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丙戊酸钠治疗儿童癫痫的血药浓度监测及其临床意义
丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)为儿童常用抗癫痫药物之一,是一种不含芳香环又不含氮原子广谱抗癫痫药.丙戊酸钠对各型癫痫发作均有效,特别对失神小发作、强直一阵挛发作和肌阵挛发作疗效显著,常作为儿童治疗失神小发作的首选药物,患者需长期服药,VPA的有效血药浓度范围是50~100 mg/L,癫痫患者口服后吸收及代谢存在较大个体差异,疗效和不良反应与服药剂量相关性较差,但与血药浓度相关性较高[1].
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瑞芬太尼靶控输注系统用于清醒镇痛的临床观察
骨科脊柱手术多采用局部麻醉,往往阻滞不全,患者痛苦较大.本研究对100例脊柱手术患者行清醒镇痛,能为患者提供满意的镇痛和舒适感,并能在术中正确执行语言命令,有关这方面的报道国内外尚少.本研究旨在为瑞芬太尼清醒镇痛所需的靶控血药浓度范围积累经验.
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快速测定白酒中甜味剂-超高效液相色谱串联质谱法可行性研究
目的:研究超高效液相色谱-串联质谱检测方法对白酒中甜味剂(安赛蜜、糖精钠、甜蜜素和三氯蔗糖)检测的可行性;方法:使用Agilent ZORBAXSB-C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm)分离,以0.1%甲酸水溶液-甲醇作为流动相梯度洗脱,在电喷雾离子源ESI负离子模式下多重反应监测(MRM)定性、定量测定甜味剂;结果:4种甜味剂在10μg/L~500μg/L浓度范围内呈现良好的线性关系(r≥0.999);检出限为0.5~2.4μg/L,加标回收率在89.4%~104.6%之间,RSD小于4%;结论:该法具有的高选择性和高灵敏度,能完全满足白酒中痕量甜味剂的快速检测要求.
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我国粮食作物中的黄曲霉毒素的研究进展
黄曲霉毒素(aflatoxin,AFT)是霉菌,有着大量的代谢产物的,多达20多种,其代谢产物对水稻、玉米、小麦等粮食作物有着很强的侵染性。这种霉变发生多发生在热带地区中,随着粮食作物出口贸易的加深,粮食作物在采收、储藏和运输的过程中,都面临着黄曲霉毒素污染的危险,这些污染对粮食作物造成不可弥补的损失。黄曲霉毒素对人体的危害作用主要包括对人体细胞的致癌作用、细胞毒性、对免疫系统的损害、肝脏细胞的毒性等有毒物质的侵害作用。寄生曲霉菌和黄曲霉菌在细菌生长过程中会产生次级代谢产物黄曲霉素M1、M2、G1、G2、B1和B2等,这些次级代谢产物都有着很强的毒性。即使在很低的浓度范围内也会对人体细胞照成很严重的影响,这种小分子物质进入人体后,由于不能被人体的免疫系统所消灭,会对人体照成很大的危害。因此,黄曲霉素在粮食作物中的检测技术有着重要的意义。
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2-10 SiO2刺激PAM上清液对Ⅰ型肺上皮细胞的增殖效应
目的探讨二氧化硅(SiO2)刺激肺巨噬细胞(PAM)上清液在Ⅰ型肺上皮细胞损伤中的作用.方法分别用体积分数为5%和10%不同剂量的SiO2刺激大鼠(SD)肺泡PAM上清液作用于貂肺上皮细胞(CCL-64),采用四唑盐(MTT)比色法测定其增殖效应.结果在0、50、100、200、500μg/m1SiO2浓度范围,5%SiO2刺激的PAM上清液引起细胞增殖,500 μg/m1剂量组(0.30±0.02)与对照组(0.26±0.04)差异有显著性,并存在剂量-效应关系(r=0.975,P<0.01).10%SiO2刺激PAM的上清液表现为细胞损伤作用,50 μg/m1剂量组(0.21±0.04)与对照组吸光度值差异有显著性.结论随着作用剂量的增加,SiO2刺激PAM分泌活性物质将加重Ⅰ型肺上皮细胞的损伤,促进矽肺纤维化的进程.
