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乙型肝炎病毒转基因小鼠研究现状
由于HBV感染具有明显的种属特异性,只感染人及黑猩猩等灵长类动物,使乙型肝炎的研究一直缺乏理想的动物模型.转基因小鼠出生前就能在内源性HBV启动子的控制下,主要在肝脏内持续转基因表达,在肝细胞内没有HBsAg积累,也没有肝细胞病变,HBsAg以亚病毒颗粒的形式以9 000ng/ml的浓度分泌入血[1].这些小鼠对高水平的循环抗原耐受,不产生抗HBs,可被用作HBV慢性携带状态模型.本文对HBV转基因小鼠转基因表达、免疫耐受及打破免疫耐受的机理等作一简要综述.
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流感病毒感染中NP蛋白的核转运
流感病毒NP蛋白在流感病毒感染中起到重要的作用,NP是vRNP(ribonucleoprotein,RNP,核糖核蛋白颗粒)的骨架结构,参与RNA的转录.它在细胞浆中合成,被转运到细胞核中组装成vRNP,然后被转运出细胞核进入细胞浆进行病毒颗粒的组装.本文就NP蛋白的核转运机制作一综述.
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EBV立即早期基因-BRLF1和BZLF1的研究进展
BRLF1和BZLF1是EBV基因组中位置相邻的两个立即早期基因.它们的蛋白表达产物Rta和Zta作为反式激活因子,可以调节EBV早期/晚期基因的表达,还可能参与病毒基因组的复制.它们与EBV感染由潜伏周期向裂解周期的转换密切相关.不同的细胞环境可能对它们的转录产生影响.Rta和Zta都包含CTL识别的表位,可能在病毒裂解周期的早期成为免疫系统识别的位点.对它们的研究还为某些EBV相关肿瘤的筛查和治疗提供了线索.这两个基因对EBV再激活的作用倍受关注.本文主要对BRLF1和BZLF1的基因结构和功能做一综述.Epstein-Barr病毒(EBV)是疱疹病毒科γ亚科成员,世界人口的90%感染此病毒.EBV可引起传染性单核细胞增多症,与Burkitt's淋巴瘤、鼻咽癌的发生密切相关.EBV有潜伏周期和裂解周期两种状态.EBV进入细胞后,通常很快进入潜伏期,病毒基因组环化成游离体(episome)并以此形式持续存在于细胞内.但病毒在少数感染细胞中可以进入增殖期,并产生病毒颗粒.研究表明,BZLF1和BRLF1两个基因在病毒由潜伏周期向裂解周期转变的过程中起重要作用.
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HBV包膜蛋白与核心蛋白相互作用的研究进展
关于HBV病毒颗粒形成过程的研究很多,本文着重对HBV包膜蛋白的前S1区、胞质侧SLOOP区与核心蛋白的钉突之间相互作用的研究做一综述.
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06 持续表达乙脑病毒亚病毒颗粒的一株哺乳动物细胞系的传代和特性
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马尔堡出血热
马尔堡出血热是一种埃博拉出血热病毒同科病毒引起的严重和高度致死性疾病.电子显微镜下观察,病毒颗粒呈细长的丝状,有时卷曲成各种奇怪的形状,故将其命为名纤丝病毒科病毒.该病毒属于已知感染人类的致病力强的病原体之列.
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一个新的“抗艾”药物靶点被发现(2)
Gag 蛋白会大量聚集到细胞膜上形成多聚体并向细胞外侧彭出,即“出芽”。随后,病毒“半成品”包裹一段病毒基因组脱离宿主细胞,终形成一个完整的病毒颗粒。
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围生期感染人微小病毒B19的研究进展
人微小病毒B19(human parvovirus B19)是1975年Cossart等[1]在筛选献血员血清乙型肝炎病毒表面抗原时,在标号为B排第19号的献血员的血清中发现小型的病毒颗粒,故称为人微小病毒B19.B19感染多在冬春季流行,孕妇和儿童感染多见,23%~45%的孕妇为易感者,有明显的职业倾向,即经常与学龄期儿童接触者,如幼儿园或小学教师、医务工作者易感染[2].B19感染后,可因个体的年龄和免疫状态不同而结局不同,从无症状到严重者可危及生命.B19感染儿童可以引起传染性红斑,又称第五病(the fifth disease)、关节病、再障危象.围生期感染B19病毒引起的宫内感染可导致胎儿非免疫性水肿,而且,还可能与胎儿畸形有关,相对危险比较严重,因此,妊娠期对B19的感染越来越多地引起关注.
