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HSVI立即早期基因研究进展
相对于其它病毒而言,单纯疱疹病毒的基因组巨人,基因数日繁多,根据其基因转录的先后顺序,分为立即早期、早期利晚期基因二类.作为病毒首先表达的立即早期基因,它们的表达产物都为非结构蛋白,可对病毒的复制进行调控,决定了病毒进入细胞后的命运.因此对单纯疱疹病毒的立即早期基因的定位、命名、翻译后修饰以及对其产物功能的分析对该病毒的分子生物学的病理学研究具有重要的意义.
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EBV立即早期基因-BRLF1和BZLF1的研究进展
BRLF1和BZLF1是EBV基因组中位置相邻的两个立即早期基因.它们的蛋白表达产物Rta和Zta作为反式激活因子,可以调节EBV早期/晚期基因的表达,还可能参与病毒基因组的复制.它们与EBV感染由潜伏周期向裂解周期的转换密切相关.不同的细胞环境可能对它们的转录产生影响.Rta和Zta都包含CTL识别的表位,可能在病毒裂解周期的早期成为免疫系统识别的位点.对它们的研究还为某些EBV相关肿瘤的筛查和治疗提供了线索.这两个基因对EBV再激活的作用倍受关注.本文主要对BRLF1和BZLF1的基因结构和功能做一综述.Epstein-Barr病毒(EBV)是疱疹病毒科γ亚科成员,世界人口的90%感染此病毒.EBV可引起传染性单核细胞增多症,与Burkitt's淋巴瘤、鼻咽癌的发生密切相关.EBV有潜伏周期和裂解周期两种状态.EBV进入细胞后,通常很快进入潜伏期,病毒基因组环化成游离体(episome)并以此形式持续存在于细胞内.但病毒在少数感染细胞中可以进入增殖期,并产生病毒颗粒.研究表明,BZLF1和BRLF1两个基因在病毒由潜伏周期向裂解周期转变的过程中起重要作用.
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真菌菌丝体提取物抑制人巨细胞病毒基因转录水平的研究
目的 研究真菌菌丝体提取物对人巨细胞病毒基因转录的抑制作用,探讨其抗HCMV效果及其机制. 方法 建立抗HCMV细胞模型,用半定量PCR检测细胞感染后不同时间UL122、UL123、UL44、UL57、UL86 mRNA表达量的变化. 结果 UL122、UL123 mRNA的表达高峰为HCMV感染细胞后24 h,UL44、UL57 mRNA的表达高峰为感染后96 h,UL86 mRNA的表达高峰为感染后120 h.真菌菌丝体提取物与HCMV作用后接种细胞及HCMV接种细胞后加入真菌菌丝体提取物24h检测UL122、UL123 mRNA的表达量均显著降低.而病毒完成穿入过程后加入50 μg/ml真菌菌丝体提取物与加入5μg/ml组相比UL122、UL123 mRNA表达量更少.HCMV进入细胞6h后加入真菌菌丝体提取物再培养96 h,UL44、UL57 mRNA的表达量无显著变化.HCMV进入细胞24 h后加入真菌菌丝体提取物再培养120 h,UL86 mRNA的表达表达量无显著变化. 结论 真菌菌丝体提取物可显著抑制HCMV AD169毒株IE基因(UL122、UL123)的转录,导致其mRNA表达显著降低,且抑制作用存在量效关系;但对E基因(UL44、UL57)和L基因(UL86)转录水平抑制作用不明显,表明真菌菌丝体提取物抗HCMV的重要作用机制是通过抑制HCMV IE基因的转录和翻译,进而抑制病毒的复制增殖.
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人巨细胞病毒基因时序表达对感染结局的影响
目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)主要基因序列表达情况对其感染结局的影响. 方法采用不同滴度HCMV感染传代培养的人胚肺成纤维细胞,建立HCMV梯度感染细胞模型.分别应用FQ-PCR法测定感染细胞内IE基因拷贝数、免疫组化法联合计算机病理图文分析系统检测p52蛋白表达水平以及RT-PCR法测定MCPmRNA转录水平,光镜观察致细胞病变作用(CPE)、电镜检查细胞超微结构改变. 结果 IE基因在病毒滴度低的A组细胞内负荷量低(P<0.05,P<0.01);p52蛋白在病毒滴度较高的B、C组表达水平明显高于A组(P<0.01),其表达定位于受染细胞核内;仅在B、C组内检测到MCP mRNA.A组未检出细胞病变,B、C组细胞检测到随感染时间延长而加重的CPE及超微结构改变. 结论 HCMV受染细胞内IE基因负荷量与病毒基因组表达启动密切相关,p52蛋白高效表达是病毒基因组完整表达的必要条件,MCP mRNA转录是活动性HCMV感染的标志.
