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3C蛋白酶及抑制剂研究进展
3C蛋白酶是催化小RNA病毒前体蛋白中非结构蛋白部分裂解的关键蛋白酶,对病毒的复制有着重要作用,是当前抗病毒研究的一个重要靶点.本文简要概述了3C蛋白酶的结构、功能和抑制剂的研究进展,对该酶的抑制研究和相关病毒的治疗有积极意义.
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轮状病毒非结构蛋白NSP4研究进展
轮状病毒(rotavirus,RV)是病毒性腹泻的主要病因.NSP4(nonstructural protein 4)作为轮状病毒的一种非结构蛋白,在病毒形态发生和致病性中发挥重要作用,近年来日益受到重视.本文就NSP4的研究进展作一综述.
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HSVI立即早期基因研究进展
相对于其它病毒而言,单纯疱疹病毒的基因组巨人,基因数日繁多,根据其基因转录的先后顺序,分为立即早期、早期利晚期基因二类.作为病毒首先表达的立即早期基因,它们的表达产物都为非结构蛋白,可对病毒的复制进行调控,决定了病毒进入细胞后的命运.因此对单纯疱疹病毒的立即早期基因的定位、命名、翻译后修饰以及对其产物功能的分析对该病毒的分子生物学的病理学研究具有重要的意义.
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轮状病毒NSP5和NSP6在感染过程中的作用
轮状病毒(RV)是婴幼儿胃肠道疾病的主要病原体,RV基因组由11个分节段的双链RNA组成,分别编码6个结构蛋白和6个非结构蛋白,其中第11基因片段编码NSP5和NSP6两个非结构蛋白.NSP5蛋白较大,含200个氨基酸,分子量约为21Kd.NSP5在病毒感染细胞中以二聚体形式存在,是一个高度磷酸化的蛋白,可与RV其它非结构蛋白或结构蛋白相互作用,具有RNA结合活性,在病毒复制过程中主要通过与NSP2的一系列相瓦作用发挥功能.基因11编码的另一个蛋白是NSP6,大多数RV中NSP6由92个氨基酸组成,分子量约为11Kd.并非所有RV毒株都有NSP6编码区,如Mc323和512C毒株.NSP6在病毒感染细胞中表达量很低.目前,关于NSP6的性质,在细胞中的定位以及在病毒复制过程中的作用研究较少.NSP5和NSP6由同一基因片段编码,对它们的结构和功能及其相互间的关系研究还不多.本文对NSP5和NSP6在RV复制过程中的研究作简要综述.
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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A的研究进展
对丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A的研究表明,NS5A在HCV转录、复制及细胞信号转导中有重要作用.NS5A影响干扰素(IFN)治疗丙型肝炎的疗效,但日本和欧洲对这方面的研究结果间存在差异,现就这方面的进展作一综述.
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丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶及抑制剂研究进展
丙型肝炎病毒(heptitis cvirus,HCV)丝氨酸蛋白酶(serine protease)是催化病毒前体蛋白中非结构蛋白部分裂解的关键蛋白酶.对病毒复制和宿主细胞都有重要作用,是当前抗病毒研究的一个重要靶点.本文从丝氨酸蛋白酶结构、功能和抑制剂等三方面,介绍丝氨酸蛋白酶的研究进展,这对该酶抑制研究和丙型肝炎的治疗研究会有积极意义.
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丙型肝炎病毒非结构蛋白4B研究进展
丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)是至今为止功能尚不明确的HCV非结构蛋白,近年来的研究表明其定位于内质网膜,与细胞内膜结构的功能有关.在体外实验中,它和NS4A一起可以抑制宿主细胞的翻译;在一定程度上可以减弱机体对抗病毒药物干扰素-α(INF-α)的反应,同时使病毒可以逃避宿主对病毒的免疫;在HCV病毒的致瘤性方面亦有重要作用.可以与NS3、NS4A、NS5A、NS5B等相互作用,对其它非结构蛋白的功能起协同、促进甚或是下调作用.
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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3的研究进展
丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3共有631个氨基酸组成,具有丝氨酸蛋白酶和三磷酸核苷酶(NTPase)和螺旋酶(Helicase)的功能,在HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥重要作用.非结构蛋白NS3具有较强的免疫原性和抗原性,是检测HCV感染的主要抗原之一.近年的研究发现NS3内部的裂解产物更具有致癌潜能.此外,NS3蛋白还参与NS5A的超磷酸化修饰过程等.
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云南边境地区登革1型病毒非结构蛋白编码区序列测定及进化分析
登革病毒有4个血清型,可引起登革热和登革出血热/登革休克综合征.登革病毒包括5'和3'非编码区(UTR)及一个单一的开放阅读框(ORF),该ORF编码一个聚蛋白前体,经蛋白酶裂解加工成3种结构蛋白(C、PrM和E)和7种非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)[1].
