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大鼠平滑肌细胞和平滑肌祖细胞的体外培养及二者间表型转化的初步研究
目的 探讨体外分离培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)和平滑肌祖细胞(SPC)的方法,并初步比较不同培养条件下大鼠SPC对VSMC表型转化的影响.方法 原代培养细胞,通过蛋白印迹实验(Western Blot)检测平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)鉴定VSMC,SPC培养后经流式细胞术鉴定分选贴壁细胞CD14和CD105双阳性表达细胞继续培养为SPC,通过SPC与VSMC共培养以及利用Transwell装置条件培养、空白对照3种条件干预后,应用Western Blot法分别测定三组骨桥蛋白水平变化,以检测并初步比较不同条件下SPC对VSMC表型转化的影响.结果 两种细胞分别原代培养后,Western Blot鉴定VSMC,结果显示α-SMA表达呈阳性；鉴定SPC免疫细胞化学染色α-SMA表达呈阳性,且流式细胞仪分析显示CD14和CD105呈双阳性表达.与空白对照相比,两种细胞共同培养和条件培养时VSMC表达骨桥蛋白水平明显升高,共同培养较条件培养骨桥蛋白水平升高效果更为明显.结论 SPC对VSMC的表型由收缩型向合成型转变具有一定作用,SPC通过直接作用与旁分泌作用不同程度地增强了VSMC的表型转化；对比发现,两细胞直接接触培养时VSMC表型转化的影响更为明显(P＜0.05).
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新加糖肾康对高糖环境下人肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白和 E-钙黏蛋白的影响
目的：观察新加糖肾康对高糖环境培养下人肾小管上皮细胞（HK-2）α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和 E-钙黏蛋白（E-cadherin）的影响，探讨其防治糖尿病肾间质纤维化的作用机制。方法含10%胎牛血清1640培养基体外培养 HK-2细胞。实验分为空白对照组、高糖组、空白血清组和新加糖肾康低、中、高剂量组。药物干预后，MTT 法检测细胞增殖，ELISA 检测α-SMA 和 E-cadherin 的含量。结果与空白对照组比较，HK-2细胞经高糖培养后细胞数量和α-SMA 含量显著增加、E-cadherin 含量明显降低（P＜0.05）；与高糖组比较，新加糖肾康组α-SMA 含量降低、E-cadherin 含量增加、细胞增殖受到抑制。结论新加糖肾康能够抑制肾小管上皮细胞表型转化及细胞增殖，具有防治糖尿病肾间质纤维化的作用。
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止消通脉宁干预转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞表型转化的研究
目的 观察止消通脉宁药物血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)表型转化的影响,并探讨其机制.方法 将HK-2细胞用含10％胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养并分为空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β1 10 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β1 10 ng/mL+ 10％空白血清)、干预1组(TGF-β1 10 ng/mL+ 10％低剂量止消通脉宁药物血清)、干预2组(TGF-β1 10 ng/mL+ 10％中剂量止消通脉宁药物血清)、干预3组(TGF-β1 10 ng/mL+ 10％高剂量止消通脉宁药物血清).药物干预24 h后,免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达.在24、48、72 h应用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)和纤连蛋白(FN)的含量.结果 正常HK-2细胞表达E-cadherin,不表达α-SMA,经TGF-β1刺激后细胞表型发生转变,E-cadherin的表达明显减弱,α-SMA表达明显增强,且Col Ⅰ、ColⅢ和FN的分泌明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).止消通脉宁药物血清干预后α-SMA表达明显减弱,E-cadherin表达明显增强;同时抑制了Col Ⅰ、ColⅢ和FN的分泌,与TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 止消通脉宁在一定程度上能够抑制人肾小管上皮细胞表型转化,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用.
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从肾小球系膜细胞表型转化谈中医药防治糖尿病肾病机制研究思路
对于糖尿病肾病(DN)的发生与发展机制,虽然现代医学迄今的研究已涉及许多方面,如蛋白质非酶糖基化、肾小球血液动力学的改变、多种生长因子/细胞因子的作用等,但每一种单一的机制都不能解释DN发生发展的全貌.在中医中药方面,虽然临床和实验研究显示出一些中药方剂或有效成分具有潜在防治DN的作用,但因对中药防治DN的机制缺乏深入的研究,使中医药在防治DN方面难以得到推广应用.由于中药、特别是中药复方成分复杂,其药效是多靶点共同作用的结果,而目前的研究多试图从单一的作用途径来阐述中药的作用机制,这种研究思路既不符合中药的作用特点,也难以突出中医药的优势.
