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优化密码提高病毒蛋白表达的研究进展
通过优化基因密码以提高蛋白表达,是近年来某些疫苗研制过程中的新的策略和方法.本文在阐述优化基因密码机制的基础上,介绍了优化病毒基因密码的研究现状,探讨了优化密码的设计方法、特点、产生的效应以及实验方法等问题.
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EBV立即早期基因-BRLF1和BZLF1的研究进展
BRLF1和BZLF1是EBV基因组中位置相邻的两个立即早期基因.它们的蛋白表达产物Rta和Zta作为反式激活因子,可以调节EBV早期/晚期基因的表达,还可能参与病毒基因组的复制.它们与EBV感染由潜伏周期向裂解周期的转换密切相关.不同的细胞环境可能对它们的转录产生影响.Rta和Zta都包含CTL识别的表位,可能在病毒裂解周期的早期成为免疫系统识别的位点.对它们的研究还为某些EBV相关肿瘤的筛查和治疗提供了线索.这两个基因对EBV再激活的作用倍受关注.本文主要对BRLF1和BZLF1的基因结构和功能做一综述.Epstein-Barr病毒(EBV)是疱疹病毒科γ亚科成员,世界人口的90%感染此病毒.EBV可引起传染性单核细胞增多症,与Burkitt's淋巴瘤、鼻咽癌的发生密切相关.EBV有潜伏周期和裂解周期两种状态.EBV进入细胞后,通常很快进入潜伏期,病毒基因组环化成游离体(episome)并以此形式持续存在于细胞内.但病毒在少数感染细胞中可以进入增殖期,并产生病毒颗粒.研究表明,BZLF1和BRLF1两个基因在病毒由潜伏周期向裂解周期转变的过程中起重要作用.
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宫颈癌发病中HPV病毒蛋白和P53蛋白表达的变化及临床意义
病毒感染是宫颈癌的主要危险因素,尤其是人类乳头瘤病毒(HPV)感染[1].某些因素引起p53基因突变或功能丧失可能是宫颈癌发病的重要机制之一.本研究旨在通过分析宫颈癌与慢性宫颈炎HPV和P53蛋白表达的差异,探讨HPV与P53蛋白对宫颈癌发生的影响及临床意义.
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核因子-κB和环氧合酶-2在胃癌及癌前病变中的表达
核因子-kB(NF-KB)为核转录因子中一员,被激活后从细胞质转位入核,与靶基因的调控区结合,调控蛋白转录.环氧合酶-2(COX-2)是位于核膜的膜结合蛋白,在血管内外激活物激活的条件下可表达,在组织损伤及炎症时表达增加,在正常生理状态下多数组织内检测不到[1].研究表明NF-κB和COX-2过度活化或表达则与消化道细胞癌变及肿瘤的生物学行为有关.我们采用免疫组织化学染色,分析NF-κB与COX-2在胃癌标本、癌前病变和慢性胃炎黏膜中的蛋白表达情况,探讨NF-κB和COX-2的表达与胃癌的关系以及NF-κB和COX-2两者之间的关系.
