首页 > 文献资料
-
黄病毒的感染性克隆和嵌合突变体
感染性克隆技术已广泛应用于深入阐明黄病毒致病机理、构建病毒载体等研究领域,其中利用感染性克隆构建嵌合突变体是黄病毒疫苗研究中很有希望的新途径.本文就该研究的新进展作一简要综述.
-
TA克隆的快速鉴定
TA克隆技术原理是Taq酶参与的PCR反应中,产物双链核酸中的3′端各多连接一个脱氧腺嘌呤核苷酸(A),与商业开发的5′端各多一个脱氧胸腺嘧啶核苷酸(T)的质粒载体,在DNA连接酶作用下,按碱基配对形成环状的完整质粒,转化细菌,质粒扩增形成克隆.由于存在载体自连的现象,TA克隆的鉴定十分必要,本文利用快速质粒提取和载体中现有的成对限制性内切酶位点,使TA克隆技术更方便实用.
-
克隆技术:一个熟悉却又陌生的话题
近各大媒体刊载,第58届联合国大会法律委员会11月6日表决通过了由伊斯兰会议组织成员国提出的一项程序性协议,决定将"禁止人的生殖性克隆国际公约"议题推迟两年至第60届联大时再予审议,包括中国等在内的80个国家投了赞成票,美国等79个国家投了反对票,15国弃权.
-
生物技术在预防医学领域中的应用及21世纪展望
20世纪50年代遗传密码的破译、70年代遗传工程技术的建立及80年代聚合酶链反应(PCR)技术的发明,无一不为预防医学的研究与发展输入了新鲜血液,特别是进入90年代以来,人类基因组计划(HGP)、蛋白质组计划、环境基因组计划(EGP)、微生物基因组计划的实施,分子克隆技术的成熟,转基因动、植物的出现,以及生物传感器和生物芯片技术的建立,给预防医学的发展奠定了坚实的基础.我们就生物技术对提高环境质量的作用、生物技术与食品科学研究及对生物技术的争论等有限的领域进行简要评述.
-
中国早应用老母丸克隆成功人胚胎
根据300年前的手抄本"老母丸"和寡妇孕胎并参考有关现代克隆技术和部分国外信息2009年7-8月间,我在多年来看到的科技信息和有关克隆资料的回忆中,突然产生了"灵感",这不就是300多年前手抄本中哪个<老母丸>中所记述的年53岁陈寡妇因不相信<老母丸>神奇治疗的效果,戏服了该药,之后,"老色改变,容如少女,守寡有孕,后将胎墜落,心下疑之,从无配合,胎从何来?看其无骨,以有阴无阳之故耳."
-
RNA病毒反向遗传操作技术研究进展
近年来,在分子病毒学研究领域兴起一门新型技术,即病毒的全长感染性cDNA克隆技术,是一种反向遗传操作技术(reverse genetics),通常被称为"病毒拯救(the rescue of virus)",它解决了对RNA病毒基因组难以操作这一困扰研究者多年的难题.从cDNA克隆拯救出负链RNA全病毒是20世纪90年代分子病毒学研究领域振奋人心的突破之一,它开启了人们对病毒基因组进行人工操作和详细了解病毒基因及其产物功能的大门.该技术发展迅速,倍受国内外研究者关注[1-5].
-
瘦素及其临床功能研究进展
1 瘦素的发现大约40多年前,肯尼迪在其猜想中提到有一种可以调节体重,尤其是脂肪组织数量的激素存在,且这种物质由脂肪组织自身产生,并分泌入血.位于下丘脑的新陈代谢控制中心根据自身设定的标准,监测该物质的血中浓度;如果其浓度超过标准值,中心将采取措施改变能量的摄取或消耗,从而达到机体能量平衡.从那以后,无数生理实验证实了该物质的存在,但却不能探明其真实身份.直至1994年,英国学者Zhang等[1]利用定位克隆技术,首次成功地克隆了遗传性肥胖小鼠(ob/ob小鼠)的肥胖基因及其人类的同源序列.
-
细胞因子作为DNA疫苗基因佐剂的研究进展和探索
20世纪90年代以来,伴随着基因治疗技术的发展,产生了一种新型疫苗--DNA疫苗,又称核酸疫苗.DNA疫苗就是运用克隆技术把编码某种特异抗原的外源基因连接到真核表达载体上,利用重组的质粒DNA免疫机体,使外源基因在活体内表达.
