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3C蛋白酶及抑制剂研究进展
3C蛋白酶是催化小RNA病毒前体蛋白中非结构蛋白部分裂解的关键蛋白酶,对病毒的复制有着重要作用,是当前抗病毒研究的一个重要靶点.本文简要概述了3C蛋白酶的结构、功能和抑制剂的研究进展,对该酶的抑制研究和相关病毒的治疗有积极意义.
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丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶及抑制剂研究进展
丙型肝炎病毒(heptitis cvirus,HCV)丝氨酸蛋白酶(serine protease)是催化病毒前体蛋白中非结构蛋白部分裂解的关键蛋白酶.对病毒复制和宿主细胞都有重要作用,是当前抗病毒研究的一个重要靶点.本文从丝氨酸蛋白酶结构、功能和抑制剂等三方面,介绍丝氨酸蛋白酶的研究进展,这对该酶抑制研究和丙型肝炎的治疗研究会有积极意义.
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国产裂解流行性感冒疫苗的安全性和免疫原性观察
为了评价国产裂解流行性感冒疫苗(御感宁)人群接种的安全性和免疫效果,于2003年 10~11月对该疫苗进行了安全性及免疫原性研究.
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兔创伤性骨性关节炎软骨细胞中基质金属蛋白酶13表达增加
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)在创伤性关节炎软骨破坏的病理过程中起重要作用.其中MMP-13是唯一能够裂解胶原分子中三维螺旋结构的酶,对胶原具有特异性,是目前在软骨破坏中研究较多的胶原酶指标.本实验建立兔创伤性骨性关节炎模型,取膝关节软骨细胞消化后,在细胞水平检测MMP-13的mRNA和蛋白表达情况,为下一步以软骨细胞为目标进行RNA干扰(RNA interference,RNAi)研究提供实验基础.
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细胞内源性溶酶体脂质裂解被巨噬细胞替代性激活所必需
白介素4(IL-4)能驱使巨噬细胞的替代性(M2型)激活方式,激活的M2型巨噬细胞在对抗寄生虫免疫,伤口愈合、动脉粥样硬化以及代谢稳态中起着重要作用。已知巨噬细胞的M2型极化过程是依赖于脂肪酸来维持线粒体的氧化磷酸化,但支持这一代谢过程的脂肪酸的来源依然不清楚。
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人巨细胞病毒与大肠癌相关关系的研究
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)与宫颈癌关系十分密切,但与大肠癌关系的报道较少。本文就HCMV感染及大肠癌p53基因与HCMV感染的相关性进行了研究。 1 材料和方法 1.1 标本来源 收集1994年~1996年白求恩医科大学中日联谊医院外科切除大肠癌组织共60例,存放于-80℃。均经病理证实,并结合临床进行了Dukes分期和组织分化程度分型。患者年龄在38~72岁之间,男42例,女18例。 1.2 DNA模板制备取-80C冻存组织约1 g,经组织研磨器研磨,加入1mlDNA裂解缓冲液置55℃ 1 h,95C 15mmin,经13 000 r/m min离心10 min,上清即为DNA模板。再0.8%~1%低电渗琼脂糖凝胶电泳,以排除降解的模板。
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流式细胞术用于细菌抗生素敏感性试验的初步探索
大肠埃希菌ATCC25922、临床分离头孢噻肟(CTX)敏感大肠埃希菌7771、7880、CTX耐药大肠埃希菌7992与浓度范围为(0.015~128)μl/ml的CTX于35℃孵育2?h后,用碘化丙啶(PI)标记上流式细胞仪检测.在一系列药物浓度作用下,各菌株的碘化丙啶荧光强度(MFI)随着药物浓度的升高呈现递增的变化趋势,但是,当抗生素浓度过高,如大于其小抑菌浓度(MIC) 8倍时,菌细胞门所占比例将明显减少,MFI值也会显著下降,表明在高浓度抗生素持续作用下,较多细菌死亡后,菌细胞被裂解.
