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SELEX技术及其应用研究进展
SELEX技术是一类在体外筛选能与各种配体特异结合的寡聚核苷酸片段的一项新组合化学技术,具有靶分子范围广,筛选出的配体亲和力和特异性高等特点.筛选出的特异寡聚核苷酸片段,不仅在疾病的诊断、治疗与药物的快速开发等方面起着重要作用,也为核酸结构和功能的研究提供了一个有效的方法.
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法尼酯X受体调控因素及配体的研究进展
法尼酯X受体(Farnesoid X Receptor,FXR)属于核激素受体超家族中的一员,作为一种胆汁酸受体和胆汁酸生物合成的生物感受器,参与机体多种生理活动。因此揭示FXR转录表达的调控因素以及寻找具有选择性和高活性的FXR配体,为新药研发提供新思路具有重要的意义。因而对FXR表达调控和配体的新研究进行综述。
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特发性血小板减少性紫癜患者单个核细胞PD-1/PD-Ls的变化及临床意义
目的 探讨特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患者外周血程序性死亡因子PD-1及其配体(PD-Ls)的变化及临床意义.方法 收集26例初诊为急性ITP成人患者治疗前、治疗后3个月、6个月以及1年的外周血标本,用流式细胞术检测其外周血T淋巴细胞和单核细胞上分子(CD273、CD274和CD279)的表达水平;对各项指标进行相关性分析和随机区组的方差检验.结果 与ITP患者治疗前相比,治疗后3个月、6个月以及1年的患者单核细胞PD-Ls表达水平均显著性下降(P<0.05);与治疗后3个月相比,治疗后6个月以及1年的患者CD8+T淋巴细胞PD-1表达显著性升高(P<0.05);相关性分析显示ITP患者中单核细胞PD-Ls表达与CD8+T淋巴细胞的PD-1呈正相关(P<0.01).结论 ITP患者治疗过程中血小板数量的变化与单个核细胞PD-1/PD-Ls的表达水平存在关联性,证实PD-1/PD-Ls可作为观察ITP疗效的动态指标.
关键词: 特发性血小板减少性紫癜 程序性死亡因子 配体 -
结核分枝杆菌环七肽配体分子的筛选和鉴定
目的 基于噬菌体展示随机环七肽库,通过亲和筛选获得结核分枝杆菌(MTB)环七肽配体分子,初步鉴定其与分枝杆菌的结合能力,以优化纳米检测.方法 以MTB标准株H37Rv灭活菌体为靶分子,卡介苗(BCG)为反筛分子,对噬菌体展示随机环七肽文库进行筛选.4轮淘选后,挑选H37Rv和BCG洗脱单噬菌体进行测序,ELISA检测单噬菌体与其亲和力将高亲和力单噬菌体所展示环肽进行体外合成,并标记荧光,荧光显微镜与流式细胞仪检测合成环肽的结合活性,并与前期获得的线性结合肽进行比较.结果 经过4轮亲合淘选,能与靶分子结合的噬菌体明显富集.单噬菌体测序共获得16种共同序列.ELISA检测显示,单噬菌体SB1、SB5、SB8、SB26与H37Rv和BCG的亲和力均较高,其吸光度值(A450)与阴性对照吸光度值(A450)比≥2.1,与3种非分枝杆菌不结合,确定为阳性克隆.流式细胞仪检测结果显示,H37Rv与环肽SB1、SB5、SB24、SB26结合的阳性细胞率分别为(73.2±6.3)%、(63.2±5.3)%、(32.9±3.1)%、(89.4±7.0)%;BCG与这4种环肽结合的阳性细胞率分别为(65.6±6.1)%、(48.6±4.5)%、(10.3±1.8)%、(86.6±7.9)%,H37Rv和BCG与4种环肽结合的阳性细胞率均高于H8[(4.0±1.0)%、(5.5±1.2)%].荧光显微镜观察结果显示,环肽SB1、SB5、SB24、SB26荧光肽均与H37Rv发生结合,荧光强度较强,与其他18种分枝杆菌均有一定的亲和力,但荧光强度弱于H37Rv,与3种非分枝杆菌均不结合.结论 本研究以环七肽库替代线性七肽库,成功筛选获得新的MTB配体分子,其与分枝杆菌的亲和力提高.