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糖尿病中血管平滑肌细胞表型转化机制及中医药干预
血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)的增殖和迁移是动脉粥样硬化斑块形成、高血压等糖尿病血管并发症的共同病理特征,而VSMC表型转化是VSMC增殖和迁移的基础,因此研究糖尿病中VSMC表型调节及机制,对防治糖尿病血管并发症具有重要意义.该文拟介绍VSMC表型转化机制及糖尿病中VSMC表型的改变,并综述中药复方及单体干预VSMC表型转化的研究进展,为糖尿病血管并发症的中医药防治提供参考.
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糖尿病大鼠肾小球系膜细胞表型转化及菟箭合剂的作用
目的:研究糖尿病大鼠是否存在肾小球系膜细胞表型转化及中药菟箭合剂的作用.方法:SD大鼠分为正常对照组(NC组,n＝8)、单肾切除对照组(QC组,n＝8)、单肾切除链脲佐菌素(STZ)糖尿病组(DM组,n＝8)、缬沙坦治疗组(VT组,n＝8)和中药菟箭合剂治疗组(ZY组,n＝9),缬沙坦治疗组和菟箭合剂治疗组分别在单肾切除STZ糖尿病模型成模后灌喂缬沙坦[20mg/(kg*d)]和菟箭合剂[20g/(kg*d)]12周,用免疫组化的方法观察大鼠肾小球内α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin, α-SMA)和转移生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况,用计算机病理图像分析软件检测肾小球α-SMA和TGF-β1染色阳性面积/肾小球毛细血管袢面积比.结果:NC组和QC组大鼠仅个别肾小球内有少量α-SMA阳性显色,DM组大鼠肾小球内可见显著的α-SMA阳性显色,肾小球内α-SMA阳性面积/肾小球毛细血管袢面积比和TGF-β1阳性面积/肾小球毛细血管袢面积比显著增加(P＜0.01),24h尿蛋白排泄量较NC组和QC组大鼠显著增多(P＜0.01);VT组和ZY组大鼠24h尿蛋白排泄量较DM组显著减少,肾小球内α-SMA阳性面积/肾小球毛细血管袢面积比和TGF-β1阳性面积/肾小球毛细血管袢面积比较DM组显著降低(P＜0.01);ZY组24h尿蛋白排泄量较VT组低(P＜0.01).结论:单肾切除STZ糖尿病大鼠肾小球内可见大量的α-SMA的表达,提示糖尿病肾病时存在肾小球系膜细胞表型转化,中药菟箭合剂和缬沙坦治疗后可显著减少糖尿病大鼠24h尿蛋白排泄量,抑制肾小球系膜细胞表型转化和肾小球内TGF-β1的表达,菟箭合剂较缬沙坦降低糖尿病大鼠24h尿蛋白排泄量的作用更为显著.
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胰岛素样生长因子-Ⅰ对体外培养的肾小管上皮细胞表型转化的作用
目的探讨胰岛素样生长因子-I(IGF-Ⅰ)对体外培养的肾小管上皮细胞(HKC)表型转化的作用及IGF-Ⅰ和TGF-β1之间有无协同作用.方法分为4组:(1)无血清对照组;(2)阳性对照组TGF-β1(8μg/L);(3)IGF-Ⅰ(1、10、50和250 μg/L)组;(4)IGF-Ⅰ(50μg/L)+TGF-β1(8μg/L)和IGF-Ⅰ(250μg/L)+TGF-β1(8 μg/L)联合作用组.采用免疫荧光和免疫组化双染色法、流式细胞仪和酶联免疫吸附法观察HKC胞质中抗原角蛋白、钙黏蛋白、波形蛋白和α-SMA的表达,检测细胞培养上清液纤连蛋白和Ⅰ型胶原的浓度.结果 IGF-Ⅰ(50、250μg/L)能诱导HKC细胞表达波形蛋白、α-SMA,失去角蛋白和钙黏蛋白的表达;使α-SMA阳性的HKC细胞数显著高于阴性对照组.联合作用组α-SMA阳性的细胞数明显高于IGF-1或TGF-β1单用组,但无协同作用;IGF-Ⅰ(10、50、250μg/L)组培养上清液纤连蛋白、Ⅰ型胶原的浓度明显升高,有剂量和时间依赖性.结论 IGF-Ⅰ能诱导肾小管上皮细胞发生表型转化;IGF-Ⅰ和TGF-β1对诱导HKC转化无协同作用.
