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活性氧与光动力学疗法
自1900年医学生Oscar Raab偶然发现丫啶橙(acridine orange)染色使草履虫发生光敏致死现象,揭开了人们对于光敏化反应研究的序幕[1].此后的一个多世纪,对于光动力过程的研究逐步深入,特别是近二十余年,随着激光技术的发展和新型光敏剂的出现,光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)作为一项新型诊疗技术,逐渐被各国学者接受.
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盐酸小檗碱作用于人舌癌Tca8113细胞的形态学研究
目的:观察盐酸小檗碱作用与体外培养人舌癌Tca8113细胞的形态学改变,探讨盐酸小檗碱对Tea8113细胞的杀伤作用.方法:利用体外培养技术,HE染色法,丫啶橙染色法,观察盐酸小檗碱对Tea8113细胞作用后的形态学改变.结果:盐酸小檗碱(4μg/ml)作用于Tca8113细胞48h后,细胞形态发生改变,大量细胞变圆,细胞出现出芽现象,并出现较多的悬浮死亡细胞.结论:盐酸小檗碱可使Tca8113.细胞膜表面结构发生改变,并具有明显的杀伤作用.
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消癌平对Ec-9706食管癌细胞的作用及机制实验研究
目的 探讨消癌平注射液对人食管癌细胞(Ec-9706)的抑制作用及其作用机理.方法 ①观察不同浓度消癌平注射液对Ec-9706的抑制率.②用倒置显微镜,丫啶橙染色(荧光显微镜)观察细胞用药前后形态变化;流式细胞仪检测用药前后细胞周期变化;免疫细胞化学法检测CychnD1表达.结果 ①消癌平40,20,10,5 mg/ml浓度时对Ec-9706细胞的生长抑制率分别为(90.15±2.74)%,(68.02±3.56)%,(48.73±1.79)%,(22.52±2.08)%.其OD值与空白对照组差异有统计学意义(P<0.05).其IC50值为(10.89±1.05)mg/ml.②消癌平可诱导Ec-9706凋亡.③Ec-9706经药物作用后,G0/G1期细胞百分比明显升高,S期细胞百分比明显下降,细胞被阻滞于G0/G1期.④Ec-9706在蛋白水平不表达CyclinD1.结论 消癌平对Ec-9706细胞有较好的抑制作用.
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胰岛移植物质量鉴定方法的研究
胰岛移植物的质量直接影响胰岛移植的效果,用经胶原酶消化、Ficoll纯化的成年大鼠胰岛,比较乙醇和二甲亚砜(DMSO)配制的双硫腙(DTZ),作B细胞鉴别染色;丫啶橙(AO)-碘丙啶(PI)和双醋酸荧光素(FDA)-溴乙锭(EB)双色荧光染色,鉴别活细胞.结果表明,乙醇配制的DTZ染色对细胞毒性小,且染液易储存;AO-PI染色,因AO能识别凋亡细胞,且着色鲜明,荧光持久.采用DTZ和AO-PI联合染色,能对胰岛的纯度、数量和活率作出精确的鉴定.
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丫啶橙-碘化丙啶双染色法观察大鼠耳蜗基底膜毛细胞活性
目的 探讨大鼠耳蜗基底膜毛细胞活性鉴别的实验观察方法.方法 采用丫啶橙-碘化丙啶(acridine orange-propidiumiodide,AO/PI)双染色法,荧光显微镜观察,检测经组织培养后新生大鼠耳蜗基底膜毛细胞的活性.结果 在激发光下染色后的活细胞核是亮绿色,失活细胞核呈橙红色.当染液pH为6.5,AO浓度为0.1‰时,细胞染色不足,浓度超过1.5‰时,出现"过染",适染色浓度为1‰;当1‰AO的pH值低于5.0时毛细胞蒙上红晕,背景模糊,当pH值高于7.4时,不能区分死亡细胞与活细胞,pH值6.5～7.0时,染色效果好.结论 用pH为6.8的1‰AO、0.1‰PI染色,可清晰分辨死/活细胞.
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采用形态学实验研究双脱甲氧基姜黄素对人血管内皮细胞的诱导凋亡作用
目的探讨双脱甲氧基姜黄素(又称姜黄素-3)对人肺微血管内皮细胞的诱导凋亡作用.方法(1)采用Giemsa染色法观察浓度分别为4μg/ml、8μg/ml和12μg/ml的双脱甲氧基姜黄素诱导内皮细胞凋亡的效果;(2)采用透射电镜观察浓度分别为4μg/ml、8μg/ml的双脱甲氧基姜黄素诱导内皮细胞凋亡的效果;(3)采用丫啶橙荧光染色观察内皮细胞在8μg/ml双脱甲氧基姜黄素诱发凋亡后发生的形态结构改变.结果(1)Giemsa染色实验表明,双脱甲氧基姜黄素作用24h后,4μg/ml组细胞凋亡率为1 5.8%,与阴性对照组(13.2%)比较无明显差异(P＞0.05),8μg/ml组和12μg/ml组细胞凋亡率分别为20.6%和38%,与阴性组比较差异显著(P＜0.01和P＜0.001),凋亡细胞多表现为胞体缩小、变圆,核浓缩,呈紫黑色;(2)透射电镜分析表明,4μg/ml组的内皮细胞形态结构与阴性对照组基本相同,无明显异常改变,8μg/ml组有大量凋亡小体形成,并观察到较多的典型凋亡细胞;(3)丫啶橙荧光染色可较细致地显示细胞凋亡时的多种结构、形态改变,能够发现较早期的凋亡细胞,因而其敏感度可能更高.结论(1)双脱甲氧基姜黄素诱导内皮细胞凋亡作用的有效剂量为8μg/ml;(2)丫啶橙荧光染色是研究细胞凋亡的一种较好的形态学实验方法,同时也适于定量分析.
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小鼠骨髓嗜多染红细胞微核单激光流式细胞仪自动化检测
背景与目的:建立快速检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的流式细胞仪自动化方法.材料与方法:以环磷酰胺处理雄性KM小鼠,分别用丫啶橙(Acridine orange,AO)、单激光流式细胞仪(Flow cytometer,FCM)、姬姆萨(Giemsa)法检测小鼠骨髓及外周血嗜多染、正染红细胞微核率,将检测结果进行比较.结果:以前置角散射光(Forward angle scatter,FSC)和DNA荧光(FL1)作图,清晰可见小鼠骨髓细胞被分成5个群体--有核细胞、嗜多染、正染、含微核的嗜多染及正染红细胞;环磷酰胺诱导的小鼠骨髓嗜多染及正染红细胞微核率呈良好的剂量-反应关系;FCM、快速AO法与Giemsa法检测结果具有良好的相关性(r=0.973,P＜0.01;r=0.978,P＜0.01).结论:AO-FCM自动化检测方法完全适用于小鼠骨髓红细胞微核率的检测.