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1-12 盐酸西替利嗪对鼠伤寒沙门氏菌诱变性试验
目的检测盐酸西替利嗪对鼠伤寒沙门氏菌的诱变性.方法用鼠伤寒沙门氏菌诱变性试验标准平皿掺入法,采用TA97、TA98、TA100和TA102组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌,菌株经鉴定合格,在±S9mix条件下测试.盐酸西替利嗪5 000.0μg/皿浓度抑菌,因此,高浓度为1 000.0μg/皿.结果阳性对照敌克松在-S9mix,二氨基芴、1,8-二羟蒽醌在+S9mix条件下,能明显增加测试菌株的回变菌落数,均高于阴性对照的2倍以上,说明测试系统可靠.盐酸西替利嗪0.1、1.0、10.0、100.0和1 000.0μg/皿各浓度对4株测试菌株回变菌落数均未超过阴性对照组2倍.结论盐酸西替利嗪在0.1~1 000.0μg/皿浓度范围内对鼠伤寒沙门氏菌无诱变性.
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1-11 碱性成纤维细胞生长因子的染色体畸变试验
目的检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的致突变性.方法采用CHL细胞染色体畸变试验.bFGF大浓度为CHL细胞50%抑制浓度.在±S9mix条件下,24及48 h收获细胞做染色体畸变分析.结果溶媒、S9mix对照染色体畸变率正常,bFGF 25、50、100、200μg/ml浓度染色体畸变率为1.5%~4.5%(正常<5%).阳性对照丝裂霉素C染色体畸变率显著增高,环磷酰胺无S9mix染色体畸变率正常,有S9mix染色体畸变率显著增高,表明本试验系统可靠.结论在本试验系统条件下,bFGF在25~200 μg/ml浓度范围内未见诱发CHL细胞染色体畸变率增高.
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盐酸特拉唑嗪对仓鼠肺细胞染色体畸变试验
目的检测抗高血压药盐酸特拉唑嗪的致突变性.方法采用中国仓鼠肺(CHL)细胞体外染色体畸变试验.盐酸特拉唑嗪的大浓度为CHL细胞50%抑制浓度,再依次递减共设4个给药浓度.同时设溶剂、S9混合液阴性对照及阳性对照(丝裂霉素C).试验在±S9混合液条件下,于24及48 h,分别收获细胞做染色体畸变分析.每一试验浓度在油镜下分析100个中期分裂相细胞.结果无论是24及48 h收获细胞,溶剂、S9混合液阴性对照染色体畸变率为0~4%(正常CHL细胞染色体畸变率<5%),盐酸特拉唑嗪17.5、35.0、70.0、140.0μg/ml浓度染色体畸变率为0~3%,与阴性对照比较,差异无显著性(P>0.05).阳性对照染色体畸变率显著增高为81%和82%,与溶剂对照比较,差异有显著性(P<0.01).环磷酰胺无S9混合液染色体畸变率在正常范围(0~2)%,有S9混合液染色体畸变率显著增高为73%和84%,与S9混合液对照比较,差异有显著性(P<0.01),表明本试验系统可靠.结论在本试验系统条件下,盐酸特拉唑嗪在17.5~140.0μg/ml浓度范围内未见诱发CHL细胞染色体畸变率增高.
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用6890N/5975 inert GC/MSD进行USEPA 8270半挥发物的快速分析
用EPA方法8270分析半挥发物存在着一定困难,因为要在较宽的浓度范围内同时测定酸、碱和中性化合物.基于高效的需要,实验室需要在保证活性高化合物线性和灵敏度的前提下,使分析速度更快.6890N/5975 inert GC/MSD系统正是为满足快速分析,同时大限度降低活性并保持线性的标准而设计的.