关键词： 胰岛素样生长因子-Ⅰ 表型转化 肾小管上皮细胞 -
不同体外条件培养对大鼠血管平滑肌细胞表型、增殖和细胞骨架的影响
目的 探讨不同体外培养条件与血管平滑肌细胞(VSMCs)表型、增殖和细胞骨架蛋白表达之间的差异及生物学意义.方法 体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验分为6组:2代对照组、2代血清饥饿组、4代对照组、4代血清饥饿组、6代对照组和6代血清饥饿组;用5-Brdu标记增殖细胞;RT-PCR检测表型基因SM22ɑ mRNA的表达;免疫细胞化学检测细胞骨架蛋白SMɑ-actin、β-Tubulin和Desmin的表达. 结果 体外培养的VSMCs,随培养代数的增多,细胞骨架蛋白表达减少,电镜超微结构可见胞质中内质网、高尔基体等细胞器增多,有大量的分泌小泡;血清饥饿胞中线粒体增多并电子密度增高. 血清培养条件下SMɑ-actin随培养代数的增加其表达减少,血清饥饿培养可使SMɑ-actin表达可逆性上调;β-Tubulin和Desmin随培养代数的增加表达减少更明显,而血清饥饿上调作用也不明显,至第6代基本不表达. 结论 血清培养和血清饥饿培养在不同代中对VSMCs表型转化、增殖和细胞骨架有着不同的影响,它们之间存在着内在的联系,在维持细胞形态、收缩功能和血管重构方面起了重要作用.β-Tubulin和Desmin表达消失可能具有重要生物学意义.
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小檗碱对胆碱-蛋氨酸缺乏饮食诱导非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝组织巨噬细胞表型转化的调节作用
目的：观察小檗碱对胆碱-蛋氨酸缺乏（MCD）饮食诱导非酒精性脂肪性肝炎（NASH）模型小鼠肝组织巨噬细胞M1、M2表型转化的作用。方法雄性C57 BL／6小鼠40只随机分为4组（每组10只）：正常组（饲喂常规饲料），模型组（饲喂MCD饲料），罗格列酮干预组（30mg／kg）和小檗碱干预组（150mg／kg），采用预防给药方式，连续2周。通过组织病理学评分评估动物模型及药物疗效；采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）、白细胞介素（ IL-6）及IL-10水平；流式细胞术检测肝组织中M1、M2型巨噬细胞的数量和比值。结果罗格列酮和小檗碱可显著改善MCD饮食诱导小鼠NASH的病理程度，显著下调血清中TNF-α水平（P＜0．05），显著上调血清中IL-10水平（P＜0．05），显著降低肝组织中M1型巨噬细胞及增加M2型巨噬细胞的数量，降低M1／M2比值（ P＜0．01）。结论小檗碱对MCD饮食诱导小鼠NASH有较好改善作用，其部分药理机制为：调节肝组织中巨噬细胞表型转化，增加M2型巨噬细胞比例，上调抗炎细胞因子的分泌。
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PiT-1在血管平滑肌细胞中的磷摄取非依赖信号转导作用
血磷升高与慢性肾病患者血管钙化的发生密切相关。高磷诱导血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMCs）向成骨表型转化及基质矿化需要Ⅲ型钠磷共转运体 PiT-1的参与，但 PiT-1在其中的具体作用机制尚不清楚。日前，美国华盛顿大学 Giachelli 的研究小组发现，诱导 VSMCs 向成骨表型转化及基质矿化所需要的磷浓度远远高于大量磷摄取所需要的磷浓度，提示除磷转运外 PiT-1可能还存在其他信号转导作用。进一步研究发现，高磷并不能诱导 PiT-1缺陷的 VSMCs 发生ERK1／2磷酸化，但转染野生型 PiT-1或磷转运缺陷 PiT-1突变体逆转录病毒后可活化 ERK1／2。野生型 PiT-1或磷转运缺陷PiT-1突变体均可促进 VSMCs 向成骨表型转化。磷转运缺陷 PiT-1突变体也可促进 VSMCs 基质矿化，但程度低于野生型 PiT-1。该研究表明，PiT －1所介导的磷摄取依赖性和非依赖作用，对于磷诱导的 VSMCs 钙化都是非常重要的。当细胞外磷浓度高于生理浓度时，PiT-1可作为一个磷感受器在调节 ERK1／2激酶的活性、VSMCs 向成骨表型转化及钙化中发挥信号转导作用。进一步阐明 PiT-1作为磷感受器的具体作用机制，有望为临床治疗血管钙化提供新的靶点。
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巨细胞病毒在平滑肌细胞表型转化中的作用及调控机制