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SELEX技术及其在医学中的应用
指数富集配基的系统进化(SELEX)技术是一类新的组合化学技术,应用人工合成的随机寡核苷酸文库,通过筛选、分离、富集获得能与各种配体特异结合的寡核苷酸适配子(Aptamer),且具有高亲和力.目前涉及多种疾病治疗的适配子,包括感染性疾病,肿瘤,心血管疾病,免疫系统疾病等已被筛选出来,并且疗效已经通过体外实验或动物模型得到证实.两个适配子已进入药物Ⅲ期临床实验阶段,还有很多适配子正处于预临床实验阶段,其中部分将很快进入临床实验.本文综述了SELEX技术及寡核苷酸适配子在治疗领域的新进展,并且对其前景进行了分析和预测.
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过氧化物酶体增殖物活化的受体γ特异配体罗格列酮对肝星状细胞生物学特性的影响
目的研究过氧化物酶体增殖物活化的受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)PPARγ表达以及对HSC生物学特性的影响. 方法设立空白对照组、3 μmol/L罗格列酮组、10 μmol/L罗格列酮组;分别用RT-PCR、Western印迹、免疫细胞化学方法检测PPARγ的表达;用Western印迹和免疫细胞化学方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;四甲基偶氮唑盐(methythiazolyltetrazolium,MTT)法检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞凋亡. 结果10 μmol/L罗格列酮组HSC的PPARγmRNA表达明显高于对照组(t=10.87,P<0.01),PPARγ蛋白表达也明显高于对照组(t=4.627,P<0.01);10μmol/L罗格列酮组HSC的增殖活性显著低于对照组(t≥5.542,P<0.01),其α-SMA及Ⅰ型胶原表达明显低于对照组(t≥4.627,P<0.01),其凋亡发生率显著高于对照组(x2=16.682,P<0.01). 结论 PPARγ特异配体罗格列酮通过增加PPARγ的表达,能够抑制激活的HSC表达α-SMA及Ⅰ胶原,抑制激活的HSC增殖,诱导激活的HSC凋亡.
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程序性死亡-1蛋白及其配体与移植免疫耐受相关性研究进展
通过对B7超家族分子中新热点:程序性死亡-1蛋白(PD-1)及其配体(PD-L1和PD-L2)的相关信息及其在免疫应答调控中的作用,以及其在心脏移植、肝脏移植、异体角膜移植、肾移植等领域的移植免疫耐受研究的结果认为,PD-1信号通路的增强已经成为各移植领域寻求增强免疫耐受的重要新途径,对其机制的进一步研究,将在临床器官移植领域拥有广阔的应用前景.
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脂质过氧化物体增殖物激活受体研究概况
脂质过氧化物体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors, PPARs)家族由PPARα、PPARβ/δ和PPARγ三种核受体组成.PPARs是配体调节的转录因子,与另外一种核受体视黄醛衍生物X受体(RXR)形成异二聚体,结合到靶基因启动子区的特异反应元件(PPRE)上,从而发挥重要的调节基因表达的作用.现在已知有多种天然及合成的PPARs配体,其中,合成药物fibrates (PPARα配体)及thiazolidinediones (PPARγ配体)分别能有效地治疗血脂异常及2型糖尿病.利用这些配体对PPARs进行研究,揭示了PPARs在脂肪形成、脂质代谢、糖稳态、胰岛素敏感性、细胞生长及分化、动脉粥样硬化、炎症及肿瘤等多种生理及病理生理过程中的重要作用.本文对PPARs的结构、组织分布、主要配体,以及它们在健康和疾病状态下的作用进行综述.
