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氯化镉对人肾小管上皮细胞线粒体功能及PGC-1α蛋白表达的影响
目的 探讨氯化镉(CdCl2)对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)线粒体功能、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子α(PGC-1α)蛋白表达的影响,以及CdCl2致HK-2细胞线粒体氧化损伤的机制.方法 体外培养HK-2细胞,以0、10、20、30、40、50和60 μmol/L CdCl2干预24 h后收集细胞,MTT法观察细胞活力;MitoSOXTM活细胞荧光染色观察线粒体中活性氧(ROS)生成情况,多功能酶标仪测定线粒体中呼吸链复合物Ⅲ活性,流式细胞仪分析线粒体膜电位变化;Western blot法检测CdCl2对HK-2细胞总蛋白中PGC-1α表达的影响.结果 与对照组相比,当CdCl2浓度增加到20、60 μmol/L作用24 h后HK-2细胞存活率下降为(77.60±0.82)％和(41.97 ±1.22)％ (P ＜0.01);并呈剂量依赖性引起线粒体呼吸链复合物Ⅲ的活性下降和线粒体ROS增多(P＜0.05),JC-1单体阳性率的比值分别为对照组的1.51、1.58、1.72、2.41和3.47倍(P＜0.01);而细胞总蛋白中PGC-1α蛋白的表达随氯化镉剂量的增加而减少(P＜0.05).结论 氯化镉可通过抑制PGC-1α蛋白表达,抑制线粒体呼吸链复合物Ⅲ的活性,促进线粒体ROS生成,诱导线粒体膜电位下降,导致对HK-2细胞的毒性损伤.
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镰形棘豆总黄酮对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化因子的影响
目的:研究镰形棘豆总黄酮防治肾间质纤维化作用及其机制.方法:大鼠按300 mg·kg-1 ig镰形棘豆总黄酮,连续给药3d后制备含药血清,空白组大鼠ig同体积生理盐水制备空白血清.将人肾小管上皮细胞(HK-2)用含10％胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养,分为4组:空白对照组、单纯转化生长因子母1(TGF-β1 10 μg·L-1)诱导组、空白血清对照组(TGF-β110 μg·L-1 +10％空白血清)、干预组(TGF-β110 μg·L-1+10％镰形棘豆总黄酮含药血清).药物干预24 h后,荧光定量PCR检测结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA的表达.结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,CTGF,PAI-1 mRNA的表达显著上升,而MMP-9 mRNA的表达减弱,与空白对照组相比有统计学意义(P＜0.05),经镰形棘豆总黄酮药物血清干预后,CTGF、PAI-1 mRNA的表达逐步下降,而MMP-9 mRNA的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组相比有统计学意义(P＜0.05).结论:镰形棘豆总黄酮在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化细胞因子CTGF,PAI-1和MMP-9的mRNA表达有关.
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导赤散及配伍组含药血清对人肾小管上皮细胞细胞周期的影响
导赤散为北宋儿科名医钱乙所创制.据<小儿药证直诀>[1]卷下记载,原治小儿"心热,视其睡,口中气温,或合面睡,及上窜咬牙,皆心热也."此后,经医家的不断临床实践,其应用范围有所扩大,主要从治疗心经有热,扩大至心移热于小肠证,又从儿科扩展至内科.
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四妙散对尿酸诱导的人肾小管上皮细胞TGF-β1及α-SMA表达的影响
目的:观察四妙散含药血清对尿酸(UA)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)TGF-β1、α-SMA表达的影响,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用机制.方法:将HK-2细胞分为空白组,模型组,空白血清组,高、中、低剂量组.药物干预24h后,MTT检测细胞活性抑制率;Real-time PCR检测TGF-β1、α-SMA mRNA的表达;免疫组织化学检测TGF-β1、α-SMA蛋白的表达.结果:MTT检测显示尿酸抑制细胞活性(P＜0.01),经含药血清干预后细胞活性抑制明显改善(P＜0.01);Real-time PCR与细胞免疫组化检测显示,尿酸刺激后TGF-β1、α-SMA的mRNA和蛋白表达量均明显增加(P＜0.05),经含药血清干预后,TGF-β1、α-SMA的表达随着剂量增加逐步下降(P＜0.05),呈现一定剂量依赖性.结论:下调TGF-β1、α-SMA的表达,抑制上皮细胞转分化,可能是四妙散抗肾间质纤维化的机制之一.
