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板蓝根含药血清对病毒感染RAW264.7细胞的TLR3信号通路的影响
目的:研究板蓝根含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染RAW264.7细胞中干扰素-β(IFN-β),Toll样受体3(TLR3),TBK1,干扰素调节因子3(IRF3)表达的影响,阐释其可能的抗RSV机制,为临床使用提供实验依据.方法:本实验分为6组,分别为空白组,RSV感染细胞模型组,板蓝根含药血清低、中、高体积分数组(40％,50％,60％板蓝根含药血清),利巴韦林含药血清组(70％利巴韦林含药血清).除空白组外,其余各组接种RSV造成病毒感染模型,采用板蓝根含药血清或利巴韦林含药血清进行干预,12h后收集细胞及其上清液,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中IFN-β含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测RAW264.7细胞中TLR3,TBK1,IRF3和IFN-β mRNA的表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测TLR3,TBK1,IRF3和p-IRF3蛋白的表达.结果:RSV感染RAW264.7细胞12 h后,与空白组比较,模型组TLR3,TBK1和IFN-β mRNA的表达显著升高,IFN-β,TLR3,TBK1和p-IRF3蛋白的表达也显著升高(P＜0.01),IRF3 mRNA和蛋白均无明显变化;与模型组比较,板蓝根含药血清中、高体积分数组能够显著下调RSV诱导的TLR3,TBK1和IFN-βmRNA的高表达(P ＜0.05,P＜0.01),同时明显下调RSV诱导的TLR3,TBK1和p-IRF3蛋白的高表达(P＜0.05,P＜0.01),板蓝根含药血清各体积分数组的下调作用低于利巴韦林含药血清组,两者对IRF3 mRNA和蛋白均无明显调控作用.结论:RSV能够诱导TLR3信号转导通路的激活从而促进IFN-β的表达,而板蓝根含药血清通过下调TLR3信号通路关键信号分子TLR3,TBK1,p-IRF3使IFN-β适度表达.
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TLR9介导DNA病毒的免疫识别
Toll样受体(toll-like receptor,TLR)是免疫细胞表面的模式识别受体(patttern recognition receptor,PRR),参与微生物病原体相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs)的识别,从而诱导天然免疫应答.迄今在人类已经确定了10个TLRs家族成员[1].不同的TLRs识别不同的PAMPs,如TLR9是免疫细胞识别病毒和细菌中非甲基化DNA的必需成分[2];TLR3是识别双链RNA(dsRNA)病毒的特异性受体[3].尽管TLRs在天然识别细菌和真菌中已经显示出了重要作用,但在体内抗病毒免疫的作用还不清楚[4].通过对TLR9与病毒感染相关性研究,为探讨HIV及HPV等DNA病毒致病机理和制备其基因疫苗开辟新的思路.
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抗病毒感染固有免疫应答的信号转导
入侵病毒的探知和适应性免疫应答启动均依靠固有免疫系统.三种模式识别受体(PRRs)在宿主防御系统第一线占据极其重要地位:Toll样受体、维甲酸诱导基因Ⅰ样受体、核苷酸结合寡聚化结构域样受体.PRRs识别病原相关分子模式(PAMP)或危险信号分子模式(DAMPs)启动和调节固有免疫和适应性免疫应答.每种PRR都有单独的识别配体和细胞定位.激活的PRRs将信号分子传递给其配体分子(MyD88,TRIF,IRAK,IPS-1),配体活化后作为信使激活信号途径下游激酶(IKK复合物,MAPKs,TBK1,RIP-1)和转录因子(NF-κB,AP-1,IRF3),终产生细胞因子、趋化因子、促炎细胞因子和Ⅰ型干扰素.本文重点讨论PRRs信号通路及该领域取得的成果,以期为人类健康和免疫疾病防治提供策略.
