脱的方法,检测女贞子中游离氨基酸和水解氨基酸含量.结果:21种氨基酸线性范围在0.002 ～0.270 mmol·L-1,r均≥0.999 5;21种游离氨基酸的平均加样回收率在88.33％ ～ 99.88％,RSD为0.6％ ～2.5％,水解氨基酸的平均加样回收率在90.32％ ～99.91％,RSD为0.5％ ～2.5％.结论:该方法适合测定女贞子中游离及水解氨基酸的含量.
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柱前衍生化高效液相色谱分析云南松松塔多糖的单糖组成
目的:测定云南松松塔多糖中单糖组成及含量.方法:采用三氟乙酸(TFA)水解松塔多糖,l-苯基-3甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化水解单糖产物,用高效液相色谱法测定松塔多糖的单糖组成;采用正交试验考察水解条件,比较了不同衍生反应时间和加入不同量NaOH时单糖衍生物的峰面积大小变化,从而确定佳水解条件和佳衍生化条件.结果:松塔多糖由甘露糖(Man),鼠李糖(Rham),葡萄糖醛酸(GlcUA),半乳糖醛酸(GalUA),葡萄糖(Glc),半乳糖(Gal),木糖(Xyl),阿拉伯糖(Arab),岩藻糖(Fuc)组成,其含量比为1.10∶0.04∶0.63∶0.14∶1.00∶1.11∶1.80∶0.60∶0.09.优水解条件为TFA浓度1 mol·L-1,水解温度100℃,水解时间6h.衍生化过程中加入o.3 mol·L-1 NaOH,衍生时间为40 min.结论:该方法简单、快速、灵敏,为云南松松塔多糖中单糖的测定提供了一种可靠方法.
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异硫氰酸苯酯柱前衍生化HPLC测定盐酸氨基葡萄糖的含量
目的:采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化高效液相色谱法测定复方制剂中盐酸氨基葡萄糖的含量.方法:以氨基半乳糖为内标,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,采用Agilent TC C18(4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相10 mmol· L-1pH 5.8的磷酸盐缓冲液-乙腈(90∶10),检测波长254 nm,流速0.8 mL· min -1,柱温30℃.结果:盐酸氨基葡萄糖质量浓度在350～550 mg·L -1,经衍生化后其衍生物峰面积与内标衍生物峰面积的比值与盐酸氨基葡萄糖浓度呈线性相关(r =0.999 1).制剂中盐酸氨基葡萄糖含量测定的平均回收率98.3％ (RSD 2.3％).结论:异硫氰酸苯酯柱前衍生化高效液相色谱法测定结果准确灵敏、方法可靠,适用于复方制剂中等复杂样品中盐酸氨基葡萄糖的含量测定.
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不同产地柏子仁中氨基酸成分比较分析
目的:测定并对比不同产地柏子仁药材中18种氨基酸的含量.方法:采用柱前衍生-HPLC测定氨基酸含量,以6 mol· L-1盐酸溶液在110℃下对柏子仁中的氨基酸进行水解,2,4-二硝基氟苯作为柱前衍生化试剂;以Elite-AAK氨基酸专用分析柱(4.6mm×250 mm,5μm)为色谱柱;以乙腈-水(1∶1)-缓冲盐为流动相,流速1.2 mL·min-1梯度洗脱,检测波长360nm,柱温27℃.结果:18种氨基酸线性相关度r均＞0.999 1,各氨基酸的加样回收率在98.03％～103.21％,加样回收率均值为100.36％,RSD≤1.77％.结论:柱前衍生-HPLC测定柏子仁中氨基酸的方法可行,为柏子仁药材质量和产地的关系提供一定的依据.
