首页 > 文献资料
-
家蝇幼虫血细胞荧光染色法的形态观察
目的 用荧光染色法结合相差显微镜观察家蝇3龄幼虫血细胞的形态、分类.方法 应用吖啶橙和碘化丙啶对家蝇3龄幼虫血细胞进行染色,荧光显微镜结合相差显微镜观察血细胞形态特征并进行分类.结果 (1)家蝇3龄幼虫血细胞可分为原血胞、浆血胞、粒血胞、珠血胞、类绛血胞5类.其中浆血胞又分为大核浆血胞和小核浆血胞2种.(2)家蝇幼虫原血胞在相差显微镜下容易辨认,通过荧光染色后特征不显著.(3)家蝇幼虫粒血胞与大核浆血胞、珠血胞与小核浆血胞在相差显微镜下容易混淆,但在荧光显微镜下很好区分.结论 用荧光染色法结合相差显微镜能揭示未知的昆虫血细胞特征,并能正确地将家蝇3龄幼虫血细胞分为5类.
-
流式细胞术用于细菌抗生素敏感性试验的初步探索
大肠埃希菌ATCC25922、临床分离头孢噻肟(CTX)敏感大肠埃希菌7771、7880、CTX耐药大肠埃希菌7992与浓度范围为(0.015～128)μl/ml的CTX于35℃孵育2?h后,用碘化丙啶(PI)标记上流式细胞仪检测.在一系列药物浓度作用下,各菌株的碘化丙啶荧光强度(MFI)随着药物浓度的升高呈现递增的变化趋势,但是,当抗生素浓度过高,如大于其小抑菌浓度(MIC) 8倍时,菌细胞门所占比例将明显减少,MFI值也会显著下降,表明在高浓度抗生素持续作用下,较多细菌死亡后,菌细胞被裂解.
-
两种荧光染料-CFSE与碘化丙啶染色方法检测细胞杀伤能力
细胞杀伤能力在评估细胞毒T细胞(CTL)及NK细胞的杀伤能力中起到重要的作用.我们采用两种荧光染料染色的方法检测脾细胞对同种异体细胞的杀伤能力.将实验小鼠分为4组,见表1.
-
单一检测体系内外周血白细胞凋亡相关指标Annexin-V、PI的时相变化特征
目的 综合分析外周血白细胞凋亡相关检测指标Annexin-V、PI的时相变化特征.方法 采用直接沉降-CD45/Annexin-V/PI法在单一检测体系内同时检测体外不同时相外周血粒细胞、单核细胞、淋巴细胞凋亡,分析其凋亡特征.结果 (1)体外0.5 h时,三类细胞Annexin-V阳性率从高到低依次为单核细胞、粒细胞、淋巴细胞,其差异具有统计学意义(H=25.055,P<0.001);PI阳性率依次为粒细胞、单核细胞、淋巴细胞,其差异具有统计学意义(H=18.762,P<0.001).(2)随着时间的延长,各类细胞的Annexin-V阳性率均逐渐上升,特别是单核细胞、粒细胞在6 h检测结果显示大多数细胞Annexin-V阳性(>60%);PI阳性率随着时间的延长也呈升高态势,粒细胞、单核细胞PI阳性率在3 h内上升缓慢,但6 h时,变化增大;(3)无论0.5 h,还是6 h,三类细胞Annexin-V阳性率均明显高于PI阳性率,差异具有统计学意义(P<0.001).结论 外周血粒细胞、单核细胞、淋巴细胞凋亡各有其特点,在设计外周血白细胞凋亡相关研究方案时应考虑其不同凋亡特点,以得到准确、敏感的结果.
-
TUNEL与碘化丙啶双染检测耳蜗毛细胞的损伤
目的应用TUNEL与PI(碘化丙啶)双染法检测耳蜗毛细胞损伤.方法听力正常豚鼠经庆大霉素致聋后,做耳蜗基底膜铺片,用TUNEL与PI双染检测耳蜗毛细胞损伤的情况.结果在核固缩、核碎裂及部分核肿胀的细胞中TUNEL染色为阳性,细胞核正常及部分核肿胀的细胞中TUNEL染色为阴性.所有有核细胞均能被PI染色.结论通过TUNEL与PI双染可以确定TUNEL染色为阳性的细胞为凋亡的细胞,而核肿胀的细胞中TUNEL染色为阴性者可能为胀亡细胞.
-
PI三步法DNA定量检测技术
DNA定量检测技术是根据细胞周期中不同时相DNA含量的变化来检测细胞周期中G0/G1、S及G2/M各时相的细胞比例,在临床肿瘤诊断和医学科研中都有重要作用.本文介绍了一种简便实用的碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色方法,同时对染色中容易忽视的技术细节提出了一些规范性的建议.