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EV71的感染和抗病毒天然免疫应答
EV71是儿童手足口病的主要病原体,部分感染儿童会出现疱疹性咽峡炎以及严重的肺水肿和/或脑干脑炎.近几年,EV71感染引起的疾病机制研究取得了诸多进展.本文针对目前EV71的敏感细胞、EV71感染激活的信号途径以及EV71感染活化的天然免疫应答或免疫逃逸机制研究进行综述,旨在为EV71抗病毒药物研制和免疫致病机理的研究提供思路.
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模式识别受体介导的肿瘤免疫耐受参与肿瘤转移
肿瘤细胞与宿主相互作用经历免疫警戒、免疫平衡和免疫逃逸过程,称为肿瘤免疫编辑.具有免疫逃逸能力是肿瘤细胞的标志性改变,也是肿瘤生长失控、转移和治疗失效的重要原因.病原微生物所含病原相关模式分子和肿瘤组织释放的损伤相关模式分子与肿瘤细胞及周围组织细胞和免疫细胞表达的模式识别受体相互作用,引起抑制性免疫微环境是导致肿瘤免疫耐受的关键.以肿瘤免疫耐受为药靶,使用小分子化合物或具有免疫刺激活性的生物制剂如单克隆抗体,可逆转肿瘤抑制性免疫微环境,打破肿瘤免疫耐受,抑制肿瘤细胞的生长和侵袭能力,从而降低肿瘤细胞转移和肿瘤致死率.
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损伤相关模式分子与慢性疾病
损伤相关模式分子是组织或细胞受到损伤、缺氧、应激等因素刺激后释放到细胞间隙或血液循环中的一类物质,可通过Toll样受体、RIG-1样受体或NOD样受体等模式识别受体,诱导自身免疫或免疫耐受,在关节炎、动脉粥样硬化、肿瘤、系统性红斑狼疮等疾病发生和发展过程中发挥重要作用.现已发现的损伤相关分子模式分子包括细胞内蛋白分子、非蛋白嘌呤类分子及其降解产物、细胞外基质降解产物和无引导序列免疫细胞因子如IL-1 和IL-18等.损伤相关模式分子的发现及其作用机制的阐明,将有助于阐明多种慢性炎症疾病的病理机制,为这些疾病的诊断和防治提供新的思路.本文综述了主要的损伤相关模式分子的概念、释放方式,及其与模式识别受体相互作用引起炎症反应和参与多种慢性疾病过程的机制.
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Toll样受体2在人胎盘和胎膜组织中的表达
目的 检测正常胎盘和胎膜组织中Toll样受体2(TLR2)的表达.方法 收集5例足月剖宫分娩胎盘和胎膜样本,运用RT-PCR法检测胎盘和胎膜组织中TLR2 mRNA的表达,运用免疫组织化学和Westen blot印迹方法检测TLR2蛋白质在胎盘和胎膜组织中的表达.结果 RT-PCR显示在mRNA水平,胎盘和胎膜组织中均有TLR2表达;Westen blot印迹显示TLR2抗体在胎盘和胎膜组织中相对分子质量为50000左右的位置有一条明显的条带;免疫组化研究显示TLR2在胎盘的合体滋养细胞、胎膜的羊膜上皮细胞及平滑绒毛膜滋养细胞中有表达.结论 TLR2在人胎盘和胎膜组织中的表达,提示其在妊娠期先天性免疫中可能发挥重要作用.
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TOLL样受体新型疫苗佐剂的新研究进展
疫苗接种是抵抗传染病的保护屏障.为了提高免疫效果,可以在免疫原性不足的疫苗中加入佐剂以诱导免疫应答.目前只有少数佐剂获准用于上市疫苗,许多佐剂仍在开发中;Toll样受体(TLR)激动剂是其中的一大类.作为被研究多的模式识别受体,当TLR识别配体后,形成的复合物启动信号级联反应,导致细胞因子和趋化因子的分泌、抗原递呈细胞的成熟、细胞免疫和体液免疫的免疫反应激活.TLR在免疫系统中发挥关键作用,已成为潜在的、有前途的候选佐剂,不仅可用于预防性疫苗,也可用于目前大量研究的治疗性疫苗.目前全球市场有4种批准的含TLR激动剂佐剂的疫苗.本文就TLR靶向疫苗佐剂的近十年新研究进展进行了综述.