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湖北荆州地区A组轮状病毒G血清型分布情况调查
轮状病毒归属呼肠病毒科,系dsRNA病毒,基因组包含11个节段的dsRNA,分别编码6种结构蛋白和5种非结构蛋白.依抗原性不同区分病毒血清型称G型,至今已确定14种G血清型,其中10种可感染人,以G1-G4在人群中占优势[1-3].近年来世界各地有关轮状病毒G血清型的流行规律与以往有所变化,因此给疫苗的研制与使用带来新的挑战[4].国内对轮状病毒分子流行病学的资料多来自北方地区,湖北荆州地区尚未报道.本实验就湖北荆州地区腹泻儿童轮状病毒感染株G血清学的分子流行病学作研究,为国内轮状病毒的预防提供理论依据.
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人类肠道病毒68型3A蛋白可溶区的表达及其结构初步研究
为了解人类肠道病毒68型3A蛋白可溶区的结构,本研究构建了EV-D68 3A蛋白可溶区的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化并对其结构进行了初步研究.首先,采用PCR的方法扩增EV-D68 3A(1~61)基因片段,克隆至原核表达载体pET-28a-His-SUMO中,转化进入BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达出His-SUMO-3A(1~61)融合蛋白.经Ni NTA树脂亲和层析初步纯化后得到大量融合蛋白,利用ULP酶酶切去除His-SUMO标签,通过Ni-NTA树脂亲和层析、阴离子交换层析柱、分子筛层析等方法分离标签并进一步纯化目的蛋白.后通过化学交联反应检测目的蛋白的多聚化状态.结果显示,利用pET28a-His-SUMO-3A(1~61)原核表达载体能够在大肠杆菌中成功表达出大量可溶性的融合蛋白;经过多步纯化方法得到了大量高纯度的目的蛋白,平均每升大肠杆菌可得到约5mg目的蛋白,纯度达95%以上;通过化学交联反应证明了该蛋白的多聚化存在形式.本研究成功建立了EV-D68 3A蛋白可溶区的表达和纯化系统,为进一步获得3A蛋白晶体、研究3A蛋白功能以及设计以3A为靶点的抗病毒药物奠定了基础.
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稳定表达呼吸道合胞病毒非结构蛋白NS1细胞的构建及其生物特性研究
获得稳定表达RSV病毒NS1基因的HEp-2-NS1细胞株并对其生物学特性进行初步研究.采用RT-PCR方法从RSV病毒中获得NS1全长基因,克隆到逆转录病毒载体pBABE-puro中,重组载体与包装质粒PIK通过磷酸钙共沉淀法转染包装细胞293FT细胞,产生的逆转录病毒颗粒感染HEp-2细胞,经嘌呤霉素筛选后得到稳定表达细胞株,用QPCR、细胞病变染色法、RT-PCR和间接免疫荧光法检测细胞中NS1 mRNA和蛋白表达情况.结果表明重组逆转录病毒载体pBABE-NS1经双酶切及测序鉴定正确;筛选获得5株阳性单克隆细胞株,QPCR结果显示HEp-2-NS1细胞有NS1基因扩增,其中d株的相对表达量是正常细胞对照组的8 483倍;在外源干扰素作用下,HEp-2-NS1细胞仍对VSV病毒保持敏感,细胞感染病毒48h后染色结果显示全部死亡;对第3代及第30代细胞的RT-PCR和间接免疫荧光法检测结果显示,导入的NS1基因在HEp-2细胞中不仅能转录成相应的mRNA而且能成功稳定地表达.成功构建了稳定表达RSV病毒非结构蛋白NS1的HEp-2-NS1改造细胞株,为建立适用于临床分离的转基因细胞提供良好的基础.
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RNA病毒RNA依赖的RNA聚合酶的结构与功能
RNA病毒一般传播迅速,给人类和自然造成巨大危害和威胁.许多RNA病毒的结构蛋白在基础研究和应用方面已日趋完善.相比之下,就非结构蛋白(NS)所做的研究较少,存在许多未知问题.在这些非结构蛋白中,病毒自身编码的RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)对病毒的复制起关键作用.对RdRP的研究不仅使对病毒RNA复制的机制更精细明了,且有可能提供新的抗病毒靶标和诊断试剂.本文对RdRP特别是动物RNA病毒RdRP的结果与功能作一综述.
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人星状病毒非结构蛋白C末端nsP1a/4蛋白6种删除突变体的构建与表达分析
星状病毒(Human astrovirus,HAstV)是通过引起小肠上皮细胞凋亡从而导致婴幼儿腹泻的重要病原体.课题组前期研究表明HAstV非结构蛋白nsP1a C末端蛋白nsP1a/4是诱导凋亡的主要功能性蛋白,可能含有与凋亡相关的重要结构域.为了探索nsP1a/4蛋白中的凋亡结构域,本研究采用绿色荧光蛋白真核表达载体,根据nsP1a/4蛋白功能性结构域的位置,选择不同的删除位点,构建nsP1a/4蛋白及不同结构域删除的nsP1a/4蛋白突变体,并将其转染BHK21细胞,在转染的24~72h检测重组蛋白在细胞内的表达并进行初步分析.结果显示,24h后荧光显微镜下可观察到融合nsP1a/4蛋白和其突变体的绿色荧光.Western blot分析结果显示7种融合蛋白均能在体外细胞中高效表达,72h表达量明显高于48h.这些结果表明我们构建的nsP1a/4蛋白及其删除突变体可在BHK21细胞中表达,可用于HAstV非结构蛋白nsP1a/4的凋亡结构域研究,从而为进一步研究HAstY分子致病机制提供研究平台.