-
两种碘化丙啶染色 DNA 定量方法检测 HL-60细胞凋亡结果的比较
碘化丙啶(propidium iodide,PI)是插入性核酸染料,直接插入双链核酸的2个碱基对之间,每5个碱基插入1个荧光分子,与核酸的结合均匀、稳定。细胞经过 RNA 酶处理后,PI 可以与细胞内 DNA 特异性结合,在流式细胞仪上经488 nm 激光激发,发出峰值610~620 nm 的荧光,可以准确的反映细胞群体中DNA 含量的分布情况,适用于 DNA 定量检测。根据细胞周期中不同时项 DNA 的变化来检测细胞周期中DNA 合成前期( G0/ G1期)、 DNA 合成期( S 期)与DNA 合成后期(G2期)各时项的细胞比例。因为 PI是适用于所有流式细胞仪的染料,这一染色技术在临床肿瘤诊断和医学科研中被普遍的采用,常规使用的染色方法是包括固定、RNA 酶处理、PI 饱和染色3个关键步骤的3步法 PI 染色技术[1]。在一些研究中,当细胞在生理或病理条件下发生了凋亡,DNA 损伤,细胞内 DNA 降低,也可以采用3步法 PI 染色检测亚 G1峰(也称作凋亡峰),用于凋亡细胞比例和特征的分析[2]。但是在实际应用中,由于凋亡时相的不同,当凋亡细胞中 DNA 损伤部分没有完全脱出细胞时,往往检测不到明确可辨的亚 G1峰,敏感度较低。作为细胞凋亡检测的经典方法之一的彗星检测[3],以细胞在电泳移动中 DNA 的迁移形态作为凋亡的特征指标,此技术中比较关键的一步即采用碱性高渗试剂使凋亡细胞中断裂的 DNA 碎片脱出细胞,从而在电泳迁移中呈现出彗星尾样的拖痕,本课题组利用类似方法,用高渗缓冲液作用于固定后的悬浮细胞,使凋亡细胞内断裂 DNA 较彻底的脱出细胞外,再进行 DNA定量检测,提高对细胞凋亡的识别度和敏感性[4]。
-
双黄连抑制流感病毒诱导MDCK细胞程序化死亡的研究
研究显示,流感病毒在体内可诱导人体的呼吸道上皮细胞凋亡,在体外使宫颈癌细胞(Hela)和狗肾传代细胞(MDCK)凋亡[1,2].近来报道抗流感病毒药物可抑制流感病毒诱导感染细胞凋亡[3].但双黄连是否可抑制流感病毒诱导MDCK细胞凋亡少有报道.我们自2005年7月至2008年6月采用Annexin V及碘化丙啶(PI)双染并应用流式细胞仪检测双黄连对流感病毒诱导MKCK细胞凋亡的影响,报告如下.
-
定量检测化疗前后腹水癌细胞及外周血淋巴细胞凋亡
随着化疗时间的延长,癌细胞对多种化疗药物产生抗性[1].本文应用AV/PI(磷脂结合蛋白An-nexin V/碘化丙啶PI)双标记及Fas因子(CD95)单克隆抗体对化疗前后腹水癌细胞(ACC)及外周血淋巴细胞(PBL)的凋亡进行了流式细胞定量测定.
-
疫苗诱导的特异性细胞杀伤活性检测方法的建立
目的 建立一种基于流式细胞术的评价疫苗诱导的特异性细胞杀伤活性的方法,以完善疫苗及基因治疗药物的评价方法.方法 用羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(Carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE)标记淋巴细胞,利用肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNFα)模拟杀伤淋巴细胞,用碘化丙啶(Propidium iodide,PI)染色,流式细胞仪检测,确定CFSE和PI的浓度及作用时间.利用已确知有较强细胞免疫作用的治疗性乙型肝炎疫苗免疫小鼠,分离特异性淋巴细胞并用特异性肽刺激,分离未免疫小鼠的淋巴细胞作为靶细胞,并用特异性抗原肽致敏,并从靶细胞的标记、效应细胞培养时间,效靶作用时间、效靶比几方面进行优化,确定试验方法的操作流程.结果 采用CFSE/PI双标记能有效分离实验所需各组群,细胞分为CFSE+PI-、CFSE+PI+、CFSE-PI+、CFSE-PI-4个组群,可区分活细胞和凋亡细胞.CFSE标记靶细胞的时间为6h；效应细胞培养时间为72 h；效靶作用时间为6h；效靶比可使用100:1和50:1.结论 建立了基于流式细胞术的评价疫苗诱导的特异性细胞杀伤活性的方法,该方法可有效和精确地评价CTL杀伤效应,完善了疫苗及基因治疗药物的评价方法.