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植物多糖对糖尿病肾病肾脏转化生长因子β及蛋白表达影响的研究进展
目的：糖尿病肾病是糖尿病引起的危害性大的一种严重慢性并发症，是糖尿病全身性微血管病变表现之一，晚期会导致严重肾功能衰竭，是糖尿病患者的主要死亡原因之一。糖尿病肾病病理机制复杂，其中转化生长因子β在糖尿病肾病的发病机制中占有重要地位[1]，迄今尚无疗效确切的西药能延缓其进程。近20年来中医领域有关糖尿病肾病的研究取得了一定的进展[2]，中医药治疗糖尿病肾病能减少西药的应用剂量和不良反应在降糖的同时具有改善肾功能的作用[3]。本文就植物多糖对糖尿病肾病肾脏转化生长因子β及基因表达的影响和多糖类成分对于糖尿病肾病防治的作用做相关综述，为今后糖尿病肾病的药物筛选提供一个指导性的方向。
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SAFB1在宫颈癌中的表达及意义
目的:研究SAFB1在宫颈癌中的表达及意义.方法:选取从2014年3月至2016年2月我院已经确诊为宫颈炎性病变患者41例、宫颈上皮内瘤变患者43例、宫颈癌患者40例为研究对象,分别收集并检测三组患者临床石蜡标本SAFB1蛋白表达情况以及宫颈脱落细胞中SAFB1mRNA表达情况,并进行对比.结果:炎性病变组石蜡标本SAFB1蛋白表达阳性率为21.95%(9/41),显著低于CIN组的44.19%(19/43)以及宫颈癌组的82.50%(33/40),且CIN组又明显低于宫颈癌组;炎性病变、CIN、宫颈癌三组脱落细胞SAFB1mRNA阳性表达率呈逐渐升高趋势,上述差异均有统计学意义(P<0.05).结论:通过对SAFB1蛋白以及SAFB1mRNA的表达水平,可帮助临床医生对患者宫颈病变进行有效诊断,具有较高的临床诊断价值,可作为宫颈癌的肿瘤标志物.
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phCMV1和pcDNA3表达人绒毛膜促性腺激素β-C3d3融合蛋白的表达效率比较
目的比较真核表达载体phCMV1和pcDNA3在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达人绒毛膜促性腺激素β(hCGβ)-C3d3融合蛋白的表达效率,以获得hCGβ-C3d3融合蛋白的高效表达.方法利用高效真核表达载体phCMV1, 构建带有6个组氨酸纯化标签的融合蛋白表达质粒phCMV1-6His-hCGβ-C3d3;脂质体法介导phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和pcDNA3-hCGβ-C3d3转染CHO细胞,G418 (800 μg/ml)筛选抗性克隆,G418 (300 μg/ml)维持培养、扩增,待阳性克隆95%汇片时换用无血清培养基培养.放射免疫法检测hCGβ表达量,Western blot鉴定表达产物,Raji细胞免疫化学染色法鉴定hCGβ与C3d分子的成功融合.反复冻存和复苏高效表达hCGβ-C3d3融合蛋白的阳性克隆,比较表达效率的变化.用镍柱和凝胶过滤层析纯化表达产物. 结果酶切鉴定及测序证实phCMV1-6His-hCGβ-C3d3构建正确,并成功地在CHO细胞中获得了6His-hCGβ-C3d3融合蛋白的表达.无血清培液中24、48、72 h融合蛋白的表达量分别为496、527、633 mIU/ml/1×106细胞(以hCGβ含量计算),phCMV1比pcDNA3载体的表达效率高1.4倍.3次冻存和复苏高效表达hCGβ-C3d3融合蛋白的阳性克隆,表达效率无明显变化.表达产物经纯化后获得了所需的hCGβ-C3d3融合蛋白. 结论 phCMV1表达hCGβ-C3d3融合蛋白的效率高于pcDNA3;用6His纯化标签可以成功纯化获得hCGβ-C3d3融合蛋白.
关键词： phCMV1 pcDNA3 人绒毛膜促性腺激素β C3d3 蛋白表达 -
氟对大鼠脑Cu/Zn-SOD蛋白表达的影响及硒的拮抗作用
目的 通过动物实验,从分子水平观察Cu/Zn-SOD蛋白表达与氟中毒的关系及硒对氟的拮抗作用.方法 48只3周龄SD大鼠,雌雄各半,按体重随机分为6个组.对照组每天给予去离子水灌胃,氟暴露组每天给予氟化钠10、20和40 mg/kg灌胃,染氟3个月.加硒拮抗组氟化钠(20 mg/kg)灌胃同时自由饮用加入亚硒酸钠(2 mg/L)的去离子水,加硒组自由饮用去离子水加入亚硒酸钠(2 mg/L).染毒3个月后处死.测定大鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用免疫组化法检测脑组织SOD表达(IOD值).结果 ①与对照组比较,氟暴露各组大鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性逐渐降低(P＜0.05),加硒拮抗组较氟暴露组明显升高(P＜0.05),加硒组明显高于各组；②氟暴露组脑组织Cu/Zn-SOD蛋白表达逐渐减少(P＜0.05),加硒拮抗组较氟暴露组明显升高(P＜0.05),加硒组明显高于各组.结论 氟可通过降低Cu/Zn-SOD蛋白引起机体脂质过氧化损伤,硒可拮抗氟引起的氧化损伤.
