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miR-182在多氯联苯(PCB1254)暴露后视网膜神经节细胞内的表达及意义
目的:研究多氯联苯(polychlorinated biphenyls,PCBs)PCB1254引起视网膜神经节细胞毒性作用的可能机制.方法:分别配制浓度为0.125、0.250、0.500、1.000 mg/L的PCB1254对RGC-5细胞进行暴露处理,并设立空白对照及0.01％甲醇对照组,测定细胞内miR-182表达水平;利用miR-182类似物或抑制剂转染RGC-5细胞,使miR-182上调或下调,分别检测细胞凋亡、细胞增殖功能和细胞周期;使用0.5、1.0 mg/L的PCB1254刺激RGC-5细胞,再转染miR-182类似物,分别检测细胞凋亡、细胞增殖功能.结果:随着PCB1254浓度的增高,RGC-5细胞内miR-182的表达逐渐被抑制,当浓度≥0.5 mg/L时,与对照组的差异有统计学意义(P＜0.05).在RGC-5细胞内沉默miR-182可导致Caspase-3活性增高(P＜0.05),表明miR-182沉默促进细胞凋亡;CCK-8法显示miR-182沉默会导致RGC-5细胞活力降低(P＜0.05),表明miR-182沉默会抑制细胞增殖;MiR-182沉默对RGC-5细胞周期无显著影响(P＞0.05).使用miR-182类似物干预0.5、1.0 mg/L PCB1254暴露后的RGC-5细胞,发现细胞内Caspase-3活性下降(P＜0.05)、细胞活力增加(P＜0.05),表明miR-182可改善PCB1254对RGC-5细胞凋亡及增殖功能的影响.结论:PCB1254可能通过抑制miR-182的表达来影响RGC-5细胞的增殖和凋亡,进而导致视功能损害.
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人参皂苷 Rb1对 H2 O2损伤 RGC-5细胞的保护作用及机制探讨
目的：观察人参皂苷Rb1对H2 O2损伤RGC-5细胞的保护作用，并探讨其机制。方法采用MTT方法检测人参皂苷Rb1对H2 O2损伤RGC-5的细胞活力的影响，试剂盒方法检测SOD活性、GSH含量，免疫荧光化学染色法检测碘化丙啶（PI）、Caspase-3、Ca2＋。结果 A、B、C、D、E组在490 nm处检测细胞活力分别为0．266±0．038、0．299±0．025、0．314±0．014、0．222±0．031、0．391±0．041，A、B、C、E组与D组比较，P均＜0．05。空白对照组、人参皂苷Rb1组、H2 O2损伤组SOD活性分别为19．88±0．12、17．12±0．32、15．47±0．21，人参皂苷Rb1组、空白对照组分别与H2 O2损伤组比较，P均＜0．05。空白对照组、人参皂苷Rb1组、H2 O2损伤组GSH含量分别为15．67±0．18、14．98±0．25、13．71±0．31，人参皂苷Rb1组、空白对照组分别与H2 O2损伤组比较，P均＜0．05。空白对照组、人参皂苷Rb1组、H2O2损伤组Caspase-3阳性率分别为12％±0．25％、57％±0．47％、28％±0．18％，PI染色阳性率分别为16％±0．25％、18％±0．45％、32％±0．56％，Ca2＋荧光染色阳性率分别为8％±0．11％，31％±1．20％，19％±0．34％，人参皂苷Rb1组与H2 O2损伤组比较，P均＜0．05。结论人参皂苷Rb1能够拮抗H2 O2对RGC-5细胞的氧化损伤，其机制可能为提高SOD活性、GSH含量，降低Caspase-3表达，减少Ca2＋水平。
关键词： 人参皂苷Rb1 过氧化氢 RGC-5细胞 Caspase-3蛋白 碘化丙啶 -
Etoposide经由caspase依赖途径诱导RGC-5细胞凋亡
目的 研究etoposide诱导视网膜神经节细胞RGC-5细胞死亡的分子机制.方法 建立etoposide诱导的RGC-5细胞死亡模型,应用APOPercentageTM及原位TUNEL染色确定RGC-5细胞的死亡方式,并进而利用Western blot检测细胞内活化caspase-3及PARP-1的变化情况,并通过广谱caspase抑制剂间接证明是否有caspase依赖途径的激活.结果 相对高浓度的etoposide(1～10μmol/L)可以迅速降低RGC-5细胞的活性并诱导死亡;APOPercentageTM及原位TUNEL染色确定etoposide是以凋亡的方式诱导RGC-5细胞死亡;Western blot显示etoposide诱导后的RGC-5细胞中caspase-3被激活并伴有PARP-1的降解片段出现;广谱caspase抑制剂Z-VAD-fmk可以保护etoposide诱导的RGC-5细胞,提高细胞活性.结论 Etoposide经由caspase依赖途径诱导RGC-5细胞凋亡.