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新加糖肾康对高糖环境下人肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白和 E-钙黏蛋白的影响
目的：观察新加糖肾康对高糖环境培养下人肾小管上皮细胞（HK-2）α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和 E-钙黏蛋白（E-cadherin）的影响，探讨其防治糖尿病肾间质纤维化的作用机制。方法含10%胎牛血清1640培养基体外培养 HK-2细胞。实验分为空白对照组、高糖组、空白血清组和新加糖肾康低、中、高剂量组。药物干预后，MTT 法检测细胞增殖，ELISA 检测α-SMA 和 E-cadherin 的含量。结果与空白对照组比较，HK-2细胞经高糖培养后细胞数量和α-SMA 含量显著增加、E-cadherin 含量明显降低（P＜0.05）；与高糖组比较，新加糖肾康组α-SMA 含量降低、E-cadherin 含量增加、细胞增殖受到抑制。结论新加糖肾康能够抑制肾小管上皮细胞表型转化及细胞增殖，具有防治糖尿病肾间质纤维化的作用。
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糖耐康对转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞Smad 2、3、7 mRNA表达的影响
目的观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、3、7 mRNA的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养；实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL＋10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL＋5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL＋10%糖耐康药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL＋20%糖耐康药物血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测Smad 2、3、7 mRNA的表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,Smad 2、3 mRNA的表达显著上升,而Smad 7的表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),经糖耐康药物血清干预后,Smad 2、3 mRNA的表达逐步下降,而Smad 7 mRNA的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结论糖耐康在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化信号通路Smad 2、3、7mRNA表达有关。
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止消通脉宁对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞CTGF、PAI-1、MMP-9 mRNA表达的影响
目的 观察止消通脉宁药物血清(以下简称“药物血清”)清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA 的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用.方法 将HK-2细胞用含10％胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养.实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+ 10％空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+ 10％低剂量药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+ 10％中剂量药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+ 10％高剂量药物血清).药物干预24h后,荧光定量PCR检测CTGF、PAI-1和MMP-9 mRNA的表达.结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,CTGF、PAI-1 mRNA表达显著上升,MMP-9 mRNA表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).经止消通脉宁药物血清干预后,CTGF、PAI-1 mRNA表达逐步下降,MMP-9 mRNA表达逐步上升,与单纯TGF-β 1诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 止消通脉宁在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化细胞因子CTGF、PAI-1和MMP-9的mRNA表达有关.
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糖耐康对转化生长因子-β1诱导的 人肾小管上皮细胞纤维化细胞因子的影响
目的 观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化细胞因子的作用,探讨糖耐康防治肾纤维化的作用机理.方法 将HK-2 细胞用含10 %胎牛血清的DMEM/F12(1:1)培养基培养.实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%糖耐康药物血清)、干预3 组(TGF-β110 ng/mL+20%糖耐康药物血清).药物干预24 h 后,荧光定量PCR 检测结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达.结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,CTGF、PAI-1 mRNA的表达显著上升,而MMP-9 mRNA的表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).经糖耐康药物血清干预后,CTGF、PAI-1 mRNA的表达逐步下降,而MMP-9 mRNA 的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 糖耐康在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化细胞因子表达有关.