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媒介按蚊抗疟原虫感染的免疫相关基因研究进展
疟疾仍然是严重危害人类健康的传染性疾病之一,每年有300～500万人感染疟疾并导致100多万人死亡.按蚊是疟疾的传播媒介,由于按蚊对杀虫剂抗性的产生和扩散,目前尚无有效的防制措施.随着分子生物学技术的发展和疟疾防治的需要,世界卫生组织于20世纪 90 年代初提出一项基因操纵控制蚊媒新策略,即通过转基因手段,把蚊虫抵抗疟原虫感染的相关基因转入蚊基因组, 使其稳定遗传并在自然种群中扩散, 以期减少甚至阻断疟疾的传播.研究疟原虫感染引起蚊媒体内的生物学改变,特别是对按蚊中抑制疟原虫感染免疫相关基因的研究, 是实现这一策略的重要研究课题.目前的研究热点主要集中于三类基因:按蚊的模式识别受体、抗疟原虫感染的基因和效应调节基因.本文就这一方面的研究进展作一综述.
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Toll样受体在格林-巴利综合征发病机制中的作用
格林-巴利综合征（Guillain-Barre syndrome，GBS）又称急性炎症性脱髓鞘性多发性神经根炎，是累及周围神经的自身免疫性脱髓鞘疾病，主要病理改变是脱髓鞘和炎性浸润。临床上呈急性或亚急性发病，以迅速进展的肢体无力、腱反射减弱、肌张力降低为特征，是世界范围内引起急性弛缓性瘫痪的常见病因。目前多认为是由感染等因素诱导、细胞及体液免疫共同介导的自身免疫性疾病，其确切发病机制尚未完全阐明。Toll 样受体（Toll like receptor，TLR）是一种模式识别受体，可以识别病原微生物的保守抗原分子，如脂多糖、肽聚糖等。Toll 样受体信号的过度活化可打破机体对自身抗原的免疫耐受，参与自身免疫性疾病的发生。近年来研究发现 Toll 样受体家族（TLRs ）在 GBS 发病及发展过程中具有重要作用。本文综述了 TLRs 及其信号通路在 GBS 发病机制中的作用，重点介绍 TLR2,4,9在GBS 发病机制中的作用。
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甲型流感病毒天然免疫机制研究进展
流行性感冒病毒,简称流感病毒,属于正粘病毒科.流感病毒感染宿主后,急性高热、全身疼痛、显著乏力和呼吸道症状是其典型的临床症状.感染宿主后,可引起Toll样受体、RIG-Ⅰ样受体和NOD样受体等宿主模式识别受体介导的抗病毒信号通路的激活,诱导干扰素和IL-1,IL-18等细胞因子表达,起到抗病毒的作用.本文对这三类PRRs的作用机制进行阐述.
