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丙型肝炎病毒E2包膜糖蛋白的研究进展
HCV E2包膜糖蛋白是HCV的结构蛋白之一,具有重要的受体结合位点和抗原表位,在病毒感染和宿主免疫过程中起着十分重要的作用,也是目前疫苗研究的热点.其分子和功能特性的研究对HCV作用机制及预防和治疗的研究有重要意义.近年来,该领域的研究取得一定进展.本文综述了E2蛋白在病毒的入胞作用,在机体的免疫应答及其在疫苗研制方面的作用.
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SARS冠状病毒基因组编码蛋白的研究进展
SARS冠状病毒是一种新的病毒,能够引起人体以急性肺损伤为主要表现的传染病,对这种病毒的研究引起全世界的高度关注.本文就SARS冠状病毒的基因组所编码的结构蛋白和酶的研究现状和预测加以综述,为SARS的诊断、治疗和研究提供理论依据.
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HCMV pp65的基础及应用研究
HCMV被膜磷蛋白pp65(phosphoprotein 65,ppUL83)作为GCNV的主要结构蛋白,在病毒感染及诱导机体免疫反应中起重要作用,对其深入研究将有利于进一步明确HCMV的致病机理,探讨HCMV的免疫预防与治疗的新途径.本文对HCMV pp65的结构、功能及有关的免疫研究基础与应用进行了综述.
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HIVp24抗原检测技术的研究进展
p24是HIV的主要结构蛋白,在病毒的包装和成熟过程中起重要作用.p24蛋白的氨基酸序列在HIV各毒株之间高度保守.HIV p24抗原的检测在早期诊断、预测病程、胎儿感染确诊和基础研究等方面具有重要意义.本文主要介绍了HIV p24抗原的生物学特性、检测意义,评述了各种检测方法的主要优缺点和发展趋势.
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口服诱导免疫耐受疗法治疗慢性乙型肝炎
目前乙型肝炎尚无特效疗法,抗病毒及增强免疫冶疗效果不理想.而对HBV已耐受的慢性携带者却很少发生肝损伤.有报道口服病毒结构蛋白可诱导免疫耐受,方法简便,如用于治疗乙型肝炎,诱导对病毒的耐受状态,可有助于减轻病变、延缓并发症的发生,本文就乙型肝炎诱导免疫耐受疗法的机理作一综述.
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一个新的“抗艾”药物靶点被发现(1)
南开大学医学院魏民教授课题组发现了一个新的人体宿主细胞编码的蛋白--卷曲螺旋结构蛋白8(以下简称CCDC8)。该蛋白具有很强的抗1型艾滋病病毒(HIV-1)活性。细胞水平表达CCDC8可以大幅度降低病毒产量,大可达30倍。该蛋白的发现为“抗艾”药物的研制提供了全新靶点。日前,介绍该成果的论文在线发表于 Nature 出版集团旗下《Scientific Reports》杂志上。
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表观遗传流行病学
一、表观遗传学和表观遗传流行病学近年研究表明,高等生命遗传信息的复杂性不仅在于基因组有更多的结构蛋白基因编码,还在于基因表达调控机制的复杂性.因此基因表达调控是现代分子生物学的核心.
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心肌钙蛋白-Ⅰ在小儿病毒性心肌炎诊断中的价值
病毒性心肌炎(VMC)的临床特点是病情轻重悬殊,缺乏特异性表现,常造成诊断困难.心肌钙蛋白-I(cTnI)属心肌结构蛋白,具有特异的抗原性.为探讨其在小儿VMC诊断中的价值,自1998年起进行了临床研究,报告如下.