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糖肾康对高糖诱导人肾小管上皮细胞分泌基质金属蛋白酶-9及其抑制剂-1的影响
目的：探讨糖肾康防治糖尿病肾病的作用机制。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白组、高糖诱导组(30 mmol/L D-葡萄糖)、对照组(30 mmol/L D-葡萄糖＋10%空白血清)和糖肾康低(30 mmol/L D-葡萄糖＋5%糖肾康药物血清)、中(30 mmol/L D-葡萄糖＋10%糖肾康药物血清)、高剂量组(30 mmol/L D-葡萄糖＋20%糖肾康药物血清)。药物干预24、48 h后,ELISA检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制剂-1(TIMP-1)的含量。结果 HK-2经高糖诱导后,MMP-9分泌显著减少,TIMP-1分泌显著增加,与空白组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；经糖肾康干预后,MMP-9含量显著上升,TIMP-1含量显著下降,与高糖诱导组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论糖肾康通过调控高糖诱导人肾 HK-2纤维化因子的分泌,达到防治糖尿病肾病的目的。
关键词： 糖肾康 高糖 人肾小管上皮细胞 基质金属蛋白酶-9 基质金属蛋白酶抑制剂-1 -
四妙散对尿酸诱导人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子及骨形成蛋白-7表达的影响
目的：探讨四妙散药物血清防治肾间质纤维化的作用机制。方法将人肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白组、模型组、对照组及药物血清高、中、低剂量组。实时荧光定量PCR检测结缔组织生长因子(CTGF)、骨形成蛋白-7(BMP-7),免疫组织化学检测CTGF、BMP-7蛋白的表达。结果尿酸诱导后CTGF的mRNA和蛋白表达量明显增加(P＜0.05),BMP-7的mRNA和蛋白表达量明显降低(P＜0.05)；经药物血清干预后,随剂量增加CTGF的表达逐步下降(P＜0.05),BMP-7的表达逐步上升(P＜0.05),呈现一定剂量依赖性。结论四妙散抗肾间质纤维化的机制可能是通过下调CTGF的表达和上调BMP-7的表达抑制上皮细胞转分化完成的。
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止消通脉宁干预转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞表型转化的研究
目的 观察止消通脉宁药物血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)表型转化的影响,并探讨其机制.方法 将HK-2细胞用含10％胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养并分为空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β1 10 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β1 10 ng/mL+ 10％空白血清)、干预1组(TGF-β1 10 ng/mL+ 10％低剂量止消通脉宁药物血清)、干预2组(TGF-β1 10 ng/mL+ 10％中剂量止消通脉宁药物血清)、干预3组(TGF-β1 10 ng/mL+ 10％高剂量止消通脉宁药物血清).药物干预24 h后,免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达.在24、48、72 h应用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)和纤连蛋白(FN)的含量.结果 正常HK-2细胞表达E-cadherin,不表达α-SMA,经TGF-β1刺激后细胞表型发生转变,E-cadherin的表达明显减弱,α-SMA表达明显增强,且Col Ⅰ、ColⅢ和FN的分泌明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).止消通脉宁药物血清干预后α-SMA表达明显减弱,E-cadherin表达明显增强;同时抑制了Col Ⅰ、ColⅢ和FN的分泌,与TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 止消通脉宁在一定程度上能够抑制人肾小管上皮细胞表型转化,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用.
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丹参酚酸B盐对TGF-β1诱导的HK-2上皮-间充质转分化的影响
目的:研究丹参酚酸B盐(salvianolic-acid B,SA-B)对转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞HK2(human human renal proximal tubular cells)转分化的影响.方法:复苏并传代培养HK2细胞,应用不同剂量的TGF-β1或同一剂量作用不同时间诱导HK2细胞发生上皮-间充质转分化(epithelia-mesenchymal transition,EMT),同时给予骨形成蛋白7(BMP-7,阳性对照)(50μg·L~(-1))和SA-B(1×10~(-5)mol·L~(-1))干预观察二者对EMT的影响.应用Western印迹法和免疫荧光法检测HK2细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达.结果:BMP-7显著抑制了TGF-β1诱导的E-cadherin下调(P<0.05)和α-SMA上调(P<0.05);而SA-B显著抑制TGF-β1诱导的α-SMA表达增加(P<0.05),未见其抑制TGF-β1诱导的E-钙黏蛋白下调.结论:SA-B和BMP-7能够抑制TGF-β1诱导的HK2上皮-间充质转分化,其共同的作用是抑制了TGF-β1诱导的α-SMA上调,而SA-B对E-钙黏蛋白的调控作用有待进一步的研究.
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敲低Txnip抑制高糖诱导的人肾小管细胞系凋亡
目的 观察敲低Txnip对高糖诱导人肾小管上皮细胞凋亡的影响.方法 将体外培养人肾小管上皮细胞分为正常糖组、高糖组、高糖+质粒载体对照组及高糖+ shRNA组.采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞ROS水平;Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、BAX、BCL-2、P38 MAPK、P-P38 MAPK及细胞色素c的表达.结果 与正常糖组相比,高糖组肾小管上皮细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加(P＜0.01),cleaved caspase-3和P-P38 MAPK表达增高,BAX/BCL-2比率明显升高以及细胞色素c易位(P＜0.05).敲低Txnip能够显著抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡和ROS产生,下调cleaved caspase-3、和P-P38MAPK的表达,减少BAX/BCL-2比率和细胞色素c易位(P＜0.05).结论 敲低Txnip能够抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞凋亡可能是通过减少ROS产生,保护线粒体功能,抑制P38MAPK信号通路激活而实现的.