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EV71感染患儿Toll样受体表达初探
目的 探讨肠道病毒71型( EV71)感染患儿免疫活性细胞模式识别受体(pattern recognition receptor，PRR)及细胞因子水平的变化。方法 EV71感染患儿71例，其中轻症EV71感染组20例，重症EV71感染组25例，危重症EV71感染组26例，同年龄正常对照组20例。采用real -time PCR检测外周血单个核细胞维甲酸蛋白Ⅰ(retinoic acidinducible gene Ⅰ，RIG-Ⅰ)、黑色素瘤分化相关基因5（melanoma differentitation-associated gene 5，MDA5）及细胞因子(IL-12、IFN-α)表达；流式细胞术检测外周血单核/巨噬细胞( monocyte/macrophages，MC)、髓样树突状细胞(myloid dentritic cells,mDC)及浆样树突状细胞（plasmacytoid dentritic cells，pDC）Toll样受体(TLRs)表达率；ELISA检测细胞因子IL-12及IFN-α的变化。结果 (1)轻症患儿仅TLR7升高，重症EV71感染患儿外周血MC、mDC、pDCTLR7表达明显升高(P＜0.05)，MC、mDC高表达TLR2、3、4，危重症患儿呈下降趋势。(2)EV71感染患儿胞内模式识别受体RIG- Ⅰ/MDA5 mRNA表达明显增加；(3)轻症患儿DC相关细胞因子有上升趋势，重症患儿DC相关细胞因子IL-12、IFN-α明显增高(P＜0.05)，轻症及危重症患儿明显降低(P＜0.05)。结论 TLR7可能是免疫活性细胞识别EV71的主要模式识别受体；RIG-I/MDA5也可能参与识别EV71；合并细菌感染或细胞破坏释放的内源性配体导致TLR2或TLR4活化，诱导炎症反应。
关键词： EV71感染 模式识别受体 Toll样受体 RIG-Ⅰ/MDA5 免疫功能 -
胞浆蛋白NOD1和NOD2在天然免疫中的作用
天然免疫系统存在于所有多细胞动物中,只有脊椎动物同时还具有获得性免疫系统.在微生物感染的早期,天然免疫反应为快速,能区别"自己"与"非己".但是病原体种类繁多,结构各异,而由胚系基因编码的识别分子数量有限,相对较少的识别分子较难识别众多的病原体.病原体在漫长的进化过程中保留着高度保守的结构基序,这些基序被称为病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP).PAMP可被有限的受体识别,这些受体称为模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRR).PRR识别PAMP后即启动天然免疫反应,并通过抗原呈递和共刺激信号为获得性免疫反应提供信号[1].因此,PRR在天然免疫中居于重要地位.
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炎症复合体中的 ASC 与气道炎症
固有免疫作为机体的第一道防御系统，对外来病原体的非特异性清除及引导机体产生有效的适应性免疫应答具有重要的作用。固有免疫通过模式识别受体（ pattern recognition receptors ， PRRs ）来识别病原体的保守结构即病原体相关分子模式（ patho-gen-associated molecular patterns ， PAMPs ）及通过危险相关分子模式（ danger associated molecular pat-terns，DAMPs）识别自身的危险信号。机体对PAMP的识别主要通过3种受体：Toll 样受体（ Toll-like re-ceptors，TLRs）、RIG-I 样受体（ RIG-I like receptors， RLRs）和NOD样受体（ NOD-like receptors，NLRs）。NLR主要感受胞内病原微生物产物及代谢性应激，其被激活后，可形成多蛋白复合物即炎症复合体（ inflammasomes ）［1］。 NLRP将信号传递至接头蛋白（ the apoptotic speck-like protein containing a caspase recruitment domain ，ASC），激活天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶-1（ caspase-1），进而对白细胞介素（ IL）-1β、IL-18及IL-33等炎症因子的前体形式进行切割，促进其成熟并释放，能够使机体对感染和损伤产生全身或局部的反应，在慢性和急性炎症反应中起着重要的作用。
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单核／巨噬细胞表面髓样细胞表达激发受体（TREM）-1分子的促炎作用及其调控机制
巨噬细胞是一类重要的免疫调节和免疫效应细胞。它们存在于所有组织中，具有极大的可塑性和功能多样性，是免疫应答、组织修复、维持机体稳态的关键调节者。巨噬细胞表达各种受体，这些受体是巨噬细胞实现多种功能的基础。巨噬细胞能通过模式识别受体（ pattern recognition recep-tor， PRR），如Toll样受体（ Toll-like receptor， TLR）、清道夫受体、Nod样受体等（ Nod-like receptor， NLR），识别病原体相关分子模式（ pathogen-associated molecular patterns， PAMPs）起动固有免疫应答，并通过抗原提呈功能激活适应性免疫应答［1］；通过调理性受体，如免疫球蛋白超家族受体、补体受体等，识别免疫球蛋白或其他免疫复合物，调节免疫应答的强度，保持免疫系统的内稳态［2］；通过多种细胞因子受体实现细胞的迁移、活化和免疫应答的调节功能。
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NODs蛋白及其与TLRs相互调控在机体抗病原真菌感染中的作用
宿主的模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)主要包括Toll样受体(TLRs)和核苷酸结合寡聚化结构域( NODs)两大类受体[1],其中TLRs是胞膜模式识别受体,NODs是近年来新发现的胞质模式识别受体.目前,已有大量关于TLRs与NODs在细菌感染免疫应答中作用的研究,但NODs蛋白在真菌感染中作用的研究报道屈指可数,且NODs与TLRs在抗病原真菌感染中相互调控关系的机制尚不明确.本文主要对NODs蛋白信号通路,NODs与TLRs相互调控关系,NODs蛋白在抗病原真菌感染免疫应答中的作用进行综述.