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反式作用丁型肝炎病毒核酶体外切割活性的研究
丁型肝炎病毒(HDV)在复制过程中,基因组RNA及复制产生的抗基因组RNA均具有自我裂解的活性--核酶(Ribozyme)活性.HDV核酶是在所发现的核酶类型中唯一在人体的细胞中具有天然裂解活性的核酶.通过对HDV核酶的研究,已经确定了85nt长度的核酶活性区,并且其二、三级结构也有了阐明.本文根据Anne T等人提出的HDV核酶自我裂解时的假结样(pseudoknot-like)二级结构,将85nt的HDV核酶从其J(1/2)连接处分成两段,一段作为核酶,一段作为底物,设计HDV核酶的反式作用形式;将反式作用HDV核酶的基因重组入载体.
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人免疫球蛋白转基因小鼠自身免疫性重症肌无力模型的建立
重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是由乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AchR) 抗体介导的自身免疫病.AchR抗体与神经肌肉接头处的AchR结合,通过抗原调变、激活补体导致突触后膜裂解而使AchR数量减少,结果出现肌肉收缩无力等症状.MG的动物模型--实验性自身免疫性MG(experimental autoimmune MG,EAMG)可经主动免疫动物富含AchR的电鳐(Torpedo)电器官制备的AchR(tAchR)诱导出.
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比较以凋亡肿瘤细胞和肿瘤细胞裂解物制备疫苗的效果
目的在肿瘤DC疫苗的研究当中,探讨佳的抗原负载DC细胞的方式.方法采用137Cs照射处理后凋亡的肿瘤细胞、丝裂霉素(MMC)处理的凋亡肿瘤细胞、反复冻融肿瘤细胞的裂解物3种方法制备肿瘤抗原后负载DC细胞,再分别诱导T淋巴细胞.采用胞内染色法检测T细胞活化情况,LDH法检测T细胞的杀伤活性.结果照射、MMC诱导细胞凋亡以及裂解细胞提取蛋白3种方法制备的肿瘤抗原,分别负载DC后诱导T细胞,T细胞对特异性靶细胞的杀伤活性分别为47.31±4.89、41.65±4.08、38.91±3.55,照射组高于MMC组及裂解组(P<0.05),其余各组间差异无统计学意义(P>0.05);3组CD4+/IFN-γ+分别为1.85±0.37、1.37±0.37、1.24±0.32(n=5,P=0.044),照射组和MMC组明显高于裂解组,而照射组与MMC组差异无统计学意义(P=0.072).CD8+/IFN-γ+分别为1.42±0.23、1.13±0.19、1.08±0.19(n=5,P=0.043),照射组明显高于裂解组(P=0.0001),其余各组间差异无统计学意义(P>0.05).结论本研究显示凋亡的肿瘤细胞产生的杀伤能力以及T细胞分泌IFN-γ水平要高于肿瘤细胞裂解物,其中137Cs照射处理方法经比较为较佳的肿瘤疫苗形式.
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凝血酶受体检测方法的建立
凝血酶受体(TR)是G-蛋白偶连受体家族中的一个重要成员,在血小板、血管内皮细胞等有广泛的表达.TR被凝血酶(Ⅱa)激活引起机体凝血反应是引发以动脉粥样硬化为病理基础的人类心脑血管疾病的重要原因.在TR被Ⅱa激活时,TR氨基末端精氨酸41/丝氨酸42间裂解,释放出一含有41个氨基酸的多肽.利用此多肽,我们制备了其单克隆抗体,建立了一种检测TR的免疫酶组织化学法.
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一种从脑脊髓液中提取病毒RNA和DNA的新方法
从真核细胞中提取总RNA和DNA的方法很多[1],均需从大量细胞和大量临床样本中分离、纯化核酸.从标本中提取靶DNA或RNA的多少是聚合酶链反应(PCR)和逆转录PCR(RT-PCR)方法敏感性的关键,尤其是某些感染性疾病早期标本中只有微量病毒分子时更是如此.因此,许多新方法和传统方法经修改后[2~5]都致力于病毒滴度很低的临床小样本的检测.本实验应用单一异硫氰酸胍裂解缓冲液分离脑脊髓液(CSF)中的RNA和DNA,旨在建立一种适于临床小样本的有效、快速、简单的核酸提取方法.