-
人幽门螺杆菌热休克蛋白A编码基因的克隆、表达及抗原性研究
目的:构建含人幽门螺杆菌(Hpylori)热休克蛋白A编码基因的重组载体、进行核甘酸序列分析,并在E. coliBL21中表达,研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础.方法:利用分子克隆技术从Hpylori DNA染色体中,扩增热休克蛋白A编码基因片段;将目的基因与载体pET32a(+)同时经kpnⅠ、BamH Ⅰ双酶切、纯化、连接后,转化含有目的基因的重组载体;以含目的基因片段的重组载体转化大肠杆菌BL21(DE30)并表达;表达产物经纯化后,用Western blot法检测其抗原性.结果:经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hpylori热休克蛋白A编码基因,与GenBank报道的相比较,有1.6%的碱基(bp)发生变异,1.6%的氨基酸残基改变.经SDS-PAGE分析发现,融合基因表达的蛋白Mr为33×103,其中pET32a(+)表达的蛋白Mr约为20×103,可溶性表达产物占全菌总蛋白的18.96%.重组蛋白经Ni+-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95%以上.用Westernblot方法检测显示,该重组蛋白可被Hpylori阳性患者的血清所识别,具有良好的抗原性.结论:成功地克隆并表达了H pylori热休克蛋白A码基因,为Hpylori蛋白质疫苗的研制和快速诊断试剂盒的研究奠定了良好的基础.
-
共聚焦定量分析WAF1-S基因表达对人食管癌细胞系EC109生长的作用
目的:探讨抑癌基因WAF1-S基因在食管癌细胞中的表达以及对食管癌细胞生长的抑制作用,为食管癌发病机制的研究提供一种新的思路,为食管癌基因治疗提供理论基础.方法:采用亚克隆技术,将野生型WAF1-S基因全长,通过双粘端克隆入真核表达载体pcDNA3中,用lipofectamine2000介导的方法转染EC109细胞(人食管癌细胞系).通过打点杂交观察WAF1-S基因mRNA在细胞中的表达,用Western blot及激光共聚焦方法定量分析WAF1-S基因的蛋白表达产物,MTF及流式细胞仪检测EC109的生长状态,分析WAF1基因对食管癌细胞株生长的影响.结果:用内切酶酶切分析证实外源野生型WAF1-S基因克隆入真核表达载体中,经打点杂交证实外源野生型WAF1-S基因可以在EC109细胞中表达,通过激光共聚焦分析证实,转染后的食管癌细胞EC109中WAF1-S的蛋白的表达明显高于对照组(32±15vs11±7,P<0.05),对细胞进行周期分析表明,处于F0~G1期细胞为0.47~0.65.结论:通过转染外源野生型WAF1基因可提高WAF1基因表达,增加食管癌细胞中P21蛋白的表达量,从而提高WAF1基因表达,抑制细胞的生长.
-
HCV母婴传播机制及相关因素研究进展
1 HCV母婴传播的流行病学
1974年Golafield首先报告输血后非甲非乙型肝炎。1989年Choo等应用分子克隆技术获本病毒基因克隆,并命名本病及其病毒为丙型肝炎和HCV。由于HCV基因组在结构和表型特征上与人黄病毒和瘟病毒相类似,将其归为黄病毒科HCV。目前已经证实,HCV是引起母婴间垂直传播(mother-to-child transmission,MTCT)的病原体[1],HCV母婴传播发生率大约为10%。抗HCV药物研制方向主要作用于HCV复制特异阶段的抗HCV药物及抗HCV作用的药物[2],但无有效的方法阻断HCV的母婴传播。母婴传播或垂直传播是儿童HCV感染的主要模式[3]。1992年以前,HCV感染的主要是通过血液或血制品途径[4]。加强血液制品的增加检测和测试技术,母婴传播已成为儿童的HCV感染的主要模式。HCV慢性感染可导致慢性肝脏炎症坏死和纤维化,一些患者可能产生肝癌。多数无症状的丙型肝炎患者在怀孕期间,10%以下的患者存在ALT升高。儿童感染HCV的机率较小,但母婴垂直传播增加了儿童的感染机率[5]。目前临床上无预防HCV感染的疫苗。临床上对丙型肝炎患者的治疗方案为Peg-IFN-α和RBV进行联合治疗[6]。 -
瘦素的生物学特性及其诱导的信号传导途径
瘦素(leptin, Lep)一直以来被认为是抑制肥胖症的主要物质,是ob基因的表达产物.Ob基因1994年由Zhang等人使用定位克隆技术发现,在小鼠中该基因定位于6号染色体,而在人类细胞中则分布于7号染色体上,这两种不同种属的基因编码同一种蛋白质,显示了在物种之间具有极高的同源性.