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PARP-1在光诱导视网膜神经节细胞凋亡中的作用
目的 研究核酶PARP-1在光诱导的视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡中的作用.方法 应用1000Lux光诱导视网膜神经节细胞-5(RGC-5)光损伤模型;利用MTT、APOPercentageTM实验及原位TUNEL确定光诱导RGC-5细胞死亡的模式;通过半定量RT-PCR和Western blot方法 评估光对RGC-5细胞中核酶PARP-1表达的影响;探讨PARP-1抑制剂尼克酰胺和NU1025对光损伤中RGC-5细胞的保护作用.结果 1000Lux光以时间依赖的方式降低体外培养的RGC-5细胞活性,光暴露4d明显诱导RGC-5细胞凋亡.RGC-5细胞光损伤导致核酶PARP-1转录和表达的上调(F=224.59,P＜0.01,n=12,ANOVA,Dunnett t test),PARP-1抑制剂尼克酰胺和NU1025显著提高细胞活性(F=312.87,P＜0.01,n=12,ANOVA,Dunnett t test).结论 1000Lux光可以诱导体外培养的RGC-5细胞凋亡,核酶PARP-1在该细胞凋亡分子机制中起重要作用.
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Staurosporine诱导RGC-5细胞分化作用的研究
目的 观察Staurosporine是否可以诱导视网膜神经节细胞-5(RGC-5)的分化.方法 正常培养RGC-5细胞,应用500 nmol/L Staurosporine诱导RGC-5细胞分化,并在诱导后不同时间段连续观察细胞形态的变化.应用免疫荧光检测视网膜神经节细胞(RGCs)阳性标志因子Thy-1和Brn-3的表达,应用Western Blot、RT-PCR分别定量检测诱导分化后RGC-5细胞中的Thy-1和Brn-3蛋白表达及mRNA的转录情况.结果 应用500 nmol/L Staurosporine诱导后的RGC-5形态上表现出增生停止,胞体周围纤长轴突生长,轴突末端可见类似突触结构.500 nmol/L Staurosporine可以诱导RGC-5细胞中RGCs阳性标志因子Thy-1和Brn-3转录及表达上调.结论 500 nmol/L Staurosporine可以有效地诱导RGC-5细胞向成熟RGCs分化.
关键词： RGC-5细胞 staurosporine 细胞分化 Thy-1 Brn-3 -
注射用血栓通冻干粉对氧化应激导致的RGC-5细胞凋亡的保护作用
目的 观察注射用血栓通冻干粉是否对氧化应激导致的RGC-5细胞凋亡有保护作用.方法 采用过氧化氢制备氧化应激损伤模型.分为4个组,分别为空白对照组、0.5 mg血栓通观察组,2 mg血栓通观察组,10 mg血栓通观察组,利用上述浓度培育RGC-5细胞24h后利用400 μm浓度的过氧化氢制备氧化应激模型.随后MTT法观察细胞凋亡情况.结果 经过不同浓度注射用血栓通培育后的细胞,凋亡率明显下降,各组间的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 注射用血栓通对氧化应激损伤导致的RGC-5细胞凋亡有保护作用.