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经典炎症小体的激活机制与功能
从原生动物到人类，脊椎动物通过固有和适应性免疫系统来对抗病原体［1］。在哺乳动物中，固有免疫系统识别病原微生物后起始了初的防御反应，接下来树突状细胞（ den-driticcells， DCs ）和其他抗原提呈细胞（ antigen-presenting cells，APCs）将有害抗原传递给适应性免疫系统的B和T淋巴细胞。淋巴细胞识别外来物质后，通过释放细胞因子、细胞毒性物质和分泌抗体将目标物进行清除［2］。在淋巴细胞中，抗原受体基因的重排使适应性免疫系统来识别不同的抗原，而在固有免疫系统中则是通过一系列的模式识别受体（ pattern recognition receptors ，PRRs）识别病原体。 PRRs识别病原体的多种保守结构分子称之为病原相关分子模式（ pathogen-associated molecular patterns ， PAMPs ）。微生物核酸、分泌蛋白和细胞壁组分都是 PRRs 所识别的保守PAMPs。另外PRRs也能够识别损伤的宿主细胞释放的危险相关分子模式（danger-associated molecular patterns，DAMPs），如脲酸晶体、ATP、高迁移率族蛋白1（ highmobility group box 1，HMGB1）、热休克蛋白（heat-shock proteins，HSP）70和HSP90。
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胞质DNA感受器的研究进展
病原微生物入侵可激活宿主免疫系统产生抗感染免疫应答.宿主的抗病原微生物免疫应答可分两个阶段:固有免疫和适应性免疫应答.固有免疫是抵抗病原微生物的第一道防线,是物种进化过程中逐渐形成的,可通过感受器识别入侵的病原微生物,并迅速激活固有免疫应答,进而激活适应性免疫应答并限制病原微生物的扩散.宿主免疫细胞是通过模式识别受体(pattern recognition receptors,PRR)识别病原体相关分子模式( pathogen-associated molecular patterns,PAMP)来启动固有免疫应答.DNA是一种重要的病原体相关分子模式.本综述就目前已报道的固有免疫DNA感受器及其新研究进展作一介绍和总结.
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Toll 受体9对配体的识别及信号传导的研究进展
Toll 样受体(Toll-like receptors,TLRs)是一类重要的模式识别受体,在识别病原微生物方面具有重要作用.到目前为止, TLRs 在哺乳动物的身上共发现了13 种,即TLR1 ～TLR13[1] ,其中TLR9 识别的配体主要是细菌和病毒的DNA.本文现就近年来发现一些新的TLR9 配体及信号传导通路做一综述.
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Toll样受体2/4在心脏疾病中的作用研究进展
Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是固有免疫系统中特异的Ⅰ型跨膜受体及病原模式识别受体[1].TLR能特异性识别病原体相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP),通过激活细胞信号转导途径,激活机体固有的免疫反应,构成机体抵御病原微生物的第一道防线,而且TLR还能调节适应性免疫,是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁.TLRs不仅表达于免疫细胞,而且也表达于心肌细胞,与心脏疾病的发生发展密切相关.其中研究得较为成熟的是TLR2和TLR4,大量研究显示TLR2/4介导了各种急性心肌损伤和慢性心脏病的发生发展,本文就TLR2/4在脓毒性心肌病、心肌缺血再灌注损伤、心肌缺血预处理、慢性心力衰竭和心肌重塑中的研究进展进行综述.
