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HIV-1耐药性研究的新进展
随着多种抗逆转录病毒治疗(ART)药物的广泛使用,以及高效抗逆转录病毒疗法(HAART,high-ly active antiretroviral therapy)的应用和推广,HIV-1感染者的并发症和AIDS病人的死亡率明显下降,抗HIV/AIDS的治疗效果是极其明显的,但是,HAART应用的局限性也是显而易见的.其中,HIV-1的耐药性是维持HAART长期疗效的主要障碍,如何加强HIV-1耐药性的临床和基础研究对治疗有十分重要的意义.本文旨在对产生HIV-1耐药性的分子机制,HIV-1治疗药物及其耐药性与HIV-1基因突变的相关性,HIV-1耐药性检测方法及其临床应用的可靠性和指导意义等方面的新进展作一综述报道.
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猪逆转录病毒与生物人工肝的使用
生物型人工肝(bioartificial liver,BAL)或组合型生物人工肝(hybridbioartificial liver,HBL),是目前国内外公认接近自然肝脏,功能也全面的人工肝脏支持系统[1].所谓生物型人工肝,就是在整个治疗系统中包含有活的肝细胞或组织,因此具有相应生物活性的人工肝支持系统.在生物人工肝领域,因为猪解剖、生理特点与人类相似,猪细胞来源广泛,经济适用,因此目前应用多的生物部分是猪肝脏细胞.但目前已知,作为异种细胞猪肝细胞内存在着猪内源性逆转录病毒(porcine endogenousretrovirus,PERV),有引起生物人工肝治疗患者PERV感染的危险.因此,本文就猪内源性逆转录病毒及猪源性生物人工肝的安全性问题作一简要总结.
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抗艾滋病药物设计的新战略:逆转录病毒整合酶抑制因子
近年来,随着HIV病毒分子生物学研究的不断深入以及多种治疗途径的综合运用,已使艾滋病人的预后得到了明显的改善.虽然目前的治疗可使病人HIV的滴度明显降低,但HIV仍然存在于病人的外周血单核细胞、静止T淋巴细胞等细胞中.针对HIV的逆转录酶和蛋白酶抑制因子已设计、筛选了多种药物并投入临床应用,但同时也导致抗药性病毒的产生,由于存在上述这些问题,有必要寻找新的病毒分子组份以便针对其设计、筛选新的特异、高效的抗HIV药物.HIV-1整合梅(HIV-1 intergrase)即是理想的该类靶分子.本文就HIV整合酶抑制因子类药物研究的新进展作一综述.
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HIV-1整合酶:艾滋病治疗的新靶点
目前,抗逆转录病毒的治疗虽然已经有了显著进展,但寻找价格低廉,活性更强的抗HIV药物仍在继续,以HIV pol基因的两个产物逆转录酶和蛋白酶为靶点,美国食品与药品管理局(FDA)批准了9种逆转录酶抑制剂和5种蛋白酶抑制剂作为临床抗艾滋病药物.目前对HIV的治疗主要是采取逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂合用的联合疗法.但此种方法不能完全清除病毒,停药后产生反跳,病情反复.HIV复制过程中还有另一个重要的酶一整合酶,使病毒基因组整合于宿主细胞染色体,病毒在体内长期潜伏.整合酶是HIV自身特有的酶,也是一个抗HIV药物设计的理想靶点.本文主要介绍HIV-1整合酶的结构,在病毒复制过程中的功能,以及整合酶抑制剂作为抗HIV药物设计靶点的研究进展.
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人APOBEC3酶家族及其抗乙型肝炎病毒作用的研究进展
人APOBEC3酶家族是新近发现的一类具有抗逆转录病毒的蛋白,其主要的抗病毒机制是能够从病毒单链DNA的腺嘌呤或胞嘧啶上脱氨基使之分别变为黄嘌呤或尿嘧啶,从而产生对病毒致死的G→A高突变现象;乙型肝炎病毒(HBV)虽然为DNA病毒,但是其具有逆转录病毒共有的逆转录过程,因此APOBEC3抗HBV的研究也取得了一定的进展.本文就APOBEC蛋白酶家族及其抗HBV感染作用的研究进展作一简要的综述.
