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麻黄的透皮吸收与白芥子促透皮作用的实验研究
透皮给药系统可以避免肝脏的首过效应及胃肠道的破坏,维持稳定、持久的血药浓度,降低药物毒性和副作用,提高疗效,减少给药次数,给药方便.目前,选用传统中药制剂(散剂、硬膏剂等)以传统穴位贴敷治疗咳喘症有较多报道[1],具有确切的临床疗效,为止咳平喘药的体外经皮渗透研究提供了可靠依据.为筛选有效中药,以现代透皮给药系统的制备方法研制治疗常见多发病咳喘症的新型制剂,本实验选取止咳平喘常用中药麻黄为主要研究对象,并根据临床报道的常用处方将其配以白芥子以观察后者是否具有促透皮吸收作用.其中游离麻黄生物碱属脂溶性,且分子量小(具挥发性)符合透皮吸收条件,白芥子含有的白芥子甙在芥子酶及水的作用下水解为异硫氰酸对羟基苄酯(白芥子油),具有刺鼻的辛辣味及刺激作用,能使皮肤发红、温暖,甚至发泡.从而破坏皮肤的正常屏障功能.促药渗透,但未有在离本皮肤上的促透皮作用的研究报道
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大鼠肾小球内皮细胞分离培养和鉴定
一、材料和方法1.材料和试剂:(1)材料:SD大鼠1～2月龄,体重50～100 g,雌雄各半,由东南大学医学院实验动物中心提供.Mini MACS免疫磁珠细胞分选仪、磁性分离柱LS 购自Miltenyi Biotec公司.(2)试剂:Ⅳ型胶原酶、内皮细胞生长因子、胰蛋白酶及转铁蛋白均购自Sigma公司,DMEM培养基购自Gibco公司,异硫氰酸荧光素标记的抗CD34-FITC、抗波形蛋白及抗角蛋白均购自Santa Cruz公司,抗FITC免疫磁珠购自Miltenyi Biotec公司.
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实验性急性肝内胆汁淤积乳酸菌干预机制的探讨
通过采用异硫氰酸萘脂(ANIT)诱导新西兰白兔产生急性肝内胆汁淤积模型并给予乳酸菌干预,观测各组不同时相血清、胆汁中总胆红素(TB)、谷丙转氨酶(ALT)、一氧化氮(NO)及胆汁流量的变化,探讨NO对肝损伤的机制及乳酸菌对胆汁和血清NO的影响.
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光枝勾儿茶化学成分研究(Ⅰ)
光枝勾儿茶Berchemia polyphylla Wall.ex Laws.var.leioclada Hand.-Mazz.是鼠李科勾儿茶属植物,又名铁包金、老鼠耳及乌龙根.分布于我国西南地区,是贵州苗族习用药材.多以根、茎、叶入药,有清热利湿、止咳等功效[1].现代研究发现,该属植物对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、福氏痢疾杆菌、伤寒杆菌等有抑制作用[2],对大鼠CCl4和异硫氰酸α-萘酯诱导的肝损伤有明显的保护作用[3].
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凋亡过程中膜联蛋白V ( Annexin V )的检测
1原理细胞凋亡具的各种不同的形态学特征,细胞膜的改变是早的变化之一.在凋亡细胞,位于细胞膜内的磷脂酰丝氨酸( phospholipid phosphatidyl-serine, PS)转位到细胞膜外.膜联蛋白V是一种35～36kDa的钙依赖的.磷脂结合蛋白,其与PS有高度的亲和性,能与表达ps的细胞结合.膜联蛋白可与萤光染料异硫氰酸FITC或生物素(biotin)结合.因此可用于流式细胞术检测凋亡过程中的细胞.
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荧光双染和三维重建技术对蠕形螨的形态观察和功能探讨
目的 分别采用两种荧光染料对人体蠕形螨染色后置于激光共聚焦显微镜下进行三维重建,对其重要结构进行功能性探讨.方法 先用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)对虫体进性初染,再用碘化丙啶(propidium iodide,PI)复染,置于激光共聚焦显微镜下,用Imaris5.0软件进行三维重建,观测、鉴定毛囊蠕形螨形态特征.结果 异硫氰酸和碘化丙啶均能与虫体充分结合,在三维重建技术下清楚观察到了虫体外部形态及前段摄食通道等内部结构.结论 荧光双染和三维重建技术的结合,对深入研究人体蠕形外部形态、内部结构及探讨其功能、意义奠定了坚实基础.