关键词： 羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯 碘化丙啶 流式细胞术 细胞毒杀伤作用 -
Ki67与核酸荧光共染在细胞周期研究中的应用
病原微生物与宿主细胞的相互作用是感染过程中的一个重要环节，也是研究肿瘤生物学的一项重要内容。动态研究细胞周期变化对了解病原体作用于细胞具有重要意义。本研究用Ki67／4′，6‐二脒基‐2‐苯基吲哚（4′，6‐diamidino‐2‐phenylindole ，DAPI）和Ki67／碘化丙啶（propidium iodide ，PI）共染技术分析了小鼠脾细胞的细胞周期变化，并介绍其具体应用。
-
吖啶橙-碘化丙啶染色法检测补体依赖的淋巴细胞毒活性
移植受者体内预存的循环抗体是诱发超急性排斥反应的主要原因,目前各实验室将淋巴细胞毒交叉配合试验作为术前筛选抗体的常规方法.补体依赖淋巴细胞毒活性(complement dependent cytotoxicity,CDC)检测的基本原理是将被检血清与淋巴细胞及补体共同温育,如果被检血清中含有相应的细胞毒抗体,则可以和淋巴细胞表面抗原特异性结合,激活补体,引起细胞膜破损,细胞死亡,细胞膜通透性增加,染料渗入细胞内,使死亡细胞染上颜色,根据着色细胞的数目,可以估计淋巴细胞毒的强度.
关键词： 补体依赖的淋巴细胞毒活性 吖啶橙 碘化丙啶 -
凋亡精子DNA两种染色法的比较
目的:对荧光素Hoechst33342和Hoechst33342/碘化丙啶(PI)两种评价精子质量的染色法进行比较分析.方法:将已分离提取的精子悬液与DNA拓扑异构酶抑制剂浓度为0、0.15、15 μmoL/L喜树碱(CAM)或浓度为0.37、3.7 mmol/L genistein(GEN)混合后,置37℃孵育4 h.通过Hoechst3342单染或Hoechst3342/PI复染,荧光显微镜检查,对具独立细胞周期的凋亡和坏死精子进行分析,以比较这两种染色方法的效果.结果:单染法不能区分精子活率;复染法能鉴定经不同剂量CAM和GEN处理后精子活率下降程度和坏死精子的增加量.CAM和GEN处理可使凋亡精子数量增多两倍.结论:精子凋亡和剂量依赖性坏死增多与两种拓扑异构酶抑制剂相关.Hoechst33342/PI复染比Hoechst33342单染法对精子的分析敏感度更高,并可对精子坏死和凋亡作出定量分析.
-
不同时间点的氧糖剥夺对器官型海马脑片的影响
目的 观察不同时长的氧糖剥夺对SD乳鼠器官型海马脑片的影响,探讨制备氧糖剥夺(OGD)模型的佳时长. 方法 对海马脑片进行碘化丙啶染色,用微量酶标法检测培养液上清中LDH的释放量. 结果 培养13d后的脑片逐渐变薄,海马结构逐渐清晰,生长情况逐渐稳定,无特异性荧光信号,LDH释放各组无明显差异性;与造模前24 h相比,随着缺氧缺糖时间的增加,海马脑片碘化丙啶染色的荧光信号强度与LDH释放量增加,以45、60 min时长为明显(P＜0.05或P＜0.01),但氧糖剥夺60 min脑片的损伤更为严重,表现出无法恢复的趋势. 结论 制备SD乳鼠海马脑片氧糖剥夺模型的佳时长为45min.
-
荧光双染和三维重建技术对蠕形螨的形态观察和功能探讨
目的 分别采用两种荧光染料对人体蠕形螨染色后置于激光共聚焦显微镜下进行三维重建,对其重要结构进行功能性探讨.方法 先用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)对虫体进性初染,再用碘化丙啶(propidium iodide,PI)复染,置于激光共聚焦显微镜下,用Imaris5.0软件进行三维重建,观测、鉴定毛囊蠕形螨形态特征.结果 异硫氰酸和碘化丙啶均能与虫体充分结合,在三维重建技术下清楚观察到了虫体外部形态及前段摄食通道等内部结构.结论 荧光双染和三维重建技术的结合,对深入研究人体蠕形外部形态、内部结构及探讨其功能、意义奠定了坚实基础.