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金边土鳖HPLC指纹图谱及氨基酸含量测定
目的:建立金边土鳖氨基酸HPLC指纹图谱分析方法,并同时定量分析了6种氨基酸成分,为制订金边土鳖的质量标准提供参考.方法:采用异硫氰酸苯酯(PITC)-高效液相色谱(HPLC)柱前衍生化法,以Waters XBridge C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱;流动相A为0.1 mol·L-1乙酸钠(pH 6.5)-乙腈(95∶5),B为乙腈-水(4∶1);检测波长254 nm;流速0.8 mL·min-梯度洗脱;柱温40℃.采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”和SPSS 22.0软件分别对其进行相似度评价和聚类分析.结果:初步建立了金边土鳖游离氨基酸HPLC指纹图谱共有模式,确定了21个共有峰,并指认了13种氨基酸成分;综合14批金边土鳖相似度分析、聚类分析和定量分析,结果显示相似度分析和聚类分析基本一致,且发现精氨酸含量的高低可能与产地有一定的关系.结论:建立了金边土鳖HPLC指纹图谱分析方法,可较全面反映该药材中氨基酸成分的信息,为金边土鳖药材鉴定和质量标准的制订提供参考.
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怀山药、怀地黄及其“对药”中多糖的单糖组成及含量比较
目的:采用1-苯基-3-甲基-5-吡啶酮(PMP)柱前衍生化高效液相色谱法(HPLC)建立了多种单糖的分离模式,应用于怀山药、怀地黄单味药材及其“对药”中多糖的单糖含量测定,并对怀山药、怀地黄单味药材和配伍药对中的单糖组成及其含量进行了比较.方法:以Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,以0.05 mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH 6.7)-乙腈(83∶ 17)为流动相,检测波长254 nm,流速1 mL·min-1,柱温30℃.结果:怀山药和怀地黄单味药及其“对药”3种多糖水解后均含有甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖,但未检测到岩藻糖.与山药多糖和地黄多糖相比,怀山药和怀地黄“对药”中多糖的单糖组分甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸和葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖的含量在山药多糖和地黄多糖之间.结论:该方法操作简便快速、结果准确可靠,可用于分析药品及食品中多糖中的单糖组成和含量.
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中药水提液中还原糖衍生化测定方法研究
目的:建立1一苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生高效液相色谱法测定中药水提液中还原糖种类及含量的方法.方法:以7种还原糖作为标准物,通过PMP柱前衍生化,利用反相高效液相色谱法,分析其衍生产物.以PMP衍生产物峰面积大小为指标,分别对衍生反应的反应时间、反应温度、PMP和NaOH用量、后处理使用的萃取试剂、萃取次数进行考察,得到了佳衍生化条件.并将该方法用于7味中药水提液中还原糖类成分种类及含量的分析.结果:葡萄糖是本研究所检测7味中药中普遍存在的一类成分,且含量较高,除标准糖外,还含有未知还原糖类成分.D+(葡萄糖)、D+(半乳糖)、D+(甘露糖)、D+(麦芽糖)和D+(乳糖)、D+(阿拉伯糖)和D+(木糖)的线性范围分别为0.72-36μ g/mL (r=0.9997)、0.72-36μg/mL(r=0.9998)、0.72-36μg/mL(r=0.9995)、1.44-72μg/mL(r=0.9995)、0.6-30μg/mL(r=0.9995).结论:本方法简便、灵敏、重复性好,可用于中药水提液中还原糖类成份种类及含量的分析.
关键词： 中药 还原糖 柱前衍生化 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 高效液相色谱 -
柱前衍生化-高效液相色谱法同时测定含油脂药材中8种低分子羰基化合物
目的：建立高效液相色谱法(HPLC)测定含油脂类药材中低分子羰基化合物的方法。方法苦杏仁等药材经水提取,在酸性条件下,经2,4-二硝基苯肼(DNPH)衍生后,衍生物直接用HPLC测定。色谱柱：Kromasil KR100-5 C18(250 mm×4.6 mm,5μm)；流动相：A为水-乙腈-四氢呋南-异丙醇(59∶30∶10∶1),B为水-乙腈(35∶65),梯度洗脱；流速：0.8 mL/min；检测波长：365 nm；柱温：30℃。结果甲醛、乙醛、丙酮、丙烯醛、丙醛、巴豆醛、2-丁酮、丁醛的DNPH衍生物在一定浓度范围内与峰面积线性关系良好,相关系数均达到0.999以上,平均回收率为88.49%～93.65%,低检测限为0.002～0.008μg/mL。结论该方法简便、灵敏、准确、重复性较好。
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柱前衍生化高效液相色谱法测定三七及其制剂中三七素含量
目的:建立三七药材及其制剂中三七素含量测定的方法.方法:以硼砂缓冲液(pH 9.18)为提取溶剂,回流提取药材及制剂中的三七素;以氯甲酸芴甲酯(FMOC)作为衍生化试剂,对三七素提取液进行柱前衍生化,采用RP-HPLC,ODS柱分离,并通过紫外检测的方法进行测定.结果:在本实验条件下,三七素的线性范围为1.76～352 mg·L-1,低检测限为60 μg·L-1.衍生化产物稳定,过量的衍生化试剂无干扰.平均加样回收率为95.3%,RSD为1.7%.结论:该方法操作简单,快速,灵敏度高,可用于三七药材及制剂中三七素的分析测定和三七素的药物代谢研究.