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福辛普利抑制LPS诱导的人肾小管上皮HK-2细胞TAK1表达
目的 探讨福辛普利(FOS)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖及对转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响.方法 体外培养正常HK-2细胞,分为3组:对照组(Ctrl)、LPS诱导组(10μg/L)、FOS干预组(LPS 10 μg/L+FOS 1×106 mol/L).细胞培养12、24和48 h,以甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖情况,酶联免疫吸附(ELISA)法观察细胞上清纤维黏连蛋白(FN)变化,Western blot法检测TAK1、FN蛋白表达,实时荧光定量PCR检测TAK1 mRNA的含量.结果 LPS诱导组较对照组细胞的增殖水平(在48 h分别为0.462±0.013及0.363±0.014)、胞质中FN的含量均显著增高,且自12 h开始TAK1蛋白(在48 h分别为1.627±0.101及0.547±0.010)及mRNA表达水平上调(P＜0.01,P＜0.05),FOS干预组细胞增殖(在48 h为0.396 ±0.011)、FN的含量及TAK1的表达(在48 h蛋白表达为1.308±0.097)较同时间点LPS组(在48 h蛋白表达为1.627 ±0.101)显著下调(P＜0.01).结论 FOS可能通过抑制HK-2的增生与活化,减轻细胞外基质FN的沉积,起到延缓肾间质纤维化的作用.
关键词： 福辛普利 人肾小管上皮细胞 转化生长因子β激活激酶 肾间质纤维化 -
尿毒症毒素对人肾小管上皮细胞外基质的影响及临床意义
目的探讨尿毒症毒素对人肾小管上皮细胞外基质的影响及临床意义.方法无菌收集40份尿毒症患者血清和20例正常人血清,培养及鉴定人肾小管上皮细胞株(HK-2),采用消化法检测羟脯氨酸含量,ELISA方法检测纤连蛋白(FN)、金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的蛋白分泌量,RT-PCR方法检测MMP-1、TIMP-1 mRNA的表达.结果5%～20%浓度尿毒血清组胶原蛋白、FN分泌量均较正常对照组增高(P＜0.01),且随着尿毒血清浓度的升高而增高,以分子量＞10 000 ku的组分增高为显著(P＜0.01).各浓度尿毒血清组MMP-1/TIMP-1基因表达和蛋白分泌的比值均较正常对照组降低(P＜0.01),且随着尿毒血清浓度的增高而降低,以分子量＞10 000 ku尿毒血清组降低为显著,而分子量＜5 000 ku尿毒血清组较正常对照组增高(P＜0.01).结论慢性肾衰竭患者体内蓄积的尿毒症毒素可能通过促进人肾小管上皮细胞外基质的分泌,减少其降解,加速肾小管-间质纤维化的进展,其中以分子量＞10 000 ku的尿毒症毒素作用为显著.
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对比剂通过内质网应激诱导人肾小管上皮细胞凋亡
目的 探讨内质网应激在对比剂诱导人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡中的作用.方法 在缺血、缺氧(0.2％胎牛血清,5％ CO2-95％N2饱合混合气体)环境下,以HKC为研究对象,将HKC细胞株随机分为3组:空白组、对比剂组(加入120 g I/L碘普罗胺预处理2 h)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(加入10 mmol/L NAC预处理2h,再加120 g I/L碘普罗胺处理2 h).细胞增殖试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测细胞中半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)、葡萄糖调节蛋白-78 (GRP78)和CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的mRNA表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中caspase-12、GRP78和CHOP的蛋白表达水平.结果 对比剂可呈时间依赖性抑制HKC活性,与0h相比,1 h HKC活性显著降低(0.351±0.066比0.447±0.087,P＜0.05);流式细胞术结果示对比剂可促进缺血缺氧HKC凋亡(P＜0.05);real-time PCR结果示,对比剂组和NAC组GRP78和CHOP的mRNA水平明显高于空白组(P＜0.05),对比剂组caspase-12的mRNA水平明显高于空白组和NAC组(P＜0.05);Western blot结果示,对比剂明显增加了caspase-12、GRP78和CHOP的蛋白表达,而NAC明显降低了caspase-12的表达,但不能明显降低对比剂诱导的GRP78和CHOP高表达(P＜0.05).结论 在缺血缺氧条件下,对比剂诱导HKC活性下降、凋亡,此作用可能与细胞内氧化应激及内质网应激相关.