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HEP-Flury株病毒辅助质粒包装CTN株病毒基因组拯救狂犬病病毒
目的 以CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒(pCTN-GFP)和HEP-Flury株病毒N、P、L辅助质粒共转染拯救具有活性的CTN株重组狂犬病病毒(CTN-GFP).方法 将CTN株狂犬病病毒全长基因组分4段进行扩增,体外连接扩增片段并克隆入表达载体中,构建CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒,基因组ψ基因被标识基因GFP取代,通过与HEP-Flury株病毒N、P、L3个辅助质粒共转染BHK-21细胞,拯救能够稳定表达GFP的重组病毒CTN-GFP.结果 成功扩增全长基因组的4个基因片段,并将其克隆入表达载体,构建了CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒pCTN-GFP,经酶切鉴定和序列测定证明pCTN-GFP为正确克隆,可直接用于病毒拯救.将pCTN-GFP与HEP-Flury株病毒辅助质粒共转染BHK-21细胞4d后,成功拯救出CTN株重组狂犬病病毒,重组病毒能够表达标识基因GFP,荧光显微镜下可直接观察到标识基因GFP的表达,设计跨GFP和L基因的特性引物对重组病毒进行RT-PCR检测,结果证明此病毒是从克隆的质粒中拯救的重组病毒.结论 HEP-Flury株病毒的结构蛋白能够包装并转录CTN株病毒的基因组RNA.
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中药干预血管胶原蛋白表达的研究进展
胶原蛋白(Collagen)是人体内含量多、分布广的一种蛋白质,主要存在于人体内皮肤、骨骼、牙齿、肌腱、韧带和血管中,约占体内蛋白质总量的30%.胶原蛋白是细胞外基质(ECM)中丰富的结构蛋白,在个体的发生、分化、形态形成过程中与其他结缔组织成分一样起着重要的作用,因此,胶原蛋白与机体的生长、衰老及疾病有着极其密切的关系.
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化痰通络方对急性脑梗死大鼠溶栓后血脑屏障相关构成蛋白表达的影响
目的 探讨化痰通络方对急性脑梗死经重组组织纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓后出血的可能作用机制.方法 240只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、rt-PA组及化痰通络方低、中、高剂量组,采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,化痰通络方低、中、高剂量组分别于血栓注入后3h-次性由尾静脉缓慢注入rt-PA(5.67 mg/kg)进行溶栓治疗后给予化痰通络方浓缩液0.72 g/kg、1.44 g/kg、2.88 g/kg灌胃;rt-PA组溶栓治疗后给予等量生理盐水灌胃;假手术组和模型组相同时间点给予等量生理盐水灌胃;各组每日灌胃2次,共7天.各组于实验6h、24h,72h、7天4个时相电镜观察各组大鼠大脑皮质缺血区内皮细胞微观形态,应用Western blot法检测大脑皮质咬合蛋白(occluding)、闭合蛋白(claudin-1)、胞浆附着蛋白(ZO-1)的表达.结果 与假手术组比较,模型组大鼠在24 h、72h时大脑皮质occluding、claudin-1、ZO-1蛋白表达下降(P<0.05);与模型组比较,化痰通络方高剂量组在6h、24h、72h时occluding、claudin-1蛋白表达明显升高(P<0.05),化痰通络方中剂量组在24h、72h时occluding蛋白表达升高(P<0.05);化痰通络方中、高剂量组在24h、72h时occluding蛋白表达高于rt-PA组(P<0.05);化痰通络方中剂量组在72h时claudin-1蛋白表达高于rt-PA组,24h时ZO-1蛋白表达高于rt-PA组(P<0.05).结论 化痰通络方可能通过改善大脑皮质内皮细胞微观形态,调控微血管内皮细胞构成蛋白occluding、claudin-1、ZO-1蛋白的表达,进而保护血脑屏障完整性.