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柱前衍生化UPLC测定板蓝根颗粒中主要游离氨基酸的含量
目的:采用柱前衍生化法测定板蓝根颗粒中6种游离氨基酸的含量.方法:采用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)进行柱前衍生化,超高效液相色谱法测定板蓝根颗粒中精氨酸、脯氨酸、苏氨酸、丙氨酸、γ-氨基丁酸、缬氨酸的含量.Waters AccQ Tag TM Ultra C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,5μm),流动相AccQ Tag Ultra Eluent A与AccQ Tag Ultra Eluent B进行梯度洗脱,流速0.7 mL·min-1,柱温55℃,检测波长260 nm.结果:精氨酸的线性范围为4.155 ～49.86 μg,r=0.999 9；苏氨酸的线性范围为0.595 ～5.95 μg,r =0.999 8；丙氨酸的线性范围为0.445 ～4.45 μg,r =0.999 9;γ-氨基丁酸的线性范围为0.515 ～5.15μg,r=0.999 9；脯氨酸的线性范围为8.858 ～ 106.3 μg,r=O.999 9；缬氨酸的线性范围为0.585～5.85μg,r=0.999 8.平均回收率分别为100.6％,98.34％,98.35％,100.2％,98.44％,98.18％；平均RSD分别为1.8％,1.5％,1.9％,2.0％,2.4％,2.0％(n=6).5家企业的的板蓝根颗粒中氨基酸类成分的含量存在差异.结论:该方法操作简单,重复性好,灵敏度高,结果准确可靠.
关键词： 柱前衍生化 反相超高效液相色谱法 板蓝根颗粒 氨基酸 -
板蓝根超微粉体二元指纹图谱研究
目的:建立13批板蓝根超微粉体水溶性成分和氨基酸柱前衍生化双重HPLC指纹图谱.方法:采用RP-HPLC梯度洗脱,选择Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)；水溶性成分HPLC指纹图谱的流动相乙腈-0.1％磷酸水溶液,流速0.5 mL·min-1,柱温20℃,进样量10 μL；氨基酸成分HPLC指纹图谱样品经异硫氰酸苯酯试剂柱前衍生化处理后进样,流动相0.1 mol·L-1醋酸钠缓冲溶液(pH 6.5)-乙腈,流速1.0 mL.min-,柱温30℃,进样量5μL；检测波长均为254nm.采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2.0版)”处理分析,建立板蓝根指纹图谱,同时测定了4种主要成分含量,并进行SPSS系统聚类分析.结果:建立了板蓝根超微粉体水溶性成分和氨基酸成分指纹图谱共有模式,确认了腺苷、表告依春和15种氨基酸的特征峰.聚类分析表明,不同产地板蓝根药材其主要成分含量存在差异.结论:建立了板蓝根超微粉体双重指纹图谱,色谱图中各个峰分离度较好、特征明显,为现阶段板蓝根超微粉体质量控制提供了科学依据.