目的 通过体内及体外实验探讨小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化的影响及表型转化PI3K/Akt通路的调控作用.方法 2 × 105PFU MCMV腹腔注射雄性载脂蛋白E基因敲除(apoE-/-)小鼠,饲养16周后取主动脉分别行HE染色、平滑肌22α(smooth muscle 22 alpha,SM22α)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)免疫组化染色.小鼠主动脉血管平滑肌细胞(MOVAS)传代培养后,与MCMV共孵育,检测MOVAS增殖程度,以及SM22a和OPN的表达.进一步应用Western blot检测MCMV在平滑肌细胞表型转化PI3K/Akt通路中的作用.结果 MCMV感染组的apoE-/-小鼠主动脉的动脉粥样硬化程度较对照组严重,动脉壁以表达合成期的标志蛋白OPN为主.3×104PFU MCMV感染MOVAS 24 h细胞后,SM22a表达较对照组下降,OPN表达较对照组增加(P =0.023,P=0.034).MCMV刺激磷酸化Akt蛋白表达上调(P =0.035),PI3K通路的抑制剂LY294002不仅抑制MCMV促平滑肌细胞表型转化,而且还阻断MCMV感染后的Akt蛋白磷酸化(P =0.031),而对对照组无明显影响(P=0.081).结论 MCMV诱导了平滑肌细胞的表型转化,PI3 K/Akt信号途径可能参与了MCMV促平滑肌细胞表型转化的过程.
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尿毒症血清活化Notch信号通路调控血管平滑肌细胞表型转化
目的 研究尿毒症血清对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化影响,探讨动静脉内瘘(arteriovenous fistula,AVF)狭窄及失功的机制. 方法 ①弹性纤维染色(elastic-Van Gieson staining,EVG)比较内膜厚度,免疫组化法观察α-SMA、FSP-1、PCNA的表达;②培养人主动脉平滑肌细胞株(human aortic smooth muscle cells,HASMCs),分为无血清组(control,Ctl)、10％正常血清组(normal serum group,NS)、5％～20％尿毒症血清组(uremia serum group,US),检测平滑肌细胞α-SMA、SMMHC、SM22 α、FSP-1、PCNA的表达;③Western blot检测各组平滑肌细胞N1ICD蛋白的表达,QPCR检测细胞Notch1-3、Hes1、Hes5的mRNA表达,并比较Notch信号抑制剂DAPT预处理24h对细胞SM22 α、SMMHC、FSP-1、PCNA、Hes1的mRNA表达的影响;④免疫组化染色检测Jagged1的表达,ELISA法检测人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)Jagged1的表达,并用Western blot法检测HASMCs的Jagged1蛋白表达. 结果 ①内瘘内膜显著增厚,增生内膜α-SMA呈阳性表达;与正常血管比较,增生内膜FSP-1、PCNA阳性表达增加,差异均有统计学意义(FSP-1:Ctl-A:P=0.024,Ctl-V:P=0.011;PCNA:Ctl-A:P=-0.002;Ctl-V:P=0.005);②与10％NS组相比,10％US组细胞α-SMA、SM22α蛋白表达下降,而FSP-1、PCNA蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P=0.002;P=-0.001;P=0.001;P＜0.001),且上述指标与尿毒症血清呈浓度依赖性;10％US组细胞SM22 α、SMMHC的mRNA表达下降,而FSP-1、PCNA的mRNA表达增加,差异有统计学意义(P=0.014;P=-0.003;P=0.045;P=0.001);③与10％NS组比较,10％US组细胞N1/CD蛋白的表达显著增加,差异有统计学意义(P＜0.001);10％US组细胞Notch 1,3、Hes 1、Hes 5的mRNA表达增加,差异有统计学意义(P值分别为＜0.001,0.025,＜0.001,0.035),Notch2的表达无统计学差异(P=0.907);DAPT预处理可上调SM22 α、SMMHC的mRNA表达,下调FSP-1、PCNA及Hes1的mRNA表达,差异均有统计学意义(P=0.003;P=0.020;P=0.036;P=0.009;P＜0.001);④内瘘组织Jagged1的表达增加,主要位于增生内膜;与10％NS组相比,10％US组HASMCs及HUVEC的Jagged1蛋白表达均增加,差异均有统计学意义(P值分别为0.001,0.005). 结论 尿毒症血清通过上调配体Jagged1的表达,激活Notch信号通路,促进VSMC表型由收缩型向合成型转变,可能是AVF内膜增生的机制之一.
