首页 > 文献资料
-
细胞重新编程:"生产"人体细胞
2008年12月18日,美国<科学>杂志评出了2008年度十大科学进展,细胞重新编程(Reprogramming cells)成为十大科学进展之首.之所以把细胞重新编程列为2008年十大科学进展之冠,是因为这一方式开辟了再生医学的新天地,人们可以绕过胚胎干细胞的伦理争论而直接让各种细胞重新编程,成为各种类型的干细胞,并可以生长为各种组织和器官,为再生医学奠定物质基础.
-
041 多能干细胞--发育毒性研究的新思路
近年来多能干细胞引起了许多科学家的关注,在临床中已被作为一种基因治疗和细胞治疗手段广泛应用于多种难治之症的研究,如帕金森病、老年性痴呆、肿瘤以及器官移植等.同时,多能干细胞作为一种原始细胞具有旺盛的增殖、自我稳定能力和多向分化的潜能,因此,还可以作为一种新的测试细胞应用于环境因素致发育毒性的检测和机制研究.它的应用无疑为生殖发育毒理研究打开了一扇崭新的大门.
-
153胚胎干细胞实验方法及其在发育毒性研究中的意义
胚胎干细胞是一种存在于着床前早期胚胎中具有发育全能性的细胞,可在体外培养、传代并保持其全能性.在一定条件下,胚胎干细胞可发育成各种细胞,包括心肌细胞.胚胎干细胞试验就是利用胚胎干细胞在体外分化成心肌细胞的能力来检测受试物的胚胎毒性、致畸性,并对其进行评价.本文介绍了目前已建立的胚胎干细胞试验的主要实验方法及应用情况.
-
人胚胎干细胞建系及体外诱导分化的研究进展
人胚胎干细胞源自囊胚内细胞团(inner cell mass,ICM),能无限增殖并保持未分化状态(保持完整的、正常的染色体核型)的细胞.它可分化为来源于3个胚层的多种细胞.这种特性在世界范围内掀起了对人胚胎干细胞的研究热潮,并取得了飞速发展.本文就人胚胎干细胞建系及体外培养分化的研究进展作一综述.
-
胚胎干细胞嵌合体小鼠的制备及其影响因素
胚胎干细胞(ES cell)嵌合体制备在发育生物学,功能基因组学等研究领域发挥越来越重要的作用.其技术本身随着干细胞生物学,体细胞核移植技术进步而不断发展.但其制备过程受ES细胞,宿主囊胚遗传背景、生存状态及嵌合体制备程序等诸多因素影响,导致ES细胞嵌合体的制备程序颇为复杂.本文将对ES细胞嵌合体小鼠制备技术的新进展作一综述.
-
干细胞向生殖细胞分化的研究进展
干细胞(SCs)具有在体外分化为生殖细胞的潜能,为研究生殖细胞(GCs)早期发育提供了良好的模型,并将为干细胞移植修复生殖功能提供细胞资源.本文综述了胚胎干细胞/诱导多能干细胞(ESCs/iPSCs)、新生儿附属物来源干细胞(NDSCs)以及成体干细胞(ASCs)向生殖细胞分化所取得的研究进展,同时总结了各类干细胞向生殖细胞分化时所遇到的障碍及所面临的挑战,为干细胞在生殖医学领域的应用提供理论依据.
-
用囊胚内细胞团建立小鼠胚胎干细胞系的尝试
目的 建立小鼠129品系胚胎干细胞(ES)系.方法 分离囊胚内细胞团接种至小鼠胚胎成纤维细胞,培养、传代以获得细胞系,通过形态观察、碱性磷酸酶检查、体内外分化实验予以鉴定.结果 共获取12个囊胚,培养后有9个内细胞团增殖,消化传代,分离出2株克隆;形态观察具有明显的ES细胞形态,染色体核型检查为XY,碱性磷酸酶检查细胞呈阳性,体外分化实验表明可自发分化为外、中和内胚层细胞,体内分化实验获得典型的畸胎瘤,并具备小鼠特异性表面标志物Oct-4、SSEA-1.结论 应用本方法建立了两株129品系胚胎干细胞系,并证实其符合小鼠胚胎干细胞的特征.