-
慢性乙型肝炎治疗的过去、现在和未来
Blumberg博士在1963年通过蛋白电泳技术,在来源于澳大利亚的一份血样中发现了一种新型的抗原,并命名为澳大利亚抗原(Australia antigen, AuAg),后来证实这种AuAg与乙型肝炎(hepatitis B,HB)相关,事实上属于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的表面抗原,从而开启了乙型肝炎研究的新时代[1]。也正是因为这一重要发现,Blumberg博士获得了诺贝尔医学奖。在此后的50多年里,乙型肝炎研究领域出现了许多重要发现和进展,包括一系列的诊断技术的应用。上个世纪80年代出现的杂交瘤技术和分子克隆技术,促进了乙型肝炎病原学研究的不断进步。酵母细胞表达的重组乙肝疫苗在HBV感染高流行区的预防控制方面发挥了重要作用。同时,临床医师对乙型肝炎患者自然史的研究,也成为医学界临床疾病研究的一个典范[2]。
-
泌尿组织工程学的进展
20世纪末期组织工程学为组织或器官的修复与重建带来了全新的概念.从初的材料修复到现在的干细胞和克隆技术的运用,组织工程技术在泌尿外科学的研究已经从实验室和动物模型阶段向人体临床应用发展,新技术、新方法、新的理念也伴随着基础研究和临床实践不断涌现.
-
深入开展组织由解剖修复到功能性修复的应用基础研究
尽管创面愈合与组织再生修复是一个十分古老的课题,近十余年来,人们对这一领域的进展仍然高度重视,并相竞开展研究.其主要原因有两个方面:一是现代高新生物技术的发展,特别是克隆技术、分子生物学技术、组织工程技术以及干细胞技术的发展和应用,为科学家深入开展创面愈合与组织再生修复的基础理论研究和在实际应用中实现理想化的组织修复提供了美好的前景;
-
中国辅助生殖技术回顾与展望
辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)是指对不孕或不育患者进行助孕或优生,使之妊娠并分娩正常婴儿的技术.广义的辅助生殖技术包括体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryotransfer,IVF-ET)及其衍生技术、人工授精、人类胚胎干细胞以及克隆技术等.
-
HIV基因组感染性克隆的构建原理及应用
感染性克隆技术也称拯救病毒,是将病毒的基因组RNA逆转录成cDNA,对得到的cDNA进行修饰和改造,进行克隆后,利用体外转录技术或其他的方法,将cDNA拷贝转回到RNA状态,成为改造后的病毒基因组.而感染性克隆就是指在细菌质粒中含有病毒全基因组的cDNA拷贝,使得cDNA本身或从cDNA体外转录所得的RNA具有感染性.
-
瘦素(Leptin)与运动
1 瘦素的生物学1994年Zhang等利用定位克隆技术首次成功地克隆了小鼠的肥胖(Obese,Ob)基因及人类的同源序列[1].Leptin是由肥胖基因Ob编码,脂肪细胞分泌的一种含167个氨基酸组成的蛋白质类激素,在分泌入血过程中,去除其中由21个氨基酸组成的N-端信号肽,形成Leptin.成熟的Leptin含146个氨基酸,分子量为16kD.人和其他种属的瘦素蛋白质有很高的同源性,如与小鼠的同源性为84%,与大鼠的同源性为83%.肥胖基因的克隆具有两方面的重要意义:第一,证实了将近40年前Kennedy[2] 的脂源性因子的假设,尽管人们对脂肪组织还不能象对一个内分泌器官一样完全了解,但这在生理学史上翻开了重要的一章;第二,有力促进了各学科对瘦素生物学的研究,更重要的是促进了对能量平衡的总体生物学的研究.自从Zhang等人[1]首次报道以来,有将近3000篇研究瘦素的文章发表,说明了研究者对此的极大兴趣.
-
国外有关克隆技术的法制规定
自1997年克隆羊多莉诞生后,引起各国政府对克隆技术在人体和科学研究中所出现的问题的重视.近年体细胞克隆技术、核移植技术和胚胎干细胞培育技术已日趋成熟,一方面通过动物实验可以解决生命科学上的未知问题,尤其是人们期待其在再生医学和再生医疗上发挥作用;另一方面各国政府和科研人员也感觉到,在克隆动物实验研究和克隆技术应用于人类的实验研究方面其界限尚不清楚.在这种情况下,世界各国相继制定了各种法律法规,对此项研究进行规制.在1997年5月世界卫生组织(WHO)的会议上制定了"关于克隆技术的决议",明确指出不允许将克隆技术应用于人类.在1997年6月的八国首脑会议上,法国总统希拉克提议禁止克隆人,并异例地将其作为一项内容写入了八国首脑宣言.
-
丙型肝炎病毒非结构区的研究进展
1989年美国的Chiron公司和美国疾病控制中心(CDC)通力合作,摒弃传统病毒学研究方法,将分子克隆技术首先引用到肝炎病毒学研究中,并于当年成功地获得第一个HCVcDNA克隆[1].此后几十年内,有关HCV的形态、结构、生物功能的研究已取得了很大的进展.对HCV基因组序列的比较分析表明,非结构区编码的蛋白包括几个重要功能元件基序,他们在病毒的复制及致病中起着重要的作用,这些结构的功能均由体外实验证实.现就近年来有关HCV非结构区的研究,综述如下.