关键词: 脂质过氧化物体增殖物激活受体 配体 脂质代谢 -
肿瘤相关糖基结合蛋白Galectin-3及其治疗性配体
糖类参与细胞间黏附、细胞与胞外基质黏附、细胞间特异性识别等过程.Galectin-3是哺乳动物体内存在的非酶类蛋白质,其结构上保守的碳水化合物识别结构域能优先与β-半乳糖苷类结构结合,参与生理生化反应.含有半乳糖苷或类似结构的物质,包括化学修饰糖类、功能多肽、天然改性糖类,作为galectin-3的配体,能不同程度地干预糖基和蛋白质的相互作用,抑制在肿瘤生长、侵袭和转移中具有重要作用的细胞间识别和黏附等过程.
关键词: Galectin-3 配体 肿瘤 治疗作用 -
孤儿G蛋白偶联受体研究进展
孤儿G蛋白偶联受体的研究意味着发现其尚未了解的内源性配体,是后基因组时代功能基因组学研究的热点之一,对生命科学的发展具有深远的影响.本文介绍孤儿G蛋白偶联受体的概念、研究策略及其应用.
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酰化型和去酰化型ghrelin可促进人内脏脂肪细胞的脂质积聚
Ghrelin是主要由胃分泌的含28个氨基酸残基的多肽,是生长激素促分泌受体(growth hormone secretagogue receptor,GHS-R)的内源性配体.
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NOTCH配体Jagged2和Delta4对32D细胞的分化抑制研究
目的探讨Notch信号传导系统中相关配体Jagged2和Delta4对髓系前体细胞32D的分化抑制作用.方法构建Delta4高表达载体pTracer.CMV.Delta4.FLAG,制备Delta4-CHO细胞;将Notch1-32D细胞加入含G-CSF培养液的CHO、Jagged2-CHO及Delta4-CHO细胞中,观察Notch1-32D细胞分化及分化抑制情况. 结果构建成功Delta4高表达载体pTracer.CMV.Delta4.FLAG并稳定转染CHO细胞.在G-CSF存在下,Notch1-32D细胞可分化为成熟的粒细胞; Jagged2能抑制G-CSF引起的Notch1-32D细胞分化,但Delta4不能抑制G-CSF引起的Notch1-32D 细胞分化.结论分化抑制实验发现NOTCH 配体中,Delta4不能抑制G-CSF引起的Notch1-32D细胞分化,但Jagged2能抑制G-CSF引起的Notch1-32D细胞分化,为进一步揭示Notch信号传导系统的作用机制及其对造血系统的影响提供重要理论依据.
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Apelin在心力衰竭中的作用的研究进展
1998年Tatemoto等[1]首次提取并纯化的Apelin是孤儿G蛋白偶联受体APJ(angiotensinⅡprotein J)的内源性配体,在组织中分布广泛.Apelin的表达异常与心力衰竭的发生发展密切相关,在人类和动物的研究中均显示补充Apelin能够改善心功能.近来Apelin在心力衰竭中的作用被广泛关注,本文就其新进展做一综述.
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hDll1ext-Fc融合蛋白的表达纯化与初步鉴定
目的获得高效表达 hDll1ext-Fc 融合蛋白的细胞系以及具有生物学活性的目的蛋白。
方法根据已知序列设计引物,并将 hDll1ext 基因片段经PCR 扩增,酶切后连接至 pIRES2-EGFP-Fc 中,挑选阳性克隆测序,将正确的重组质粒转染至 CHO-S 细胞,筛选高表达细胞系,利用 rProtein A 亲和柱纯化目的蛋白,并通过检测 Notch 下游信号分子 Hes1的表达及双荧光素酶报告基因实验检测蛋白活性。
结果构建了 pIRES2-EGFP-hDll1ext-Fc 真核表达载体,并筛选了高效表达 hDll1ext-Fc 的 CHO-S 细胞系,纯化得到较高纯度的融合蛋白,配合生物活性检测实验显示,可溶性的 hDll1ext-Fc 能够激活 Hes1报告基因,并且能上调Notch 下游分子 Hes1的表达,证明其能够激活 Notch 信号通路。
结论在 CHO-S 细胞中成功表达了 hDll1ext-Fc 融合蛋白,为进一步研究 Delta-like-1的生物学功能奠定重要基础。关键词: 配体 Notch CHO 细胞 Delta-like Fc融合蛋白 -
NK细胞免疫球蛋白样受体与异基因造血干细胞移植的研究进展
NK细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptors,KIR)是主要表达于人NK细胞表面的受体,在所有人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)Ⅰ类分子所识别的NK细胞独特型受体中,免疫球蛋白样超家族受体KIR占主导地位.由于它的配体参与多种免疫反应,因此,KIR在机体抗感染免疫、肿瘤免疫和移植免疫中都发挥重要作用.