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甲型流行性感冒病毒NS蛋白研究进展
甲型流行性感冒(流感)病毒基因组由8个分节段的负链RNA组成,共编码10种蛋白,其中在病毒复制的早期即有NP蛋白和NS1蛋白的大量表达,提示这两种蛋白在病毒复制过程中及与细胞蛋白的相互作用中发挥着重要的功能.RNA第8节段编码两种蛋白,即非结构蛋白1(NS1)和2(NS2).
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登革基因疫苗研究进展
登革热是由登革病毒引起的一种严重的虫媒病毒性传染病[1].登革病毒属于黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus),其基因组为单股正链RNA,长约11kb,共编码3种结构蛋白(C、prM、E)和7种非结构蛋白(NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b、NS5)[2].
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凋亡素选择性抗肿瘤的分子机制
凋亡素(apoptin)是一种来源于鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)的小分子量蛋白.CAV是一种无囊膜的DNA病毒,其基因组为2300 bp的单链环状DNA分子,含有3个完全或部分重叠的开放读码框,分别编码3个蛋白质:VP1、VP2和VP3[1].VP1为主要的衣壳蛋白,相对分子质量51 600.VP2为非结构蛋白,相对分子质量24 000,其具有双重性质的磷酸酶活性并且主要与VP1相互作用.VP1与VP2为CAV复制所必需[2].VP3亦称为凋亡素,相对分子质量13 600,能选择性诱导多种肿瘤细胞凋亡,如骨肉瘤、肝癌、黑色素瘤、肺癌、前列腺癌等,而不杀伤正常细胞[1,3-5].
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SFTS病毒非结构蛋白重组质粒的构建及其体液免疫原性研究
目的 研究SFTS病毒(SFTS virus,SFTSV)的非结构蛋白(Nonstructural proteins,NSs)重组质粒的体液免疫原性.方法 利用聚合酶链反应法(Polymerase chain reaction,PCR)构建真核表达质粒pJW4303-NSs、pJW4303-NSs-opt、pJW4303-NSs-Flag;引入Nhe Ⅰ酶切位点及tPA(Tissue plasminogen activator,tPA)信号肽,构建质粒pJW4303-tPA-NSs-opt.将质粒转染至HEK 293T细胞,蛋白质印迹法(Western blot,WB)验证NSs表达.NSs相关质粒免疫BALB/c小鼠,采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测SFTSV NSs特异性IgG抗体.结果 成功构建了重组NSs质粒,WB验证了NSs可在HEK293T细胞内表达.pJW4303-NSs、pJW4303-NSs-opt、pJW4303-tPA-NSs-opt重组质粒均可诱导小鼠体内产生特异性IgG,其中单优化型质粒pJW4303-NSs-opt的免疫原性较好,在第6、8周的IgG水平显著高于野生型NSs质粒,差异具有统计学意义.结论 本研究构建的SFTSV的NSs重组优化型质粒具有良好体液免疫原性,其中单优化型效果佳.
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检测人APOBEC3G与HIV-1病毒感染因子的新方法及原理
自2002年人APOBEc3G蛋白被发现以来,HIV-1 Vif与人APOBEC3G已作为抗HIV-1药物新的治疗靶点被越来越多的抗AIDS研究人员所关注.在抗HIV治疗日趋困难的今天,人们希望从这个HIV-1的非结构蛋白和与它相对的人内源性保护因子中找到答案.新的检测Vif与APOBEc3G相互作用的方法则为找到答案提供了更快、更准确的技术手段.
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登革病毒毒力研究进展
登革病毒(Dengue Virus,DV)是一类有包膜的单股、正链RNA病毒,基因组10~11kb,编码3种结构蛋白(C,PrM和E)和7种非结构蛋白(NS1,NS2a,NS2b,NS3,NS4a,NS4b和NS5)。自然界存在的登革病毒有四种血清型,均可引起温和的登革热(DF)和严重的致死率很高的登革出血热(DHF)、登革休克综合征(DSS),而关于DF至DHF/DSS的发病机理迄今尚未阐明。近年来强毒力病毒理论〔1〕开始获得一些直接证据,越来越受到研究者的重视,该理论认为DHF/DSS的发生是受一种毒力更强的登革病毒株的感染。随着DNA测序技术的发展,登革病毒毒力的研究正进入一个新时期。