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监视抗逆转录病毒疗法耐药的出现情况
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1994-2000年美国各州HIV/AIDS监测中HIV和AIDS的诊断和报告概况
1996年推广高效抗逆转录病毒疗法(HAART)已实质性延长了HIV感染的诊断和AIDS的发生之间的间隔,减少了AIDS监测对潜在HIV传播类型监视的能力.
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2006年全球艾滋病(HIV/AIDS)流行概况
自从1981年第一例艾滋病病例报告以来,HIV感染范围逐渐扩大,估计已有6500万人感染和2500万人死亡.仅2005年,全球估计280万人死于艾滋病,410万人新感染HIV,3860万人携带HIV.HIV持续不均匀地侵袭某地区(例如亚撒哈拉非洲和加勒比海地区)和亚人群(例如亚撒哈拉非洲的妇女、男性同性恋者、静脉吸毒者以及性行为人员).采用抗逆转录病毒疗法后,HIV感染获得了有效预防和治疗,但实际上在一些国家还受到资源限制.
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构建表达Livin的逆转录病毒载体及其在大鼠心肌细胞中的表达
目的 构建表达Livin的逆转录病毒载体,并观察其转染大鼠心肌细胞后,心肌细胞Livin表达水平的变化情况.方法 ①建立表达Livin的逆转录病毒载体,并用PCR酶切及DNA测序鉴定;②健康SD大鼠30只,分为正常组、Livin组和空载体对照组;Livin组开胸心肌内注射表达Livin的逆转录病毒载体;空载体组开胸注射空载体,两组均于手术24 h后再开胸取出心脏;正常组直接开胸游离心脏;③荧光定量PCR检测大鼠心肌Livin mRNA表达量.结果①成功构建了表达Livin的逆转录病毒载体;②荧光定量PCR检测到正常大鼠心肌细胞有Livin表达;③注射表达Livin的逆转病毒载体后Livin表达显著增多.结论 表达Livin的逆转录病毒载体可以在大鼠心肌内成功表达,转染表达Livin的逆转录病毒载体,有可能成为增加大鼠心肌抗凋亡基因、抑制心肌细胞凋亡、防治再灌注损伤的有效治疗措施.
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逆转录病毒的检测方法及研究进展
目前已知大量的逆转录病毒能够感染许多物种,其中包括人类.逆转录病毒生命周期起始于将可逆转录的病毒DNA整合到宿主细胞基因的DNA上,成为原病毒.原病毒可激活也可灭活宿主细胞的基因.逆转录病毒极高的突变和重组率极易导致其宿主范围和毒性改变,因而可感染人体细胞并做为部分宿主基因长期整合在人体细胞上,可导致肿瘤、免疫缺陷、白血病和淋巴瘤.
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中医药治疗艾滋病的研究进展
艾滋病治疗的战略重点转移艾滋病是一种全球流行病,它流行广泛迅速,治疗上难度很大,既乏疫苗,又不能治愈.虽然西医的哈特疗法(HAART,高效抗逆转录病毒疗法,即"鸡尾酒疗法")取得了很大进展,它能迅速抑制艾滋病病毒(HIV),降低病死率,延长艾滋病的发病时间,提高病人的生存质量;但是,严酷的现实是:至今全世界还没有治愈过一例.因此,应该重新审视对艾滋病的战略思想,以便进一步深入进行艾滋病研究.
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国产抗艾滋病毒药物常见毒副作用的中医治疗
随着抗艾滋病毒的化学药物的不断涌现,高效抗逆转录病毒疗法(HAART)已经成为我国治疗艾滋病的主要方法.其使用的药物主要是国产的抗艾滋病毒药物,包括齐多夫定(AZT)、司他夫定(d4T)、去羟肌苷(ddI)、奈韦拉平(NVP)、茚地那韦(IDV).在HAART推行过程中发现大多数化疗药物有较大的毒副作用,临床上出现了一些毒副反应,影响了患者服药的依从性,导致治疗失败.