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Zn2+对人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞IL-8和TNF-α mRNA和蛋白表达水平的影响
目的 研究Zn2+对人Ⅱ型肺泡上皮细胞炎性细胞因子IL-8和TNF-α mRNA和蛋白表达水平的影响.方法 用含0、50、100和250μmol/L Zn2+的F-12培养基培养人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞,分别于3h和24h用RT-PCR半定量IL-8和TNF-α mRNA表达量,用RIA测定培养上清液中IL-8和,TNF-α蛋白浓度.结果 A549细胞染Zn2+3h时A549细胞以浓度依赖方式高表达IL-8和TNF-α mRNA和蛋白;24h时IL-8和TNF-α蛋白表达量进一步增高,IL-8 mRNA表达下降,TNF-α mRNA继续保持高表达.结论 Zn2+显著提高A549细胞IL-8和TNF-α表达量,Ⅱ型肺泡上皮细胞可能是Zn2+导致的呼吸系统损伤中炎性细胞因子的重要来源.
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镧对大鼠学习记忆及大脑皮质c-fos mRNA和c-Fos蛋白表达的影响
目的 研究镧对学习记忆的影响,并从大脑皮质即刻早期基因表达的角度探讨镧影响学习记忆的机制.方法 加只成年雌性Wistar大鼠随机分成对照组和低、中、高剂量染镧组,染镧组仔鼠在出生至断乳后1个月期间染镧,然后进行神经行为学测试(水迷宫和穿梭箱测试),测定大脑皮质中c-fos mRNA和c-Fos蛋白以及尼氏体表达情况.结果 神经行为学测试结果显示染镧组仔鼠的学习记忆能力明显低于对照水平,呈现一定的量一效关系.低剂量染镧组仔鼠大脑皮质c-fos mRNA和c-Fos蛋白表达水平明显低于对照水平,中剂量染镧组仔鼠海马c-fos mRNA表达水平明显低于对照水平,c-Fos蛋白表达水平明显低于对照和低剂量染镧组,高剂量染镧组仔鼠大脑皮质c-fos mRNA和c-Fos蛋白表达水平均明显低于对照和低剂量染镧组.另外,低剂量染镧组大脑皮质神经细胞中尼氏体表达水平明显低于对照水平,中、高剂量染镧组大脑皮质神经细胞中尼氏体表达水平进一步减少.结论 染镧造成学习记忆能力下降,这可能与染镧引起大脑皮质即刻早期基因的基因和蛋白表达水平下降、神经细胞功能削弱有一定关系.
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PEBP1蛋白在胃腺癌组织中的表达意义
目的:了解PEBP1在胃腺癌组织中表达意义,为胃腺癌的诊断及预后评估等提供检测依据.方法:采用免疫组化方法,观察组织芯片中PEBP1蛋白的表达情况,然后分析该蛋白在胃腺癌组织中表达的临床意义.结果:1.PEBP1蛋白在正常胃粘膜阳性表达率为70.59％、、非典型增生组织为42.31％、胃腺癌为20.99％及淋巴结转移癌为12.73％,其在胃高腺癌为40.00％、中分化腺癌为29.41％、低分化腺癌为16.95％.2.PEBP1蛋白在胃腺癌和淋巴结转移癌组织中低表达,而在正常胃粘膜和非典型增生组织中高表达,胃腺癌和淋巴结转移癌组织中表达显著低于正常胃粘膜和非典型增生组织(P<0.01);非典型增生组织的阳性表达率低于正常胃粘膜组织(P<0.01).PEBP1蛋白表达与胃腺癌组织的分化程度呈正相关,即癌组织分化越差,者蛋白表达也越低(P<0.01).结论:PEBP1蛋白在胃腺癌中表达与其发生发展、分化程度及淋巴结转移有关.