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感耦等离子体质谱法测定家兔全血中痕量铝
血中铝(Al)的测定对临床诊治十分重要.近年来报道,血中Al的浓度范围为0.5~13.0 μg/L[1],这就要求提高测定的灵敏度和准确度.过去一般采用基体改进剂与溶剂分离萃取富集等前处理后,进行中子活化分析法、原子发射光谱法和原子吸收光谱法等仪器测定[2].这些方法测定过程较长,易引进误差和受环境污染物的干扰,影响测定数据的准确性[1].我们将感耦等离子体质谱(ICP-MS)技术应用于药物动力学实验家兔全血中Al的测定.ICP-MS技术与其他仪器分析方法相比较,具有检出限低、精密度高、选择性好、快速、准确等优点.样品前处理采用单酸消解,不须分离富集,直接测定,可较好地避免周围环境所带来的外源性污染,降低本底值.通过佳仪器参数的选择、扣除同质异序的谱线干扰、采用内标校正和标准加入法,可以降低或消除测定的干扰,得到较满意的精密度和准确度.
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流式细胞术用于细菌抗生素敏感性试验的初步探索
大肠埃希菌ATCC25922、临床分离头孢噻肟(CTX)敏感大肠埃希菌7771、7880、CTX耐药大肠埃希菌7992与浓度范围为(0.015~128)μl/ml的CTX于35℃孵育2?h后,用碘化丙啶(PI)标记上流式细胞仪检测.在一系列药物浓度作用下,各菌株的碘化丙啶荧光强度(MFI)随着药物浓度的升高呈现递增的变化趋势,但是,当抗生素浓度过高,如大于其小抑菌浓度(MIC) 8倍时,菌细胞门所占比例将明显减少,MFI值也会显著下降,表明在高浓度抗生素持续作用下,较多细菌死亡后,菌细胞被裂解.
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如何正确认识HBeAg和抗-HBe同时阳性
编辑同志:阅读<中华检验医学杂志>2008年第31卷第1期专家答疑栏目中毛远丽教授撰写的"为何在临床工作中会遇见同一份标本的对应抗原、抗体同时阳性,如何解释?"一文~[1],文中毛远丽将HBeAg和抗-HBe同时阳性仅归于检测敏感度的提高,笔者认为此说法是不全面的.被检测血清中存在高浓度的HBeAg,其浓度范围处于剂量-反应曲线的下降区域,此时可检出HBeAg.同时平行的竞争法ELISA检测抗-HBe的试验中,由于混入了含有高浓度HBeAg的中和试剂,混合样本中的HBeAg总剂量就可接近或超过高剂量钩状效应的临界浓度,出现反应信号降低或无反应信号.
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激活素A对肝星状细胞细胞外基质合成的影响
目的:探讨激活A(activin A,ACT A)对肝星状细胞(hepaficstellate cell,HSC)细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成的影响.方法:采用原位酶灌注法和密度梯度离心法分离HSC.初次传代后,HSC随机分为8组:空白对照组(A组)、ACTA1μg/L组(B组)、ACTA10 μg/L组(C组)、ACTA 100 μg/L组(D组)、TGF β110 μg/L组(E组)、ACTA 1 μg/L+TGFβ110μg/L组(F组)、ACTA 10μg/L+TGF β110 μg/L组(G组)、ACTA100μg/L+TGF β110μg/L组(H组).加药后24 h,采用放射免疫法检测培养液Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原含量及半定量RT-PCR方法测定细胞Ⅲ型胶原mRNA表达.结果:ACT A能刺激体外培养HSC分泌ECM,在一定浓度范围内(1-100μg/L)呈剂量依赖关系;100μg/LACT A刺激HSC分泌ECM的能力与10μg/L TGF-β1相当,而且ACT A能协同TGF-β1发挥这一生物学效应.结论:激活素A参与肝纤维化形成.
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丹参含药血清对肝星状细胞增生的抑制作用
目的:研究丹参含药血清对肝星状细胞(HSC)的增生抑制作用,并探讨中药抗肝纤维化筛选平台的建立.方法:测定HSC-T6细胞的细胞生长曲线和克隆形成率,观察其细胞增生状况.取原始血清体积分数的80%,40%,20%,10%,5%的丹参含药血清作用于HSC-T6细胞,观察其增生抑制效应及量效关系.结果:HSC-T6细胞的细胞群体倍增时间为10.57 h,克隆形成率为82.4%,说明该转化细胞系的活力较好,增生能力较强.在5-80%浓度范围之内,丹参含药血清抑制HSC细胞增生作用呈剂量依赖性(经直线回归分析,相关系数r=0.9487).结论:丹参含药血清能明显抑制HSC-T6细胞增生,呈剂量依赖性.