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钙调磷酸酶B亚单位(CnB)作为佐剂对新型乙型肝炎病毒疫苗免疫效果的影响
比较不同佐剂配伍的效果,探讨常规剂量(5μg)钙调磷酸酶B亚单位(Calcineurin subunit B,CnB)佐剂对含PreS1+S融合抗原的乙型肝炎病毒新型疫苗(HBSS1)免疫效果的影响.采用Al(OH)3、常规剂量(5μg)CnB及CnB+Al(OH)3等佐剂与HBV颗粒疫苗配伍初次免疫,重组腺病毒载体疫苗加强免疫的策略,在C57BL/6小鼠模型上研究不同佐剂对HBV颗粒疫苗肌肉注射后免疫应答的影响,主要包括抗体滴度、抗体亚型分类及特异性细胞免疫(γ-IFN ELISpot检测).研究结果显示Al(OH)3佐剂存在明显免疫增强作用,而单独加入5μg CnB佐剂或CnB与Al(OH)3佐剂联合应用对Anti-PreS1抗体无明显的增强作用,但可显著降低anti-HBs抗体水平;各免疫组在重组腺病毒载体疫苗加强后,其抗体亚类包括IgG1、IgG2a和IgG2b;并可诱导高水平的细胞免疫应答反应.因而常规剂量(5μg)CnB单独或联合Al(OH)3佐剂对新型HBV疫苗无明显的免疫增强作用.
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冠状病毒分子生物学研究进展
1 冠状病毒概述 冠状病毒属于冠状病毒科,是病毒中的一个大家族,因电镜下病毒颗粒形似王冠而得名.形态为圆形、椭圆形或轻度多形性,直径为100nm~120nm.人冠状病毒有两个血清型,即HcoV-229E和HcoV-OC43,是人呼吸道感染的重要病原,人类20%的普通感冒由冠状病毒引起[1].儿童的冠状病毒感染并不常见,但是5~9岁儿童有50%可检出中和抗体,成人中70%中和抗体阳性.冠状病毒也是成人慢性气管炎患者急性加重的重要病因之一.由于冠状病毒易于变异,同一株病毒可重复感染人体.冠状病毒具有严格的宿主特异性,只感染自然宿主或亲缘关系密切的宿主.冠状病毒感染广泛分布于全世界各地,主要发生在冬春季节.
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接种流行性感冒灭活疫苗引起过敏性紫癜1例
某女,13岁,非常住人口儿童,2003年2月14日10时30分,由和田县疾病预防控制中心(CDC)预防接种门诊专业护士,在左上臂三角肌肌内注射剂量为0.5ml的流行性感冒(流感)灭活疫苗(全病毒颗粒悬液制品,由地区CDC购进,长春生物制品研究所生产,批号:20020601,有效期:2003-09-02).
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免疫酶技术在修饰的安卡拉痘苗病毒感染性滴度检测中的应用
修饰的安卡拉痘苗(modified vaccinia Ankara,MVA)是MVA病毒在原代鸡胚成纤维细胞(CEF)中经过一系列的传代得到[1],在人体内可以表达MVA病毒蛋白及其携带的外源基因蛋白,但却不形成完整的病毒颗粒,为人体内复制缺陷性病毒[2],安全性好,即使在免疫功能缺陷病人和免疫抑制的恒河猴体内也未显示出明显的副作用.
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20世纪末新出现的病毒性脑炎--尼巴病毒性脑炎
1 一种新的病毒性脑炎1998年9月马来西亚的Perak州发生病毒性脑炎的流行,许多成年人出现高热、脑炎等临床症状,病例急剧增加,截至1999年5月,共发病265例,死亡105例,死亡率达40%.由于该病发病凶险,死亡率高,且病因不清,震惊世界[1].1999年初,与马来西亚毗邻的新加坡也发现同样的脑炎病人,经医院确诊的病例为11例,死亡1例.同年3月马来西亚大学的研究人员从Perak 州Nipah镇的病毒性脑炎的尸解标本中分离到1株病毒,该病毒颗粒为160~300 nm,符合副粘病毒(Paramyxovirus)形态特征[2].经血清学证实该病毒为马来西亚和新加坡两地新发现的病毒性脑炎的病原体,由于分离病毒的标本来自于Nipah镇,因此取名为尼巴病毒(Nipah virus,NiV),该病毒引起的脑炎称尼巴病毒性脑炎.