-
人胎肺成纤维细胞对小鼠胚胎干细胞生长支持作用的研究
目的 探讨人胎肺成纤维细胞(hELF)作为饲养层支持小鼠胚胎干细胞(ES)的生长及维持ES细胞的未分化状态.方法 采用生长状态良好的hELF,经一定浓度的丝裂霉素C处理后,制备hELF饲养层,将ES细胞接种到该饲养层进行传代培养.观察ES细胞的形态学特征,测定ES细胞表面碱性磷酸酶(AKP)活性、干细胞标志物Oct-4的表达.结果 hELF细胞经丝裂霉素C处理后不再增殖,保持较好的细胞功能和形态学特征.ES细胞克隆在饲养层呈现集落状隆起生长,边缘清楚,结构致密,与周围的饲养层细胞界限清楚.ES细胞仍然保持未分化状态,高度表达AKP及胚胎干细胞转录因子Oct-4.结论 hELF作为饲养层可以较好的维持胚胎干细胞的生长及其未分化状态.hELF源自人工流产组织,取材来源较丰富,为hELF饲养层应用于人胚胎干细胞的培养奠定了基础.
-
汉阳PM2.5对人胚胎干细胞来源的成纤维细胞的遗传毒性研究
目的 研究汉阳地区PM2.5对人胚胎干细胞来源的成纤维细胞(EBf-H9细胞)的遗传毒性,验证EBf-H9细胞作为遗传毒性评价模型的可行性,拟为遗传毒性评价提供一个新的可选细胞模型.方法 不同浓度PM2.5作用于EBf-H9细胞24 h,应用CCK-8试剂盒及LDH试剂盒检测EBf-H9细胞的细胞毒性和LDH漏出率;采用单细胞凝胶电泳试验及微核试验评价PM2.5对EBf-H9细胞DNA和染色体损伤程度.结果 细胞毒性试验结果显示,随着PM2.5剂量的增加,细胞存活率逐渐降低,而LDH漏出率呈先增加后降低的趋势,且存在剂量-效应关系;单细胞凝胶电泳试验与双核细胞微核试验结果显示,随着PM2.5剂量的增加,彗星拖尾率与双核细胞微核率逐渐上升,且存在明显的剂量-效应关系.结论 在本试验条件下,汉阳PM2.5引起EBf-H9细胞出现DNA和染色体损伤,初步证实EBf-H9细胞可作为一种新的遗传毒性评价候选细胞模型.
-
应用胚胎干细胞实验模型对人参皂甙Rb1、Rg1发育毒性的初步研究
目的 应用胚胎干细胞试验方法,对人参皂甙Rb1、Rg1发育毒性进行初步的安全性研究.方法 利用悬滴、悬浮培养方法,通过对不同浓度Rb1、Rg1作用条件下,胚胎干细胞在体外分化为心肌细胞能力的测定,结合相应噻唑蓝(MTT)法获得的Rb1、Rg1细胞毒性结果,判断受试物的发育毒性.结果 人参皂甙Rb1、Rg1半数分化抑制浓度(ID50 D3)分别为114±8.21μg/ml和80±5.75μg/ml,其发育毒性的判定依次无、弱.结论 人参皂甙Rg1为弱发育毒性物质,在较高浓度条件下,具有发育毒性作用.
关键词： 胚胎干细胞 人参皂甙Rb1、Rg1 发育毒性 -
苯乙基异硫氰酸盐对神经分化胚胎干细胞凋亡诱导及其机制的研究
目的 研究苯乙基异硫氰酸盐对体外神经分化胚胎干细胞(ES)凋亡的诱导及其作用机制.方法 应用MTT法检测苯乙基异硫氰酸盐对ES细胞活性的影响;体外未分化培养和悬滴、悬浮培养后由5×10-7mol/L视黄酸诱导神经定向分化培养的ES细胞,经不同浓度苯乙基异硫氰酸盐(0、2、4和8 ttmol/L)作用24 h,采用流式细胞仪、Ho-chest33258染色和Capase-3酶活性分析检验ES细胞的凋亡效应,并采用蛋白免疫印迹方法 检测细胞内Bcl-2及Bax基因的表达变化.结果 与阴性对照比较,未分化和神经分化培养的ES细胞在苯乙基异硫氰酸盐作用下均可出现凋亡形态变化、细胞凋亡率增加和胞内Capase-3酶活性上升,同时胞内Bcl-2基因的表达受到抑制,且呈一定剂量反应关系;另相同剂量条件下,苯乙基异硫氰酸盐对神经分化ES细胞凋亡的诱导作用远较未分化ES细胞显著.结论 苯乙基异硫氰酸盐具有诱导神经分化ES细胞发生凋亡的作用,Capase-3活性增加和Bcl-2表达抑制可能是其作用的主要机制.