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大鼠实验性牙齿移动诱导中枢立即早期基因c-fos和c-jun的表达与调节
立即早期基因(i mmediate early gene, IEG)c-fos与c-jun在中枢神经系统内的表达与伤害性感或痛觉调制有关.激在数十分钟内作出反应.正畸牙齿移动使患者产生不适或疼痛,这种刺激能否诱导三叉神经脊束核尾侧亚核(Vc)内c-fos与 c-jun的表达,尚未见文献报道.本项实验利用免疫组化技术观察了牙齿移动过程中立即早期基因在中枢的表达及吗啡对其的调节作用.
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I型单纯疱疹病毒ICPO蛋白:病毒与细胞间相互作用的重要调控因子
I型单纯疱疹病毒(HSV-1)的基因表达具有很高的时序性,按其先后顺序可以将病毒的基因分为立即早期基因、早期基因和晚期基因3类.
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交变拉伸应变及压应力对大鼠成骨细胞FOS蛋白表达及细胞定位的影响
原癌基因c-fos是一种立即早期基因,其表达的蛋白FOS是一种核蛋白,可结合到宿主细胞DNA中负责细胞分裂的基因上,影响基因的转录和复制,促进细胞的有丝分裂.采用免疫细胞化学方法,分别观察受交变拉伸应变和压应力作用下,体外培养的大鼠成骨细胞中FOS蛋白的表达情况及其在细胞中的定位,探索力学作用促进成骨细胞增殖的机理.
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利用HSV1α-基因启动子构建真核表达载体phIE
以pcDNA3质粒为骨架,构建由1型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus I,HSVI)立即早期基因启动子指导外源蛋白转录的phIE真核表达载体,该质粒为外源蛋白的表达提供了更为广泛的选择,通过插入us1编码序列,phIE-Us1被用于分析ICP22蛋白在病毒感染早期的功能;在多克隆位点插入氯霉素乙酰转移酶编码基因构建phIE-CAT检测载体,应用于检测HSVI病毒蛋白Vp16及ICP22的功能,明确显示该质粒对于研究单纯疱疹病毒的基因转录调控具有重要的应用价值.
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伪狂犬病毒立即早期基因5'端特异性反义RNA对病毒增殖的影响
伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)属疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科,基因组为线状双链DNA,长约150kb,至少可编码70~100种蛋白质.根据伪狂犬病毒感染细胞后DNA转录、表达时间的先后可将PRV基因分为立即早期基因(Immediateearly gene),早期基因(Early gene)和晚期基因(Late gene),这三类基因依此以级联方式调节[1].第一个被转录的基因是立即早期基因,它的转录即使在细胞蛋白质合成被放线菌酮(Cycloheximide)抑制的情况下也能进行.
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血清反应因子在神经再生中的作用
血清反应因子(SRF)是一种高度保守且广泛存在于多种生物体内的转录因子。SRF 早被发现于 c-fos原癌基因中,近年来 SRF 被发现在神经再生中有重要作用,SRF 能够调节细胞骨架,调整线粒体的动力学,改善神经再生的环境,与胶质细胞产生的抑制性因子结合介导 c-fos 立即早期基因反应。本研究主要探讨 SRF在神经修复中的不同的作用与机制,并对其进行综述。
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脑损伤后神经细胞的分子应答
颅脑损伤(cranio-cerebral injury)是常见的一类机械性损伤,在某些国家与地区,其病死率仅次于癌症与心血管疾病,位居第三;在暴力性死亡中,颅脑损伤的病死率居首位[1].所以,研究颅脑损伤发生发展的机理及其变化规律,对临床医学及法医学都有十分重要的意义.闭合性脑损伤(closed brain injury)的早期改变历来是神经病学家、神经病理学家和法医病理学家研究的热点.