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替米沙坦对高盐诱导Wistar大鼠肠系膜动脉重构中血管平滑肌细胞表型转化的影响
目的 探讨替米沙坦对4％高盐诱导Wistar大鼠肠系膜动脉重构中血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的影响.方法 将雄性Wistar大鼠按随机原则分为对照组(0.5％ NaCl饲料饲养)、模型组(4％ NaCl饲料饲养)、替米沙坦组[4％ NaCl饲料+替米沙坦5 mg/(kg· d)],共喂养24周.运用HE、Masson及免疫组织化学染色观察肠系膜动脉结构变化.实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)及Western blot检测肠系膜动脉平滑肌肌动蛋白(SMA)、平滑肌22α(SM22α)、调宁蛋白(calponin)和骨桥蛋白(OPN)的mRNA和蛋白表达水平.结果 与对照组(n=8)比较,模型组(n=10)血压升高,肠系膜动脉中膜增厚,中膜厚度/腔径、血管壁横截面积、血管壁横截面积/腔径和中膜胶原容积分数增加,增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达率增加(0.612±0.096比0.184±0.041,P＜0.01),SMA、SM22α、调宁蛋白的mRNA和蛋白表达降低,而骨桥蛋白的mRNA和蛋白表达升高;与模型组相比,替米沙坦组(n=9)血压降低,肠系膜动脉中膜厚度和中膜厚度/腔径、血管壁横截面积、血管壁横截面积/腔径减小,中膜胶原容积分数降低,PCNA阳性表达率减少(0.208±0.029比o.612±0.096,P＜0.01),SMA、SM22α、调宁蛋白的mRNA及蛋白表达升高,而骨桥蛋白的mRNA及蛋白表达降低.结论 4％高盐喂食可引起Wistar大鼠肠系膜动脉重构和血压升高,VSMC由收缩型向合成型转化可能是其机制之一;替米沙坦可能通过逆转VSMC表型转化,改善肠系膜动脉重构.
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肝细胞生长因子对血管外膜成纤维细胞表型转化及迁移的作用
目的检测肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor/scatter factor , HGF)对血管外膜成纤维细胞(adventitial fibroblasts, AF)表型转化及迁移的影响,探索其在血管外膜重构中的可能作用.方法体外培养AF,以不同剂量(0、20、40、80 ng/ml)HGF刺激AF及40 ng/ml HGF刺激AF不同时间(0、4、16、24小时),蛋白免疫印迹方法(Western blotting)分析不同条件刺激后AF中α-平滑肌肌动蛋白(α-SM actin)的表达变化;用transwell检测不同浓度HGF对AF迁移的影响.结果 HGF可上调AF中α-SM actin表达,呈一定剂量依赖性和时间依赖性;40 ng/ml HGF可明显促进AF迁移,迁移细胞数目在一定范围内随着HGF浓度增加而增加.结论 HGF能诱导AF表型转化为肌成纤维细胞(myofibroblasts, MF),促进AF迁移,在血管外膜重构中可能具有一定作用.
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低密度脂蛋白对体外培养的肾小球系膜细胞表型转化的影响
目的研究低密度脂蛋白(LDL)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(MCs)表型转化的诱导作用.方法采用不同浓度的LDL(0, 25, 50, 100, 150 μg/mL)刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞的方法,以MTT比色法检测细胞增殖,透射电镜观察系膜细胞的形态学变化,免疫细胞化学染色及Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)及纤维连接蛋白(FN)的表达.结果在LDL作用下,系膜细胞形态发生明显变化,细胞变为长梭形,透射电镜下出现肌动蛋白样结构.免疫细胞化学染色及Western blot显示α-SMA、CTGF、ColⅣ及FN表达增强(P<0.05).结论 LDL具有诱导肾小球系膜细胞发生表型转化的作用.
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Ⅰ型血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对胰腺星状细胞的影响
目的近年来研究表明,静止状态的胰腺星状细胞(PSC)在多种因子的刺激下可发生表型转化而活化为肌成纤维细胞,后者参与细胞外基质(ECM)的代谢调节而促进胰腺纤维化的发生与发展.