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人巨细胞病毒UL57基因原核表达克隆的构建、表达及初步纯化
现有的IgM血清学试验对HCMV的诊断存在敏感性和特异性较差问题,其主要原因是迄今采用的抗原仍为从纯化的病毒颗粒中提取的病毒抗原性物质或粗提的病毒全抗原成分。近几年来人们致力于探讨能替代HCMV全病毒抗原的基因工程抗原,以完善IgM特异性血清学试验。本文通过构建HCMV DNA结合蛋白的一段基因的原核表达克隆,从而对表达产物的抗原性进行初步分析。 通过Oligosis软件设计UL57基因(aa540~604)两端引物,并在引物的5′端分别引入BamHⅠ和EcoRⅠ内切酶识别序列及保护位点。引物序列如下:P1:CTGGGATCCCCCAAAGGTGACGAC P2:GTGAATTCTCAGCGATTGAGGA。从感染的人胚肺成纤维细胞中提取和纯化HCMVAD169基因组,以纯化的核酸为模板,加入PCR反应体系进行UL57基因的扩增。
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SARS-CoV E蛋白基因的扩增及原核表达载体的构建
加拿大英属哥伦比亚癌症研究所基因组科学中心已完成了SARS冠状病毒的全基因组测序(基因库登录号:AY274119).SARS-CoV基因组编码包括S蛋白、M蛋白、N蛋白和E蛋白等结构蛋白质.E蛋白是小的结构蛋白(为糖蛋白),散布于SARS病毒的包膜,疏水性强,其核苷酸序列为231bp,编码76个氨基酸,其等电点为6.01,相对分子质量为8.361×103.推测E蛋白的作用有利于病毒形状的形成,在病毒颗粒形成过程中起主要作用.本文利用已公布的SARS-CoV基因组序列,克隆了E蛋白基因,以期为深入研究E蛋白的生物学功能和药物或疫苗开发提供研究基础.
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精液在HIV-1性传播中作用的研究进展
目前,在我国性传播已成为艾滋病主要的传播途径,2012年1-10月新报告的艾滋病病毒感染者中,经性途径传播所占比例为84.9%。因此,经性传播是大多数HIV感染的重要原因,并已成为推动我国艾滋病疫情增长的主要原因之一。 HIV-1病毒作为逆转录病毒自身具有非常弱的致病性,在体外仅有万分之一到千分之一的病毒颗粒才具有感染性[1],而精液是HIV 经性传播的重要媒介[2]。为此,在性传播已经成为我国艾滋病疫情的主要传播途径的背景下,本文将对近些年精液在HIV感染过程中作用的研究新进展进行综述,以期为下一步进行有效的干预HIV传播提供借鉴作用。
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用人乳头瘤病毒6bL1病毒样颗粒检测尖锐湿疣血清抗体
目的采用人乳头瘤病毒(HPV)6bL1病毒样颗粒(VLPs),检测HPV6感染的尖锐湿疣(CA)病人血清抗体,以评价 HPV感染的血清学诊断方法.方法采用重组杆状病毒--昆虫细胞系统制备HPV6bL1VLPs ,经氯化铯梯度离心纯化;以酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测CA、宫颈癌和健康对照组的136份标本的血清抗体.结果 CA组、健康对照组和宫颈癌组抗HPV6bL1VLPs 的血清抗体阳性率分别为75%[吸光度(A)均值0.111±0.094],2.9%(A均值0.012±0.024),14.3%(A均值0.029±0.022),3组间比较差异均有显著性(P<0.01).结论 HPV6bL1VLPs作ELISA抗原,可在CA病人体内检测到HPV6型特异性抗体,提示该方法可用于HPV6感染的血清学诊断和流行病学调查.
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T载体克隆在病毒样颗粒表达载体构建中的应用
目的提高带某些限制酶切位点聚合酶链反应(PCR)扩增产物克隆入表达载体的效率.方法将带Hind Ⅲ酶切位点的PCR扩增产物与T载体连接,转化BL21-DE3 E.Coli,提取质粒后,用Hind Ⅲ酶切,电泳分离并提取纯化的目的片段.然后,与经过相同的限制性酶酶切的表达载体pNCCL1连接. 结果经T载体克隆酶切构建的内含严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)核酸的病毒样颗粒表达载体,方法简单快速,每次均可获得成功.而采用直接酶切扩增产物的构建方法,未获得成功构建的表达载体.结论 T载体克隆可用于对直接酶切效果不好(如Hind Ⅲ)的PCR扩增片段的表达载体的连接构建,方法简便高效.
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HIV分型的分子流行病学和临床意义
HIV在病毒分类中属逆转录病毒科慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组.由于以下4个方面的原因其基因有很高的变异特征,①高错误率的逆转录酶,其复制时,不能及时切除错误引入的核苷酸,约每个复制循环中就会发生一个错误使病毒复制时发生随机变异;②病毒快速的复制,估计每天一个HIV感染者要产生并清除100亿个病毒颗粒;③宿主的免疫选择作用,在宿主免疫压力的作用下,使能激发宿主细胞或体液免疫的基因组的变异高于其他部位,如gp120 V3环高变区;④不同病毒株DNA之间的基因重组.迄今为止,全球流行的HIV根据血清学反应和病毒核酸序列测定可分为二型,HIV-1型和HIV-2型.
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SARS-CoV N蛋白研究进展
SARS-CoV(severe acute respiratory syndrome coronavirus)N蛋白是病毒的重要结构蛋白,也是目前倍受关注的蛋白组分.N蛋白位于病毒颗粒的核心,以与基因组RNA结合的形式存在,具有多种重要的生物学功能.本文就近期对SARSCoV N蛋白的研究进展作一综述.