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宿主因子莫罗尼白血病病毒10蛋白抑制异嗜性鼠白血病病毒相关病毒的复制
本研究探讨宿主因子莫罗尼白血病病毒10(Moloney leukemia virus 10 MOV 10)蛋白对异嗜性鼠白血病病毒相关病毒(Xenotropic murine leukemia virus-related virusis,XMRV)复制的抑制作用,以及MOV 10抑制XMRV复制的初步机制和关键结构域.通过转染、感染、免疫印迹(Western blotting)及实时定量PCR(Real-time PCR)方法检测MOV10对XMRV的抑制作用及机制,结果显示MOV 10可明显抑制XMRV,并且这种抑制作用具有特异性.经进一步证实,MOV 10包裹进XMRV病毒中,随之在病毒感染细胞时发挥抑制作用;MOV 10可以抑制XM-RV的DNA产生;MOV 10发挥抑制作用的关键结构域是MOV 10本身RNA解旋酶的7个保守结构域.以上的研究结果表明MOV 10对XMRV具有明显的抑制作用,初步阐明了MOV 10抑制XMRV复制的机制,明确了MOV 10发挥抑制作用的关键结构域.本研究进一步证实了MOV 10具有广谱的抗逆转录病毒的活性,在宿主对抗逆转录病毒感染时发挥重要作用.
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逆转录病毒及逆转录酶检测方法研究评述
逆转录病毒常被作为载体,用于目的蛋白的表达或目的基因的嵌合.尽管,实验室选用的都是非感染性病毒,但并不能排除这些病毒不会对人类造成伤害.逆转录病毒的监督和检测具有非常重要的意义.逆转录酶活性又是逆转录病毒存在活性的重要标志.因此,本文将有关逆转录病毒及逆转录酶检测的方法做一综述,望对研究者有参考意义.
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逆转录病毒基因组RNA的二聚作用
逆转录病毒科(Retroviridae)是一成员众多、易变异的RNA病毒科.在逆转录病毒复制周期内,所有逆转录病毒均将两拷贝的单股正链RNA带入病毒粒子[1,2].在此过程中,遗传物质--基因组RNA能顺利包装入病毒粒子是病毒复制与繁衍的关键,而基因组RNA通过二聚作用(Dimer-ization)形成二聚体(Dimer)是包装逆转录病毒的前提.
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反义GFAP逆转录病毒表达载体的构建及其对反应性星形胶质细胞的作用
目的构建反义GFAP逆转录病毒表达载体,评价其对培养正常及损伤星形胶质细胞(Ast)形态及GFAP基因表达的影响. 方法用定向克隆技术,将1.1kb的GFAP基因片段反向插入逆转录病毒载体pLXSN上,获得重组体PLBskG,经病毒包装、抗性克隆筛选、滴度测定等,挑选滴度高的抗性克隆细胞株扩展培养,收获病毒上清液感染体外培养的Ast,通过免疫组织化学、原位杂交、RT-PCR、Southern blot和流式细胞仪分析等方法,研究PLBskG对正常及损伤Ast的生长、细胞增殖周期、细胞形态结构、GFAP基因表达的影响. 结果插入PLBskG中的GFAPcDNA片段序列、方向完全正确,Southern杂交及RT-PCR分析表明,PLBskG成功整合入PA317细胞中,并实现了在NIH3T3细胞中的表达.PLBskG使正常及反应性Ast生长抑制,G1期阻滞,Ast胞体变圆、胞浆减少、突起变细、回缩,核浆比例增大.GFAP免疫组织化学染色减弱;GFAP mRNA表达水平降低. 结论获得了构建正确的反义GFAP逆转录病毒表达载体,并证实其对正常及反应性Ast形态结构、GFAP表达水平等均有明显的影响,为深入研究Ast反应及GFAP基因的功能创造了条件.