-
人参皂苷 Rb1对 H2 O2损伤 RGC-5细胞的保护作用及机制探讨
目的：观察人参皂苷Rb1对H2 O2损伤RGC-5细胞的保护作用，并探讨其机制。方法采用MTT方法检测人参皂苷Rb1对H2 O2损伤RGC-5的细胞活力的影响，试剂盒方法检测SOD活性、GSH含量，免疫荧光化学染色法检测碘化丙啶（PI）、Caspase-3、Ca2＋。结果 A、B、C、D、E组在490 nm处检测细胞活力分别为0．266±0．038、0．299±0．025、0．314±0．014、0．222±0．031、0．391±0．041，A、B、C、E组与D组比较，P均＜0．05。空白对照组、人参皂苷Rb1组、H2 O2损伤组SOD活性分别为19．88±0．12、17．12±0．32、15．47±0．21，人参皂苷Rb1组、空白对照组分别与H2 O2损伤组比较，P均＜0．05。空白对照组、人参皂苷Rb1组、H2 O2损伤组GSH含量分别为15．67±0．18、14．98±0．25、13．71±0．31，人参皂苷Rb1组、空白对照组分别与H2 O2损伤组比较，P均＜0．05。空白对照组、人参皂苷Rb1组、H2O2损伤组Caspase-3阳性率分别为12％±0．25％、57％±0．47％、28％±0．18％，PI染色阳性率分别为16％±0．25％、18％±0．45％、32％±0．56％，Ca2＋荧光染色阳性率分别为8％±0．11％，31％±1．20％，19％±0．34％，人参皂苷Rb1组与H2 O2损伤组比较，P均＜0．05。结论人参皂苷Rb1能够拮抗H2 O2对RGC-5细胞的氧化损伤，其机制可能为提高SOD活性、GSH含量，降低Caspase-3表达，减少Ca2＋水平。
关键词： 人参皂苷Rb1 过氧化氢 RGC-5细胞 Caspase-3蛋白 碘化丙啶 -
丫啶橙-碘化丙啶双染色法观察大鼠耳蜗基底膜毛细胞活性
目的 探讨大鼠耳蜗基底膜毛细胞活性鉴别的实验观察方法.方法 采用丫啶橙-碘化丙啶(acridine orange-propidiumiodide,AO/PI)双染色法,荧光显微镜观察,检测经组织培养后新生大鼠耳蜗基底膜毛细胞的活性.结果 在激发光下染色后的活细胞核是亮绿色,失活细胞核呈橙红色.当染液pH为6.5,AO浓度为0.1‰时,细胞染色不足,浓度超过1.5‰时,出现"过染",适染色浓度为1‰;当1‰AO的pH值低于5.0时毛细胞蒙上红晕,背景模糊,当pH值高于7.4时,不能区分死亡细胞与活细胞,pH值6.5～7.0时,染色效果好.结论 用pH为6.8的1‰AO、0.1‰PI染色,可清晰分辨死/活细胞.
-
罗丹明123和碘化丙锭测定线粒体跨膜电位反应条件优化的研究
在正常情况下,质子可自由通过线粒体通透性转运孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP),形成线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potential,△Ψm).在一些因素作用下,MPTP异常开放,△Ψm下降或丧失,因此检测△Ψm是观察线粒体变化的敏感指标[1].罗丹明123(rhodamine123,Rh123,碱性蕊香红)和碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染色是检测△Ψm的方法之一[2],目前尚少见两种染料组合染色的佳浓度报道.本研究采用不同浓度PI和Rh123组合染色检测阿糖胞苷(Ara-c)和三氧化二砷(As2O3)分别作用NB4和HL60细胞后的△Ψm,寻找双染色测定△Ψm的佳方案.
-
利用激光共聚焦显微镜研究MP多肽抑制粒细胞呼吸爆发造成的脂质过氧化作用
目的:研究MP多肽抑制呼吸爆发的作用机制.方法:培养人白细胞系THP1细胞,对照组细胞培养体系中仅给予内毒素(LPS,100ng/ml)刺激,治疗组在同样浓度的LPS刺激同时加入MP多肽(20μM),采用乙酰乙酸盐2,7二氯氢化荧光素(D399)和碘化丙啶(PI)双标记,用D399及PI对两组细胞进行染色,激光共聚焦显微镜检测两组细胞D399在细胞内的脂质过氧化产物2,7二氯荧光素及PI的荧光强度.
-
流式细胞术PI、Annexin V/PI和APO2.7法检测细胞凋亡的比较
目的:探讨流式细胞术PI法、APO2.7法以及Annexin V/PI法三种凋亡检测方法的应用价值.方法:使用PI法、APO2.7法以及Annexin V/PI法三种方法同时对槲皮素处理后的慢性粒细胞白血病K562细胞进行凋亡检测对比研究.结果:三种方法不同时间组间的相关系数分别为0.823(P＞0.05),0.949(P＜0.05),0.994(P＜0.01).药物作用24小时组APO2.7法与Annexin V/PI法检测细胞凋亡相关系数为0.925(P＜0.05),48小时组相关系数为0.993(P＜0.01).结论:流式细胞术检测凋亡时可以选用Annexin V/PI法和APO2.7法,不推荐选用PI法.
关键词： 流式细胞术 凋亡 碘化丙啶 磷脂酰丝氨酸结合蛋白 Apo2.7