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柱前衍生化HPLC测定蜀葵子脂肪油中5种脂肪酸含量
目的 用HPLC测定蜀葵子脂肪油中脂肪酸的含量.方法 以2-溴苯乙酮为衍生化试剂,三乙醇胺为相转移催化剂,采用Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),检测波长244 nm,以甲醇:水(93.5:6.5)为流动相等梯度洗脱,柱温35℃,流速0.9 ml/min,同时测定5种脂肪酸,建立蜀葵子脂肪油中脂肪酸含量测定的方法.结果 α-亚麻酸线性范围为0.0075～0.077μg(r=0.9999),亚油酸为0.212～2.125μg(r=0.9998),棕榈酸为0.135～1.354μg(r=0.9996);油酸为0.117～1.175μg(r=0.9996),硬脂酸为0.0406～0.406μg(r=0.9999).平均加标回收率分别为102.82％、101.73％、97.82％、101％和102.26％,RSD值分别为1.28％、1.16％、0.99％、1.09％和1.75％.结论 该法稳定性、重现性好,定量准确,可作为蜀葵子脂肪油中脂肪酸的含量测定.
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柱前衍生-电化学检测HPLC法测定大鼠脑内的谷氨酸和γ-氨基丁酸
目的:建立大鼠脑组织内谷氨酸和γ-氨基丁酸的HPLC测定方法.方法:大鼠脑组织匀浆液低温离心,上清液经甲醇沉淀蛋白并稀释至合适浓度后与邻苯二醛在亚硫酸钠存在下发生衍生化反应,衍生物经HPLC分离, 电化学检测.结果:谷氨酸在0.1～2.0μg.ml-1,γ-氨基丁酸在0.05～1.0μg.ml-1浓度范围内,线性关系良好.谷氨酸测定的日内和日间变异系数(RSD)分别小于3.4%和4.5%,γ-氨基丁酸测定的日内和日间变异系数(RSD )分别小于4.2%和8.6%.两者回收率分别为95.9%～102.3%和107.2%～110.0%.谷氨酸和γ-氨基丁酸的小检出浓度均为5ng.ml-1.SD大鼠小脑、皮层、丘脑、海马内谷氨酸的含量分别为960.2、1068.0、460.2和846.6μg.g-1;γ-氨基丁酸的含量分别为186.0、165.4、149.3和188.6μg.g-1.结论:本法简便、灵敏、准确,可用于大鼠脑组织内谷氨酸和γ-氨基丁酸的测定.
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柱前衍生化HPLC法同时测定复方甘草酸苷胶囊中甘氨酸和蛋氨酸的含量
目的 建立同时测定复方甘草酸苷胶囊中甘氨酸和蛋氨酸含量的高效液相色谱法.方法 采用C18色谱柱(4.6mm ×150mm,5μm),流动相为乙腈-0.01mol·L-1磷酸溶液(49:51),流速:1.0mL/min,检测波长:262nm.结果 甘氨酸、蛋氨酸浓度分别在10.6～106.0、10.4～104.0μg·mL-1范围内呈良好的线性关系;平均回收率分别为100.53%和100.66%,RSD分别为1.08%和1.13%(n=9).结论 本法可用于同时测定复方甘草酸苷胶囊中甘氨酸和蛋氨酸的含量,方法简便,结果准确.
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血清中美西律的柱前衍生化-液相色谱荧光检测
目的建立血清中盐酸美西律的柱前衍生化-液相色谱荧光检测法.方法血清样品用丙酮液直接沉淀蛋白后,定量加入荧光胺丙酮溶液,得盐酸美西律的荧光衍生物.采用Alltima C18 (150 mm×4.6 mm,5 μm)为分析柱;流动相为甲醇-水-2.4 mol*L-1二乙胺-磷酸缓冲液(pH 4.0)(70∶28∶2);荧光检测激发波长(Ex)为392 nm,发射波长(Em)为480 nm.盐酸美西律的保留时间为6.5 min.结果盐酸美西律在0.100～6.400 mg*L-1线性关系良好.本法的低检测质量浓度为5 μg*L-1,(S/N≥4).批内、批间精密度为1.34%～5.31%.结论本法操作简便、有良好的灵敏度和专一性,可满足盐酸美西律的临床血药浓度的监测和药代动力学研究.