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SARS冠状病毒结构蛋白在血清学诊断中潜在应用价值的比较
为了确定特异的SARS抗体检测抗原,比较了SARS冠状病毒(SARS-CoV)主要结构蛋白与SARS患者血清的反应性.从SARS死亡患者的肺组织提取的总RNA为模板,用RT-PCR技术分别扩增S、N、M和E 4种结构蛋白基因,对3种S截短突变体和N、M、E的重组蛋白在大肠杆菌中进行表达.以表达的蛋白为抗原,应用Westernblot跟踪检测11例SARS患者血清54份.结果显示:SARS-CoV的重组N蛋白和S蛋白有很强的抗原性,S蛋白的3个区段的抗原性强弱存在差异,S3抗原性强于S1和S2;在患病第1周、2周、3周及3周以上,N蛋白和S3蛋白抗体检出率分别为40%、65.2%、100%、100%和40%、61%、76.2%、100%;提示SARS-CoV重组N蛋白和S3蛋白在SARS的血清学诊断中有一定的应用价值.
关键词: SARS冠状病毒 结构蛋白 Western blot 血清学诊断 -
稳定表达乙脑病毒结构蛋白的细胞系的建立
以乙型脑炎病毒SA14-14-2疫苗株全长基因组克隆质粒pBR-JTF为模板,通过PCR分别扩增prM-E及C-prM-E基因片段,构建表达乙型脑炎病毒结构蛋白的真核表达质粒pCJE-ME及pCJE-CME.将这2种重组质粒用脂质体法转染BHK一21细胞后,质粒pCJE-ME表现明显的细胞毒性,转染细胞不能存活;质粒pCJE-cME可导致筛选到表达JEV结构蛋白的稳定细胞系.这种稳定表达JEV结构蛋白的细胞系通过PCR扩增细胞系基因组、ELISA、Western Blot、间接免疫荧光等方法得到鉴定.研究结果表明在C蛋白存在下,乙型脑炎病毒C-prM-E蛋白可以在BHK细胞中稳定表达,为研制JEV新型复制子颗粒疫苗提供了便利工具.
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人乳头瘤病毒结构蛋白在病毒感染中的作用研究进展
人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)属于乳多空病毒科(Papovaviridae)的乳头瘤病毒属,是一种无包膜的双链DNA病毒,能诱发人的皮肤或粘膜产生疣和乳头状瘤,某些基因型与子宫颈癌密切相关.
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猪细小病毒结构蛋白VP1和VP2的基因免疫研究
利用真核表达载体pCIneo和pcDNA3.1(+)分别构建了含有猪细小病毒VP1基因的pCIneo VP1和含有VP2基因的pCIneo VP2与pcDNA VP2三种真核表达质粒.将上述三种真核表达质粒分别转染IBRS-2细胞,利用间接ELISA检测表达情况,结果表明上述三种质粒均能在IBRS-2细胞表达,表达产物位于细胞中.在此基础上,利用这三种质粒分别以肌内注射的方式,间隔2周2次免疫小鼠,结果发现所有表达质粒均能诱导产生明显的细胞免疫和体液免疫,其中pCIneo VP1质粒诱导的体液免疫强,与猪细小病毒灭活疫苗免疫组相当,pCIneo VP2诱导的细胞免疫应答强于PPV灭活组,pCIneo VP1和pCIneo VP2联合免疫并没有加强作用.
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同时表达蓝舌病毒四个主要结构蛋白可装配成病毒样颗粒
为研制蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)基因工程疫苗和进一步研究BTV结构与功能的关系,对BTV病毒样颗粒(VLP)的装配进行了研究.同时在昆虫细胞中表达BTV主要结构蛋白VP7、VP3、VP2与VP5,将细胞裂解液超速离心纯化后,发现主要存在两种形态的颗粒:一种与前文报道的病毒核心样颗粒(CLP)相同,直径约为60nm~70nm,蛋白壳厚10nm~15nm;另一种大小为70nm~80nm,蛋白壳厚20nm~30nm,与完整空心BTV颗粒形态一致.这些颗粒是由VP2/3、VP5与VP7组成的,不含核酸和其它任何BTV蛋白,并且具有诱导中和抗体的活性和血凝活性,与预期结果一致.以BTV13 VP7与VP3蛋白为内壳,以与其基因相比变异较大的BTV10 VP2、VP5为外壳,成功地实现了VLP装配,提示BTV颗粒内壳与外壳蛋白间相互作用引发装配的区域可能是保守的,VP2蛋白的高变性对其与内壳间的相互作用并无影响.