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苯丙素甙对MKN45细胞端粒酶活性的抑制机制
目的:探讨苯丙素甙对肿瘤细胞端粒酶活性的调控作用.方法:应用端粒酶PCR ELISA法,Sourthern blot杂交及流式细胞技术对苯丙素甙(verbascoside)在体外作用MKN45细胞的端粒酶活性、端粒长度及细胞周期进行检测分析.结果:苯丙素甙在一定浓度范围内(12.5-27mg@L-1)抑制端粒酶活性,但不能直接抑制细胞上清中的端粒酶活性.用端粒酶半抑制浓度剂量作用细胞后,细胞出现端粒长度缩短(约1.1 kb)、G1亚u倍体峰(0.25)及G2/M阻滞(0.08).结论:苯丙素甙诱导肿瘤细胞分化、凋亡可能是受端粒-端粒酶-细胞周期的依赖性调节,提示端粒酶抑制、端粒缩短及G2/M阻碍滞可作为肿瘤抑制靶向筛选的重要指标.
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胆囊收缩素受体在胰腺癌细胞中的表达及胆囊收缩素对胰腺癌细胞周期的影响
目的:观察胆囊收缩素受体(CCKR)在人胰腺癌细胞株SW1990中的表达及胆囊收缩素(CCK)-8肽对胰腺癌细胞周期的影响.方法:应用RT-PCR方法检测人胰腺癌细胞株SW1990中胆囊收缩素受体(CCKR)mRNA的表达,细胞化学法检测SW1990细胞中胆囊收缩素受体(CCKR)蛋白水平的表达,流式细胞仪检测不同浓度的CCK-8肽对SW199细胞周期的影响.结果:在人胰腺癌细胞株SW1990中不表达CCK-A亚型受体,但表达CCK-B亚型受体;CCKR在癌细胞株SW1990中的表达主要位于细胞膜上,细胞浆内也可见.在10-8g/L-10-5g/L浓度范围内,CCK-8肽促进SW1990细胞的增殖,呈剂量依赖性,细胞周期分析发现S期细胞增加,G2/M期细胞减少.结论:CCKB受体在人胰腺癌细胞株SW1990中表达,CCK-8肽能促进SW1990细胞的增殖,抑制细胞的凋亡,CCK通过CCKR在胰腺癌细胞的增殖中发挥重要作用.
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奥曲肽对人胃癌细胞株SGC-7901生长和凋亡的影响
目的:研究生长抑素类似物奥曲肽对人胃癌细胞株SGC-7901生长和凋亡的作用.方法:取人胃癌细胞株SGC-7901,体外培养后以处于对数生长的细胞制成单细胞悬液,加入不同浓度的奥曲肽,以MTT法进行细胞增生试验,并以不含药物的培养液为阴性对照;通过HE染色和电子显微镜观察细胞形态,通过流式细胞仪测定SGC-7901细胞周期和凋亡率.结果:奥曲肽在一定浓度范围内(160-480 mg/L)对sGC-7901细胞的生长具有抑制作用(与对照组比较,均P<0.001),并存在量效关系和饱和性,大抑制率为25.4%(奥曲肽浓度400 mg/L).奥曲肽可诱导SGC-7901细胞凋亡,HE染色见奥曲肽作用48 h,细胞开始出现凋亡的形态学改变,72 h凋亡细胞明显增多,电镜下见有典型的凋亡小体出现.流式细胞仪分析可见Gl峰前出现亚二倍体峰,凋亡率为9.42±5.29%(P<0.05).结论:奥曲肽在体外能抑制人胃癌细胞株SGC-7901细胞的生长,其作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关.