-
人工合成麝香对胚胎干细胞发育毒性的初步研究
目的 研究常用人工合成麝香吐纳麝香(A HTN)和佳乐麝香(HHCB)对129小鼠胚胎干细胞的发育毒性效应.方法 利用MTT法检测两种麝香对胚胎干细胞的毒性效应,结合不同暴露浓度下麝香对胚胎干细胞体外分化为心肌细胞能力的抑制情况,判断受试物的发育毒性.结果 MTT实验表明,AHTN和HHCB对小鼠胚胎干细胞半数毒性浓度IC50分别为34和29 μg/ml,而分化抑制实验表明这两种麝香对胚胎干细胞向心肌细胞的半数分化抑制浓度ID50分别为257和153 μg/ml.结论 人工麝香对胚胎发育具有弱发育毒性,对孕妇和儿童发育的影响需要在相关的发育毒性研究中给予重视.
关键词： 人工麝香 吐纳麝香(AHTN) 佳乐麝香(HHCB) 胚胎干细胞 -
胚胎干细胞的毒理学应用研究进展
自1995年我们在国内首先介绍胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES)在发育毒理学体外研究中的应用以来[1],ES细胞的分离、培养以及定向分化等分子细胞生物学技术迅猛发展并日趋成熟,在积极应用基因组、蛋白质组以及报告基因和基因表达的系列分析(serial analysis of gene expression,SAGE)技术的基础上,ES细胞的应用已由发育毒理学扩展到整个毒理学领域,为研究环境因素对人类胚胎早期发育的影响提供了极为便利的条件,我们主要就ES细胞在毒理学上的应用研究进展作一综述.
-
体外培养胚胎干细胞分化为心肌细胞特性的初步研究
目的 了解干细胞在实验条件下分化发育为心肌细胞的特征表达与培养时间的关系.方法 收集体外培养条件下第2、4、6、8、10、12、14、16、18和20天的胚胎干细胞,采用RT-PCR方法对其中心肌细胞特异表达基因(α/β-MHC)的表达量进行检测,并通过管家基因(GAPDH)表达量作为内对照;另外收集第0、3、5、10天培养的干细胞,检测3种管家基因(GAPDH、HGPRT、β-tublin)表达的稳定性.结果 胚胎干细胞在体外特定培养条件下,第6天起α/βMHC出现,且表达量随培养时间延长逐渐增加,至14天时表达量高,其后随着培养时间延长,表达量保持稳定;不同管家基因表达量随培养时间的变化,稳定性相差较大,其中GAPDH基因表达的波动相对稳定.结论 EST实验体系分化抑制实验的周期设计为10～14天较为合理,GAPDH适合用于作为目的基因表达量检测的内对照.
-
十溴联苯醚暴露对人胚胎干细胞分化潜能的影响
目的 探讨十溴联苯醚(BDE-209)暴露对人胚胎干细胞分化潜能的影响.方法 分别将对数生长期未分化的人胚胎干细胞FY-hES-10细胞暴露于含有终浓度为0(溶剂对照)、1、10和100 nmol/L BDE-209的培养基中培养96h后,采用悬浮法培养拟胚体(embryoid body,EB)自发分化10d,实时荧光定量PCR检测EB中OCT4、内胚层标志基因AFP、外胚层标志基因PAX6、中胚层标志基因SMA及氧化应激相关基因HIF1a、HIF2a和SOD1基因的表达,并测定SOD活性.结果 与对照组比较,各剂量BDE-209暴露组FY-hES-10细胞EB分化10d OCT4、SMA、HIF1a和HIF2a表达水平均较高,而AFP、PAX6、SOD1表达水平均较低,差异有统计学意义(P＜0.05).且随着BDE-209暴露剂量的升高,FY-hES-10细胞分化10d EB中OCT4的表达水平均呈上升趋势,SOD1基因的表达水平呈下降趋势.同时BDE-209暴露后FY-hES-10细胞分化10d EB中SOD活性降低.结论 BDE-209可能通过影响早期胚胎的分化潜能从而产生发育毒性.