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治疗性人源抗狂犬病毒抗体研究进展
狂犬病是由狂犬病毒(rabies virus,RV)引起的人兽共患疾病,发病后死亡率几乎达百分之百.狂犬病毒属弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病毒属(Lyssavirus),基因组编码五种结构蛋白,其中由G基因编码的糖蛋白,是病毒与宿主细胞结合的配体,能诱导机体产生中和抗体,与病毒的毒力、致病性密切相关.
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蛋白CXCR7的发现及其作用
CXCR7,以前称为RDC1,1989年从狗甲状腺cDNA库筛选出来的,初报道是一个具有血管活性肠肽(VIP)的受体,接着被确定为与降钙素基因相关肽结合的受体,后来又认为与肾上腺髓质素结合,然而这些定论终都被否决了.事实上,RDCI与已知的一些趋化因子受体有高度相似序列,故属于G蛋白耦联受体(G-protein coupled receptor,GPCR)的亚族[1].然而因为不知道或者认为没有配体故一直将RDC1归类为孤儿GPCR[2].
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黄芩苷对BCG感染后巨噬细胞表达NKG2 D配体及NK细胞杀伤活性的影响
目的:探讨卡介苗(BCG)感染对巨噬细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1和ULBP2)表达的影响,以及黄芩苷对配体表达及NK细胞杀伤活性的影响。方法佛波醇酯( PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,建立BCG感染巨噬细胞模型,进一步用黄芩苷干预感染模型,分别采用real-time PCR和Western blot检测MICA、MICB、ULBP1和ULBP2 mRNA水平和蛋白表达水平。人外周血单个核细胞( PBMC)诱导分化扩增的NK细胞与感染后巨噬细胞共孵育4 h后,采用RTCA DP实时无标记细胞分析仪检测NK细胞的杀伤活性。结果 BCG感染可上调MICA、MICB、ULBP1和ULBP2 mRNA水平和MICA、ULBP1蛋白表达水平。1 mg/L黄芩苷处理72 h后可显著促进MICA和ULBP1 mRNA和蛋白表达,并增加NK细胞对BCG感染后巨噬细胞的杀伤率。结论 BCG感染可诱导人巨噬细胞NKG2D配体表达增加,但不能有效活化NK细胞;黄芩苷可进一步上调感染后巨噬细胞表达NKG2D配体,进而促进NK细胞杀伤活性。
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Toll样受体相关因素对小鼠血细胞分化的促进与抑制作用
Toll样受体(TLR)是一种天然免疫受体,识别各自配体后,通过MyD88或不依赖MyD88途径,活化下游MAPK和NF-κB信号途径,从而激活树突状细胞(DC)成熟而导致DC释放细胞因子.
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银屑病患者骨髓CD34+细胞Notch受体的表达
Notch信号传导通路广泛参与了包括造血干细胞在内的诸多干细胞的发育分化过程,对干细胞状态的维持和终末分化的方向等起着决定性的作用.在造血细胞的发育过程中,Notch受体1和2不同程度地表达以及被不同的配体活化决定了造血十细胞向淋巴细胞系或髓细胞系分化.为进一步研究Notch信号通路是否参与了银屑病的发病过程,本研究采用半定量RT-PCR法检测了24例寻常型银屑病患者和18例正常对照骨髓CD34+细胞两种Notch受体mBNA的表达情况.