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家蚕浓核病毒(镇江)株主要结构蛋白基因的克隆及表达
家蚕浓核病毒(Bombyx mori densovirus,BmDNV)是一种昆虫细小病毒.与其它昆虫细小病毒感染昆虫体内多种组织不同,家蚕浓核病毒只感染家蚕中肠上皮组织的圆筒型细胞,感染该病毒细胞的细胞核可以被孚尔根和甲基绿浓染,在病毒感染的早期中肠上皮组织细胞数量增加,形成褶皱,后感染细胞脱落到肠腔中[1-3].自从20世纪70年代末日本学者证实家蚕浓核病是由于家蚕浓核病毒感染引起的以来[4],已经分离得到了多个病毒株系[5-8].根据它们在血清学、理化特性、品种感受性和病理特征等方面的差异,分为BmDNV-1(伊那株)和BmDNV-2(以山梨株为代表)[8-11].
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共表达丙性肝炎病毒结构蛋白及分泌型荧光素酶Gluc的慢病毒制备与鉴定
旨在制备共表达丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)结构蛋白及分泌型荧光素酶Gluc慢病毒VSVpp-HCV.通过构建共表达HCV结构蛋白及分泌型荧光素酶Gluc的慢病毒表达载体pCSGluc2aCE1E2,与包膜质粒pVSVG,包装质粒pHR'CMV△8.2共转染HEK 293T的方式获取慢病毒,将慢病毒感染细胞后,对细胞上清中Gluc荧光素酶活性、细胞中HCV特异蛋白的表达等进行表达鉴定.结果表明:浓缩后获得的慢病毒浓度为1×108TU/mL,电镜负染观察到直径约为100nm带包膜的浓缩慢病毒颗粒;慢病毒VSVpp-HCV感染细胞后,细胞内HCV特异蛋白及上清中Gluc荧光素酶的表达呈平行关系.因此通过检测Gluc荧光素酶的表达水平可反映HCV结构蛋白表达水平,这为建立基于慢病毒感染的带有报告基因的HCV转基因小鼠模型提供了基础.
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鸡传染性法氏囊病病毒基因组B片段的克隆与序列分析
鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)属双链双节段RNA病毒科,禽双链RNA病毒属.IBDV基因组由A、B两个RNA片段组成.VP2是主要的IBDV结构蛋白,由A片段编码,它的变异有可能导致IBDV血清型变异.近的研究表明:B片段对病毒的毒力也有一定的影响.而我国对B片段的研究还未见报道.为此,我们克隆了我国甘肃地区IBDV分离强毒株Ts毒株的B片段全序列,并与报道的序列进行了比较分析.
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衣原体基因组学与蛋白组学研究进展
目前,4个种衣原体:豚鼠嗜性衣原体、鼠衣原体、沙眼衣原体和肺炎嗜性衣原体基因组已有较详细的研究,揭示了衣原体基因组的紧密性和多成员的起因.多形态膜蛋白多基因家族、具有第Ⅲ型分泌系统功能基因以及编码肽聚糖基因的发现,反映了该领域的重要研究成果.随着多个种株衣原体基因组完整核苷酸序列测定的完成,人们对衣原体发育过程中生产合成的多种蛋白的认识也在不断深入,主要包括外膜蛋白、外膜主蛋白、热休克蛋白、多态外膜蛋白等,这些蛋白的结构和功能不同,充分认识其特性对衣原体的致病机理、免疫发生机理的研究及高效基因工程疫苗的研制将会产生重要的影响.