-
苯乙基异硫氰酸盐对小鼠胚胎干细胞分化为神经细胞过程中基因表达影响的研究
目的 探讨苯乙基异硫氰酸盐(PEITC)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)体外定向诱导分化为神经样细胞中PKCα及其相关发育基因(pax-6、netrin-1)表达的影响.方法 mESCs经RA法诱导后,第7天用RT-PCR法检测nestin、glutminase、Brn-3基因等神经细胞特异性标志物.不同浓度PEITC作用条件下,分别取诱导后1、3、5、7及14天后的细胞,用RT-PCR方法曩4定细胞的PKCα及其相关发育基因pax-6争netrin-1的mRNA表达情况.结果 诱导后第7天,分化的神经样细胞中nestin、glutaminase、Bin-3基因均高表达.正常诱导1天后,PKCα、pax-6和netrin-1基因的mRNA表达急剧下降,3、5、7天逐渐升高,至14天恢复至正常水平.PEITC作用下,PKCα、pax-6、netrin-1的mRNA在诱导后细胞中各阶段的表达水平与正常诱导条件下相比均下降,且随着作用浓度和作用时间的增加,下降趋势明显.结论 PEITc对mESCs定向分化为神经样细胞过程中相关发育基因(pax-6、netrin-1)的表达的干扰作用可能与抑制PKCα的表达有关.
-
尼古丁对小鼠胚胎干细胞特异基因Oct-4转录的影响
目的 通过尼古丁对小鼠胚胎干细胞(Embryonic Stem,ES)特异基乙丁是否影响早期胚胎发育.方法 ES细胞选用饲养层培养法,尼古丁(1～1000 nmol/L)和/或10μmol/L筒箭毒(尼古丁乙酰胆碱受体阻断剂)作用24h后,纯化ES细胞,提取总RNA.首先扩增Fgf-5以观察纯化后ES细胞的纯度;同时用半定量RT-PCR法观察尼古丁对Oct-4和β-actin表达的影响,及筒箭毒对尼古丁作用的影响.结果 尼古丁对β-actin转录没有明显的影响,而可明显的增强Oct-4的转录;筒箭毒单独作用ES细胞可提高Oct-4的转录,而在尼古丁同时存在的情况下,筒箭毒对Oct-4的作用将随着尼古丁浓度的增加而减弱,当尼古丁的浓度为100～1000 nmol/L时,筒箭毒可明显抑制尼古丁诱导的Oct-4的表达.结论 研究表明,Oct-4的转录水平和胚胎干细胞的命运密切相关,维持胚胎干细胞的未分化状态需要Oct-4保持相对恒定的转录水平.因而,尼古丁对Oct-4转录的影响可能会影响胚胎干细胞的发育和分化,从而影响胚胎的早期发育.
-
胚胎干细胞实验模型在发育毒性评价中有效性的初步研究
目的 依据胚胎干细胞具有向心肌细胞分化的能力,建立体外分化发育毒性评价的模型,并对其判定受试物发育毒性强弱的有效性进行验证.方法 利用悬滴、悬浮培养方法,通过不同浓度青霉素G、苯妥英钠和氟尿嘧啶作用,检测胚胎干细胞分化为心肌细胞的能力,结合MTT法获得的受试物细胞毒性结果,判断受试物的发育毒性.结果 青霉素G、苯妥英钠和氟尿嘧啶的ID50(D3)分别为1099、47.4和0.023μg/ml,其发育毒性的判定依次无、弱和强.结论 建立的胚胎干细胞实验模型能够判定氟尿嘧啶、苯妥英钠和青霉素G发育毒性,结果与ECVAM的结论一致,可用于发育毒性的筛选和评价.
-
莫信干细胞“神话”
干细胞研究是近年来医学前沿的重点发展领域.追随干细胞研究的热潮,许多与干细胞相关的抗衰老等内容充斥各类商家和媒体,给予人们无尽的想象空间.然而,在这些动听的“神话”故事中,虚妄常常多过真实.研究报道,干细胞是一类具有多向分化潜能的细胞,具有分化并再生各种组织、器官的潜在能力,就像树干能不断生长出新的枝叶一样.无论心肝脾肺肾,还是神经、血液,理论上都能由干细胞分化生成.干细胞有着一个大家族,其中胚胎干细胞具有分化成各种细胞组织的能力;成体干细胞则只能分化成特定的几种组织细胞,如脂肪干细胞可以分化为脂肪、骨和软骨,神经干细胞可生成神经细胞.换而言之,并非每一种干细胞都是“万能”的.
-
干细胞与心脏再生的研究进展
心血管疾病的治疗一直是当代医学需要攻克的重要问题.绝大多数哺乳动物的心脏在出生后无法进行细胞分裂,不可再生,心肌细胞受损往往带来致命的后果.本文对干细胞在心脏再生领域的应用潜能和研究进展进行综述,着重讲述了胚胎干细胞、诱导多功能干细胞和骨髓干细胞的研究历史和研究现状,并对未来的应用进行展望.