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应用DNA探针杂交化学发光自显影检测结核分枝杆菌
本研究建立了一种无需聚合酶链反应(PCR)扩增将一种新的裂解液与DNA探针、化学发光自显影优化组合成一个整体,,具备高敏感度和高特异性的检测结核分枝杆菌的新方法.该法操作简便、经济,适用于常规检测.报告如下.一、材料和方法1.仪器:TGL-16G型台式离心机,AG9600型PCR仪和DYY34型电泳仪.
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角膜炎常见致病真菌DNA快速提取方法的探索
近年来我国真菌性角膜炎的发病逐年上升,聚合酶链反应(PCR)技术为真菌病原体检测提供了一条快速、敏感的诊断方法. 真菌细胞壁较厚不易裂解,传统的DNA提取因其繁琐而成为该技术应用于临床的障碍.本实验使用几种不同的裂解液提取常见角膜致病真菌DNA,并将结果进行比较分析.
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两种浓度的二硫苏糖醇对抗体区分试验结果的影响
对新生儿溶血病及同种抗体检测,抗体区分试验是必不可少的.运用巯基类试剂可裂解IgM分子的二硫键,使其失去原有的血清性质,来检测共存的IgG抗体.观察抗体用巯类试剂处理前后的活性,对于免疫球蛋白性质的确定非常重要[1].目前经典方法之一采用0.01 MDTT(二硫苏糖醇)溶液处理血清标本.但该浓度的试剂在某种情况不能使IgM分子完全降解,直接影响免疫球蛋白性质的确定.为此,我们对单位时间内不同浓度的试剂(0.01 mol、0.02 mol)对IgM抗体破坏结果及各项指标进行了比较,旨在探讨试剂浓度与IgM抗体的关系.
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Caspase与病毒感染关系研究进展
Caspase(cysteinyl aspartate specific proteinase)是一类特异性裂解天门冬氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶大家族,它是各种生理和病理的刺激下引起细胞凋亡进入终末途径的始动子和执行者.本文就Caspase的生物学特性以及与病毒感染的关系作一综述.
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肝素酶:抗肿瘤转移的新靶点
肝素酶(hpa)是裂解硫酸乙酰肝素蛋白多糖的惟一酶类,能破坏细胞外基质及基底膜,并参与肿瘤血管生成,与肿瘤的侵袭转移密切相关.hpa也由此逐渐成为引人注目的抗肿瘤治疗新靶点,其抑制剂的研制可望为抗肿瘤治疗开辟新的途径.本文综述了hpa的结构与功能,对肿瘤转移的促进作用与机制,以及hpa抑制剂作为抗肿瘤新药的新研究进展.
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乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对MAPKKK蛋白信号转导的影响
0 引言在真核细胞中,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导系统对大量的细胞内、外刺激的转导起着中枢性调节作用,从而控制细胞的生长、增生、凋亡,如进入细胞周期、控制核苷酸的生物合成、G2/M期的转变、M期高尔基体的裂解和纺缍体的形成等[1].
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钙信号转导与急性胰腺炎
急性胰腺炎(AP)是胰腺腺泡细胞内胰蛋白酶原激活引起细胞自溶的过程.它的早期病理改变包括:胰腺腺泡细胞内酶原激活,细胞骨架裂解,分泌极性丧失,酶原空泡形成[1].这些病理改变均以细胞内Ca2+浓度异常增高为前提,应用Ca2+螯合剂能够抑制Ca2+浓度增高和胰蛋白酶原的激活.
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NT-proBNP在急诊危重病中的诊断价值
脑钠肽(B-type-Natriuretic Peptide, BNP)由日本学者Sudoh等于1988年首先在猪脑中发现[1],而Hunt等[2]在1995年第一次对N-端脑钠肽前体(N-terminal-pro-BNP,NTproBNP)进行了描述.BNP主要由左心室分泌,在心肌细胞受到容量负荷和压力负荷增高时,非活性前体Pro-BNP裂解为活性BNP和非活性的NT-proBNP[3].