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TP53在胃癌组织中的表达及临床意义
目的:选取课题组前期鉴定的胃癌相关蛋白质TP53,了解该蛋白在胃腺癌组织中的表达情况,并分析其临床意义.方法:采用胃癌组织芯片结合免疫组织化学染色分析TP53蛋白在胃癌组织中的表达.依据免疫组织化学染色检测胃癌组织中的表达结果,结合患者的临床资料,分析TP53蛋白表达与临床资料两者间的意义.结果:1、TP53蛋白主要表达于细胞核,其在不同组织中的表达率分别为正常胃粘膜2.82％、癌旁组织18.43％、胃癌62.39％、淋巴结转移癌组织80.23％.胃癌组织中的阳性表达率分别为高分化腺癌54.22％、中分化腺癌62.5％、低分化腺癌79.49％.2、胃腺癌与淋巴结转移癌组织中TP53蛋白呈现高表达,且明显较正常胃粘膜及癌旁组织中表达高(P<0.01).癌旁与正常胃粘膜组织中TP53蛋白呈现低表达,但癌旁组织中表达较正常胃粘膜组织高(P<0.01).3、胃腺癌组织分化程度的降低,TP53蛋白阳性表达率逐渐增加(P<0.01).TP53蛋白在胃腺癌组织中的表达与组织分化程度呈负相关,而与TNM分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.01).结论:胃癌组织中TP53蛋白高表达与组织分化程度及肿瘤进展相关.
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结核分支杆菌抗原ESAT-6基因真核表达质粒的构建及蛋白表达的鉴定
目的:用结核分支杆菌早期分泌性抗原靶ESAT-6基因构建真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-ESAT-6,并鉴定其在真核细胞(COS-7)中表达的蛋白.
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错配修复基因hMSH2与hMSH6蛋白在人类肺癌组织中的表达及其临床意义
目的 检测hMSH2与Hmsh6基因在人类肺癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测67例肺癌(其中肺鳞癌37例,肺腺癌30例)组织中错配修复基因hMSH2与hMSH6蛋白的表达.
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乳腺浸润性导管癌上皮间质转化相关蛋白表达与临床病理特征和预后的关系
目的:分析上皮间质转化的相关蛋白表达与乳腺浸润性导管癌的临床病理特征和预后的关系.方法:选取我院2014年3月至2015年3月诊治的乳腺浸润性导管癌患者55例为研究对象,采用免疫组织化学检测法分析患者癌组织与正常乳腺组织中相关蛋白的表达,主要有Vimentin蛋白、E-cadherin蛋白和MMP2蛋白,研究蛋白表达与预后的关系.结果:乳腺癌中Vimentin蛋白表达阳性率高于正常组织;E-cadherin蛋白表达阳性率低于正常乳腺组织;MMP2蛋白表达阳性率高于正常乳腺组织.结论:检测乳腺浸润性导管癌中的相关蛋白表达能够对乳腺癌进行病理分级,改善患者治疗效果,有较高的临床意义.
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Fas/FasL、FAP-1在肝母细胞瘤中的表达研究及其临床意义
目的探讨肝母细胞瘤组织Fas、FasL及FAP-1和组织中淋巴细胞的Fas、FasL的表达状况及临床意义.方法应用Fas、FasL多克隆抗体及FAP-1单克隆抗体对15例小儿肝母细胞瘤组织标本进行免疫组化染色,以检测其组织Fas、FasL及FAP-1和淋巴细胞的Fas、FasL的蛋白表达,并以相应的正常肝组织作对照.