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雷公藤内酯醇对人肾小管上皮细胞补体C3的抑制
近年的研究表明[1,2],肾脏局部固有细胞尤其是肾小管上皮细胞,在病理因素诱导下过度产生和激活的补体,在肾免疫损伤中发挥重要作用,阻断这一作用将对保护肾功能、延缓肾病恶化具有重要意义.雷公藤内酯醇(T4)是雷公藤二萜化合物中免疫抑制活性强的单体,本研究通过观察其对肿瘤坏死因子(TNF)α诱导人近端肾小管上皮细胞补体C3mRNA和蛋白的影响,探讨雷公藤在分子水平治疗肾病的免疫抑制机制,并与免疫抑制剂环孢素A(CsA)和FK506比较,进一步探讨雷公藤的临床应用意义.
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钙化纳米微粒诱导人肾小管上皮细胞自噬的研究
目的 观察不同浓度钙化纳米微粒( calcifying naniparticles,CNP)对人肾小管上皮细胞HK-2生长的影响,探讨CNP是否可以诱发体外培养HK-2细胞的自噬作用. 方法 将0.0125、0.025、0.05、0.1 mg/ml等4种浓度CNP加入对数生长期的HK-2细胞,培养12、24、48、72 h后,MTT法检测HK-2细胞生长、增殖情况.EGFP-LC3表达质粒转染体外培养HK-2细胞,培养24 h后,加入CNP共同孵育,作用3、6、24、48 h后收集细胞,透射电镜下检测CNP作用后HK-2细胞自噬体的形成,荧光显微镜检测CNP作用前后HK-2细胞LC-3斑点的形成情况. 结果 CNP对HK-2细胞的生长抑制作用随着CNP浓度的升高和作用时间的延长而增强,0.05 mg/ml CNP作用48 h后HK-2细胞增殖抑制率为14.5％,0.1 mg/ml CNP作用72h后抑制率达21.5％.加入CNP 6 h后透射电镜下可见CNP聚集形成结晶样物并黏附于HK-2细胞表面,HK-2细胞质内见散在的自噬体形成.荧光显微镜下可见转染EGFP-LC3的HK-2细胞质内散在分布的LC-3荧光斑点. 结论 CNP可以诱发HK-2细胞的自噬作用,可能在肾结石等生物矿化相关疾病发生中起重要的作用.
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钙化性纳米微粒与人肾小管上皮细胞相互作用的实验研究
目的 探讨钙化性纳米微粒( calcifying nanoparticle,CNP)对人肾小管上皮细胞(HK-2)的损伤机制及CNP在肾结石形成中的可能作用. 方法 体外培养的HK-2加入CNP,使用NADPH氧化酶抑制剂apocynin进行干预.将HK-2分为4组:正常对照组、纳米微粒组、药物组、纳米微粒+药物组.光镜及透射电镜下观察HK-2与CNP相互作用后的形态变化.采用比色法检测各组24h后细胞培养液中乳酸脱氢酶、丙二醛和透明质酸的水平. 结果 CNP可引起HK-2形态变化,通过透射电镜观察到HK-2吞噬CNP现象.24 h后各组细胞培养液中乳酸脱氢酶含量分别为(231 ±19)、(1042±25)、(433±24)、(652±39) U/L,丙二醛分别为(1.61±0.04)、(5.41±0.10)、(1.98±0.05)、(2.69±0.10)μmol/L,透明质酸分别为(83.44±4.23)、(130.01±3.76)、(95.39±2.06)、(104.73±1.67) ng/L,组间差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 HK-2具有黏附、吞噬CNP的能力,CNP可引起HK-2氧化应激损伤.
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人肾小管上皮细胞及正常肝细胞在药物毒性器官选择中的应用
目的：探讨人肾小管上皮细胞（HK－2）及人正常肝细胞（L－02）在药物毒性器官选择中的应用。方法以肾毒性药物庆大霉素、顺铂、环孢素A及肝毒性药物硫唑嘌呤作用于HK－2及L－02细胞24 h，考察并比较药物对2种细胞的形态、存活、凋亡及酶学指标变化的影响。结果肾毒性药物在较低浓度下即可引起HK－2细胞的形态、存活、凋亡及酶学指标的显著性变化，肝毒性药物则在较低浓度下即可引起L－02细胞相关指标的显著性变化；比较4种药物的IC10值发现：3种肾毒性药物对HK－2的IC10值均小于对L－02的IC10值；而肝毒性药物硫唑嘌呤的IC10值则HK－2大于L－02。结论基于HK－2及L－02细胞评价药物的毒性器官选择性是可行性的。