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双单抗夹心ELISA方法检测血浆及组织中金葡菌肠毒素B
目的:细菌学研究表明,可溶性外毒素的产生是革兰阳性菌(G+菌)感染的重要标志之一,在G+菌感染性疾病的发生、发展中具有重要意义.其中金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)肠毒素和中毒性休克毒素-1(TSST-1)因其"超抗原"特性,以及它们在脓毒症和中毒性休克综合征中的特殊意义而倍受关注.本文建立了一种敏感、快速的酶免疫测定方法,用于定量检测动物体液及组织中金葡菌肠毒素B(SEB).方法:采用生物素-链亲素系统放大的双抗体夹心酶联免疫吸附方法,以SEB单抗1D2为包被抗体、生物素标记的另一种SEB单抗2D1为标记抗体进行测定.结果:在0.039~10.000μg/L浓度范围内将SEB标准品进行倍比稀释,平行测定4次.当SEB标准品浓度为0.039μg/L时,测得的平均A值仍明显高于阴性对照(分别为0.193和0.108).若以样品A值/阴性对照A值大于2(P/N>2)作为阳性判断标准,则低检出限为0.078μg/L(A=0.220).在0.078~10.000μg/L的浓度范围内,SEB标准品浓度与吸光度值线性关系良好,相关系数为r=0.9906,平均变异系数为5.32%.为了考察方法的精确度,在标准曲线适用的范围内选择3个SEB浓度(10.000μg/L、5.000μg/L和2.500μg/L),每个浓度重复测定4次,变异系数分别为6.82%、5.25%、和3.90%,平均变异系数为5.32%.回收实验显示,正常大鼠、家兔和人血浆中的平均回收率分别为96.43%、97.34%和19.99%,正常人尿液中平均回收率为91.53%.上述结果表明该方法准确性较高,可用于定性及定量检测动物血浆及人尿液中的SEB.结论:本法灵敏度高、准确性好、稳定性强,而且简便、快速,适用于动物血浆及组织中微量SEB的定量测定,并有一定的临床应用前景.
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低氧对组织工程研究中间充质干细胞培养的影响
是维持生命必不可少的物质.人体正常组织和组织间隙中的氧分压为24-66 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),即3%~9%(体积分数,下同)[1],骨髓腔内的氧分压为8-56 mm Hg(1%-7%)[2].而目前细胞体外培养环境的氧分压通常为159 mm Hg,即氧浓度约为21%.Papandreou等[3]认为外界氧供和细胞的氧需应维持平衡,从而保证细胞的良好生长环境.Morrison等[4]认为在绝大多数的组织培养中,3%~6%的氧浓度更接近生理学浓度范围.
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新生儿Fanconi Ⅱ综合征一例
患儿女,26天.因发现尿蛋白阳性10余天入院.患儿系第一胎第一产,胎龄41周,自然分娩,生后无窒息.生后15 d因"高胆红素血症"在当地住院治疗,其间多次查尿蛋白均为阳性至今未转阴.出生体重3.55 kg,其母孕期无合并症及用药史,未接受放射线.入院查体:体重3.5 kg,发育营养差,神志清,精神反应差.双眼睑无水肿,口唇略樱桃红色,呼吸平稳,心肺(-),腹软,肝脾不大,双下肢无水肿.实验室检查:尿蛋白+++ 尿糖+++.入院诊断:先天性肾病?入院后反复查尿常规共10余次,结果为:尿蛋白++~+++,尿糖++~+++.血化验检查:血浆总蛋白57 g/L、白蛋白36 g/L、球蛋白21 g/L、谷丙转氨酶38 Iu/L,胆固醇3.49 mmol/L、肌酐85 μmol/L 尿素氮4.0 mmol/L 均正常.血生化检查:血钾3.54 mmol/L 钠: 140.90 mmol/L 氯化物:111.90 mmol/L.二氧化碳结合力15.80 mmol/L. 糖:4.8 mmol/L.一次性尿蛋白(尿蛋白/肌酐)为0.08.尿β2微球蛋白>2 500(正常10~154 ng/ml),血β2微球蛋白9 049(正常1 440~2 018 ng/ml).B超:右肾4.8 cm×2.5 cm, 左肾5.4 cm×2.7 cm,实质回声均匀.CDFI示:双肾血流未见异常.双膝关节X线正位片示双侧股骨下端、双胫骨下端呈"喇叭口"样改变.氨基酸尿测定为数种氨基酸尿中排泄量普遍超出正常浓度范围.诊断:Fanconi Ⅱ综合征.住院16 d,自动出院.患儿现已9个月,目前身高65 cm,体重8 kg,较正常婴儿发育落后.因出院后经常感冒,未到医院进行血、尿等化验检查.