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PiT-1在血管平滑肌细胞中的磷摄取非依赖信号转导作用
血磷升高与慢性肾病患者血管钙化的发生密切相关。高磷诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMCs)向成骨表型转化及基质矿化需要Ⅲ型钠磷共转运体 PiT-1的参与,但 PiT-1在其中的具体作用机制尚不清楚。日前,美国华盛顿大学 Giachelli 的研究小组发现,诱导 VSMCs 向成骨表型转化及基质矿化所需要的磷浓度远远高于大量磷摄取所需要的磷浓度,提示除磷转运外 PiT-1可能还存在其他信号转导作用。进一步研究发现,高磷并不能诱导 PiT-1缺陷的 VSMCs 发生ERK1/2磷酸化,但转染野生型 PiT-1或磷转运缺陷 PiT-1突变体逆转录病毒后可活化 ERK1/2。野生型 PiT-1或磷转运缺陷PiT-1突变体均可促进 VSMCs 向成骨表型转化。磷转运缺陷 PiT-1突变体也可促进 VSMCs 基质矿化,但程度低于野生型 PiT-1。该研究表明,PiT -1所介导的磷摄取依赖性和非依赖作用,对于磷诱导的 VSMCs 钙化都是非常重要的。当细胞外磷浓度高于生理浓度时,PiT-1可作为一个磷感受器在调节 ERK1/2激酶的活性、VSMCs 向成骨表型转化及钙化中发挥信号转导作用。进一步阐明 PiT-1作为磷感受器的具体作用机制,有望为临床治疗血管钙化提供新的靶点。
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慢性粒细胞白血病患者血清中内源性逆转录病毒pol基因检测与分析
目的 以慢性粒细胞白血病、急性淋巴细胞性白血病患者及健康人为对象,研究逆转录病毒感染与慢性粒细胞白血病的相关性.方法 提取慢性粒细胞白血病、急性白血病患者以及健康人血清RNA,采用半巢式RT-PCR法检测逆转录病毒pol基因,进行对比分析.结果 RT-PCR检测10份慢性粒细胞白血病患者血清有8份逆转录病毒pol基因阳性,目的基因片段大小约为135 bp,健康血清逆转录病毒pol基因检测10份血清1份阳性,阳性标本扩增片段与慢性粒细胞白血病患者扩增片段大小相近(约为135 bp);11份急性白血病患者血清PCR扩增阴性.结论 慢性粒细胞白血病的发生可能与逆转录病毒中pol基因的表达相关,相关病因学关系及其致病机制尚需进一步研究.
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逆转录病毒介导的髓系白血病小鼠模型研究的新进展
白血病的发生与多种遗传学异常如染色体易位和基因突变等密切相关,建立携带这些遗传学异常的小鼠模型是研究白血病发病机制和靶向治疗的有力工具.通过逆转录病毒介导的小鼠模型的建立,证实在急性髓系白血病(AML)中,AML1-ETO、PML-RARα、NUP98-HOX和MLL-AF9等融合基因与疾病的发生发展密切相关,还发现额外的遗传学异常能与AML中常见融合基因协同作用导致小鼠发生AML,如C-KIT N822K与AML1-ETO、FLT3-ITD与PML-RARα、Meisl与NUP98-HOX的协同作用.在慢性髓系性白血病(CML)中,BCR/ABL融合基因可使小鼠诱发CML,但CML急性变的发生还需要其他遗传学异常如GATA-2 1359V、Hes1高表达等的参与.此外,对CML小鼠的治疗实验发现,伊马替尼和硫化砷两药合用具有更好的疗效.本文将对上述逆转录病毒介导的髓系白血病小鼠模型研究的新进展进行综迷,并讨论影响逆转录病毒介导的白血病小鼠模型成功建立的一些因素如逆转录病毒载体的构建、逆转录病毒滴度和造血微环境等.
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逆转录病毒介导的小鼠MLL-AF9白血病模型的建立
本研究旨在建立逆转录病毒介导的小鼠MLL-AF9白血病模型,为深入研究MLL白血病的发病机制和治疗策略奠定基础.采用免疫磁珠分选法分离CD45.2小鼠骨髓c-Kit+细胞,用携带MSCV-MLL-AF9载体的逆转录病毒感染c-Kit+细胞,体外培养后经尾静脉注射入致死剂量照射的CD45.1受体小鼠体内,用PCR、流式细胞术、形态学等方法鉴定成模情况.结果表明,MLL-AF9逆转录病毒可以成功感染c-Kit+细胞,感染后细胞克隆形成能力强,细胞呈髓系原始幼稚形态,高表达Gr-1、Mac-1等髓系标志,MLL相关基因Hoxa9、Meis1表达升高.移植MLL-AF9细胞后的受体小鼠,于6至12周出现白血病样体征,外周血涂片、骨髓细胞甩片、肝脏和脾脏组织切片均显示有大量白血病细胞浸润,骨髓和脾脏细胞中CD45.2群细胞高表达Gr-1、Mac-1等髓系标志,小鼠在12周内死亡.结论:成功建立逆转录病毒介导的小鼠MLL-AF9白血病模型,可应用于后续实验研究.
关键词: 逆转录病毒 MLL-AF9融合基因 急性髓系白血病 小鼠模型