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非对称性二甲基精氨酸通过Rho/ROCK信号通路介导大鼠血管平滑肌细胞迁移
目的 探讨非对称性二甲基精氨酸(Asymmetric Dimethylarginine,ADMA)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移和形态变化的影响,并探索Rho/ROCK和MAPK信号转导通路在其中的作用.方法 原代培养大鼠VSMCs,并通过转染二甲基精氨酸二甲胺水解酶hDDAH2过表达载体,L-精氨酸(1mM)或ROCK抑制剂Y27632等预处理,观察细胞RhoA蛋白与底物rhotekin蛋白结合程度,ROCK底物MYPT-1磷酸化程度、VSMC迁移能力和细胞骨架及黏着斑定位情况.结果 (1) ADMA诱导平滑肌细胞Rho/ROCK信号转导通路；(2) Rho/ROCK和ERK信号通路交联介导ADMA对平滑肌细胞迁移能力的诱导作用;(3) ADMA通过Rho/ROCK诱导平滑肌细胞骨架无序排列、黏着斑定位改变;(4)L-精氟酸对上述变化有逆转作用.结论 ADMA通过Rho/ROCK和ERK1/2信号交联诱导VSMC迁移和表型转化,而L-精氨酸逆转ADMA引起的改变.
关键词： 非对称性二甲基精氨酸(ADMA) 血管平滑肌细胞 表型转化 Rho激酶 迁移 -
E1A激活基因阻遏子基因表达与血管外膜成纤维细胞表型转化的关系
目的：探讨E1A激活基因阻遏子（CREG）基因表达与血管外膜成纤维细胞（AFs）表型转化间的关系。方法制作小鼠颈动脉损伤模型，免疫荧光染色观察血管外膜中CREG与平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达变化；培养小鼠原代AFs，外源性应用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导其表型转化，RT-PCR和Western-blot检测不同作用时间及不同浓度AngⅡ刺激AFs后CREG和α-SMA mRNA和蛋白质表达。结果血管损伤后1 d、3 d血管外膜增生显著，外膜中α-SMA表达显著上调，而CREG表达显著下调；血管损伤后7 d、14 d外膜增生有所缓解，α-SMA表达水平逐渐下降，而CREG表达也有所恢复。应用AngⅡ诱导AFs发生表型转化，AFs中α-SMA mRNA和蛋白水平显著上调，而CREG mRNA和蛋白水平显著下调，并且呈时间和剂量依赖性。结论在体和离体模型均表明AFs表型转化过程中伴随CREG基因表达下调，提示CREG基因可能参与AFs的表型转化。
关键词： E1A激活基因阻遏子 血管外膜成纤维细胞 表型转化 -
糖尿病肾病肾脏组织糖化终末产物的沉积及其与细胞表型转化的关系
目的 观察糖基化终产物(AGEs)在肾脏组织中的沉积及其与肾脏固有细胞表型转化的关系. 方法 采用免疫组化染色法观察AGEs:羧甲基赖氨酸(CML)、吡咯素、戊糖苷素和细胞骨架蛋白:α-肌动蛋白(α-SMA)、L-收缩平滑肌蛋白(L-CLD)在28例2型糖尿病肾病(DN)患者肾活检组织(疾病组)的沉积,分析二者间及其与肾脏病理改变和临床表现的关系.4例增生硬化型IgA肾病及4例轻微病变型和2例正常肾组织作为对照组. 结果 (1)四组均可见CML、吡咯素分别沉积在系膜区和肾间质,但对照组明显弱于DN组;戊糖苷素只沉积在DN肾小球基底膜(GBM).(2)系膜区α-SMA、L-CLD的表达与戊糖苷素呈正相关,吡咯素的沉积与间质L-CLD有关.(3)α-SMA和L-CLD及戊糖苷素的沉积与肾小球硬化指数、间质纤维化百分数及蛋白尿、Scr正相关. 结论 戊糖苷素在GBM的沉积是糖尿病肾小球硬化的重要原因;AGEs对肾脏的影响部分可能是通过引起肾脏固有细胞的表型转化而起作用的.
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血管平滑肌细胞在高血压中的作用
高血压主要表现是外周阻力血管张力的持续升高,导致血管舒缩活动异常,而血管舒缩活动主要取决于血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)[1].因此,目前学者们认为高血压是一种以血管平滑肌细胞增生为主要病变的疾病,高血压时VSMC增生,向内膜下迁移,使血管腔变窄、管壁增厚、外周阻力增高.成熟机体的VSMC呈收缩表型,具有收缩功能,如从收缩表型向合成表型转化,则造成VSMC增生、肥大和向内膜下迁移等生物行为改变,而这种改变又与VSMC的信号传导途径和凋亡有关,因此无论是对高血压的发生、发展,还是防治均需对VSMC进行深入研究[2-5].