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HIV-1 gp160多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的免疫原性分析
目的:HIV感染引起的AIDS已经成为严重影响人类健康和社会发展的全球性疾病.酶联免疫吸附试验和免疫印迹检验组合则被认为是HIV检测的"金标准".因此本实验构建gp160的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV抗体测定提供特异、价廉的抗原.方法:选定HIV-1 gp160基因中三个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这三个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Western Blot测定融合蛋白的抗原特异性.结果:构建的HIV-1 gp160多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长969bp.在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白分子量为37 kDa,以包涵体的形式存在.结论:应用western blot测定10例正常人和12例HIV/AIDS病人血浆显示HIV-1 gp160多表位融合蛋白具有良好的抗原特异性.成功构建了高表达HIV-1 gp160多表位蛋白的原核表达系统,纯化的融合蛋白有较强的抗原特异性.
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PTEN与胃癌
PTEN/MMAC1/TEP1基因是1997年由Steck等3个研究小组分别发现并命名的一种抑癌基因(以下简称PTEN),定位在10q23.3上,是至今发现的第1个具有磷酸酶活性的抑癌基因.它在细胞内信号传导通路调控中起关键作用并且在肿瘤发生、发展及转移中起抑制作用.癌基因的激活与抑癌基因的失活,可使细胞生长与分化的调节失控,导致细胞持续分裂发生癌变.PTEN在胃癌的发生和演进中起着重要作用,本文就PTEN与胃癌的新相关研究进展作一综述.
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组织因子途径抑制物-2在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达及甲基化修饰
目的 探讨组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor,TFPI-2)基因在卵巢浆液性囊腺癌与卵巢浆液性囊腺瘤组织中表达差异情况,以及与其启动子区DNA甲基化的关系.方法 应用免疫组化技术分析46例卵巢浆液性囊腺癌组织和66例卵巢浆液性囊腺瘤组织中TFPI-2基因蛋白表达水平;用甲基化特异性PCR法(MS-PCR)检测TFPI-2基因启动子区DNA甲基化水平.结果 卵巢浆液性囊腺瘤组织中TFPI-2蛋白表达阳性率为62.12％ (41/66),高于卵巢浆液性囊腺癌组织39.13％ (18/46),两组间差异有统计学意义(x2=5.748,P=0.017);卵巢浆液性囊腺瘤组织与卵巢浆液性囊腺癌组织中TFPI-2基因甲基化阳性率分别为72.73 ％、78.26％,两组间差异无统计学意义(x2=0.443,P=0.506),而低分化卵巢浆液性囊腺癌组织TFPI-2基因甲基化比率50.00％显著低于中、高分化组88.24％,两组差异有统计学意义(x2 =5.540,P＝0.019).结论 TFPI-2蛋白表达与卵巢肿瘤的病理进展呈负相关,其启动子区DNA甲基化水平与卵巢癌细胞分化程度有关.
关键词： 卵巢浆液性囊性腺癌 组织因子途径抑制物-2 蛋白表达 甲基化 -
恙虫病东方体56 kDa抗原基因片段在不同载体的表达
目的构建恙虫病东方体56 kDa表面抗原基因(sta56)片段在不同载体的重组表达质粒,在E.coli中表达sta56重组抗原并比较不同表达系统对sta56的表达效果.方法从含有恙虫病东方体Karp株sta56基因的重组克隆,扩增出不同长度的截短的sta56片段,定向插入pPROEX HTb及pET30a载体,转化大肠埃希菌DH5α或BL21(DE3),IPTG诱导表达,应用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察重组蛋白表达情况,应用蛋白印迹(WB)方法分析重组抗原的活性.结果成功构建含sta56不同长度片段的重组表达质粒pHTbOt957、pHTbOt498、pHTbOt342和pETOt957、pETOt498、pETOt342,各重组子均可在E.coli中以融合蛋白的形式有效表达,SDS-PAGE显示各表达重组子表达不同分子量的重组蛋白,WB证实各重组蛋白均能被恙虫病患者阳性血清所识别.结论恙虫病东方体Karp株sta56基因可在大肠埃希菌获得高效表达,pET30a对sta56的表达效果优于pPROEX HTb;重组蛋白具有免疫反应性,纯化后可用作免疫诊断抗原.