关键词： 盐酸美西律 柱前衍生化 高效液相色谱荧光检测法 血药浓度 -
柱前衍生-高效毛细管电泳法测定刺糖多糖中单糖的组成
目的:分析测定剌糖多糖中单糖的组成.方法:将刺糖多糖水解成单糖,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化,采用高效毛细管电泳法在245 nm紫外检测分离测定各单糖.结果:刺糖多糖中阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸的摩尔比为2.80∶38.61∶5.28∶3.76∶1.91∶3.82∶2.45,且剌糖多糖中葡萄糖的含量为35.65％.结论:本法测定刺糖多糖的单糖组分操作简便,灵敏度高,结果准确可靠,可用于刺糖多糖单糖组成测定和质量控制.
关键词： 刺糖多糖 单糖 高效毛细管电泳(HPCE) 柱前衍生化 -
柱前衍生化HPLC法测定疏血通注射液及其原药材中糖的含量
目的:测定疏血通注射液及其原药材水蛭、地龙中游离糖和多糖的含量.方法:采用PMP柱前衍生化法,对疏血通注射液及水蛭、地龙药材进行分析,色谱柱为Phenomenex Prodigy ODS-3 (250 mm×4.6 mm,5μm)；流动相为20 mmol·L-1醋酸铵-乙腈,梯度洗脱；检测波长为254nm；流速为1.2 mL·min-1.结果:在确定的分析条件下,葡萄糖、甘露糖和半乳糖在测定范围内都有良好的线性,甘露糖的平均回收率为101％,葡萄糖的平均回收率为96.8％,半乳糖的平均回收率为97.3％.结论:该方法简便、准确、稳定,适合用于疏血通注射液及原药材中游离糖和多糖含量的测定.
关键词： 疏血通注射液 水蛭 地龙 柱前衍生化 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 -
板蓝根药材中氨基酸含量测定研究
目的:建立HPLC法测定板蓝根药材中10种游离氨基酸和结合氨基酸含量的方法.方法:采用2,4-二硝基氟苯柱前衍生法及微波水解-柱前衍生法测定板蓝根药材中10种游离氨基酸和水解氨基酸的含量,再通过水解氨基酸与游离氨基酸的差值计算出结合氨基酸的含量.色谱柱为Inertsil ODS-3柱(250 mm ×4.6 mm,5μm);流动相A为0.03 mol·L-1乙酸钠缓冲液(pH 6.4,含0.15％三乙胺),流动相B为乙腈,梯度洗脱;检测波长为360 nm;柱温为27℃;流速为0.6 mL· min-1.结果:板蓝根药材中天门冬氨酸等10种游离氨基酸和水解氨基酸在一定范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率在85％ ～115％范围内,RSD均在3％以内.板蓝根药材中游离氨基酸以精氨酸和脯氨酸含量高,分别大于20和10mg·g-1;水解氨基酸以精氨酸、脯氨酸、谷氨酸、组氨酸含量为高,分别大于36,1 1,7和7 mg·g-1;结合氨基酸则以精氨酸、谷氨酸、组氨酸、天冬氨酸含量为高,分别大于17,6,4.5和4.5 mg·g-1.结论:本方法适合用于板蓝根药材中天门冬氨酸等10种氨基酸的游离氨基酸和结合氨基酸的含量测定,方法简便、快速、准确,可用于板蓝根的氨基酸质量控制.
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柱前衍生HPLC测定穿山龙中氨基酸含量
目的:建立一种柱前衍生-反相高效液相色谱方法,用于检测中药穿山龙中21种游离氨基酸和水解氨基酸的含量.方法:以异硫氰酸苯酯为衍生剂进行柱前衍生,利用高效液相色谱法,检测穿山龙中游离氨基酸和水解氨基酸含量.结果:该方法测定21种氨基酸的线性范围为0.002 1～1.260 0μmol· mL-1,R值均＞0.999 0;其中游离氨基酸平均加样回收率在92.39％ ～ 100.07％之间、RSD为0.61％ ～ 2.85％(n=6),水解氨基酸平均加样回收率在94.85％ ～ 100.04％之间、RSD为0.47％ ～1.96％ (n =6).结论:该方法快速、稳定、精密度高、重复性好,适合穿山龙药材中多种氨基酸成分的含量检测.