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莱菔硫烷激发的细胞自噬潮对离体人晶状体囊上细胞增生的抑制作用
背景 研究已证实莱菔硫烷(SFN)为一种有效的化学预防剂,能调控生物体不同的分子机制以抑制细胞的无序生长.自噬是人体细胞维持自身内环境的生物过程,探讨SFN对晶状体上皮细胞(LECs)生物学行为的影响及其与细胞自噬的关系有助于为后发性白内障(PCO)的预防和靶向治疗提供新的思路.目的 探讨SFN诱导人LECs凋亡的直接作用及其激发细胞自噬潮的作用机制. 方法 将离体24 h内的人供体眼行常规白内障超声乳化手术,取出的完整晶状体囊袋置于含体积分数2％胎牛血清的EMEM中培养,建立PCO囊袋模型.按照分组分别于培养基中添加0(空白对照组)、1、10和100 μmol/L SFN培养30 d,观察各组晶状体囊袋上细胞的生长情况,并采用免疫荧光技术检测细胞中F-actin和Vimentin的表达.用含5％胎牛血清的EMEM培养晶状体上皮细胞系FHL124,将培养的细胞分为空白对照组1、10、30和100 μmol/L SFN处理组,行乳酸脱氢酶(LDH)释放试验以测定各组细胞LDH释放的百分率;采用划痕试验检测各组细胞划痕面积的变化以评估细胞迁移能力;透射电子显微镜下观察各组细胞中自噬囊泡的超微结构及数量;采用Western blot法检测SFN组、SFN+3-MA组和3-MA处理的细胞自噬活动特异蛋白LC3的相对表达. 结果 各不同质量浓度SFN组晶状体囊袋上细胞覆盖率总体比较差异有统计学意义(F=48.57,P＜0.01).10 μmol/L SFN组明显低于空白对照组和1μmol/L SFN组.免疫荧光检测技术表明空白对照组增生细胞中F-actin和Vimentin染色阳性,增生的细胞排列致密,随着SFN质量浓度升高,F-actin和Vimentin阳性细胞密度下降,100 μmol/L SFN组未发现F-actin和Vimentin阳性细胞.空白对照组及1、10、30和100 μmol/L SFN组细胞LDH释放量(A值)分别为0.19±0.03、0.39±0.06、0.56±0.07、0.68 ±0.08和0.89±0.09,其中10、30、100 μmol/L SFN组细胞LDH释放量均明显高于空白对照组,随着SFN质量浓度升高,细胞LDH释放量逐渐增加,均明显高于其相邻的低质量浓度组,差异均有统计学意义(均P＜0.01).随着SFN质量浓度的升高,划痕面积减少率呈下降趋势,10、30、100 μmol/L随着SFN质量浓度升高,划痕面积的减少均明显低于其相邻的低质量浓度组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).空白对照组、SFN组、SFN+3-MA组和3-MA细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达的灰度值分别为0.423±0.003、14.543±0.024、0.668±0.024和0.576±0.056,SFN+3-MA和3-MA组LC3-Ⅱ蛋白表达的灰度值均明显低于SFN组,差异均有统计学意义(均P＜0.01).空白对照组及1、10和100 μmol/L SFN组间自噬小体数量分别为4.07 ±0.32、4.13±0.34、9.21 ±0.53和21.02±1.34,其中10和100 μmol/L SFN组细胞中自噬小体数量均明显高于空白对照组及1μmol/L SFN组,差异均有统计学意义(均P＜0.01). 结论 SFN可以激发人LECs自噬潮,从而抑制离体人晶状体囊上LECs的增生,促进LECs的死亡.本研究结果有望成为预防和治疗PCO的新药.
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独行菜和播娘蒿化学成分及药理作用研究进展
独行菜Lepidium apetalum和播娘蒿Descurainia sophia分别系十字花科独行菜属和播娘蒿属植物,其种子入药分别称为北葶苈子和南葶苈子.现已从2种植物中分离得到了异硫氰酸和硫苷类成分,以及强心苷、黄酮、三萜、甾醇、香豆素、生物碱、酚酸、挥发油、脂肪油、氨基酸等成分.这两种植物对心血管、高血脂等疾病具有显著功效,所含的成分具有降压、抗癌、细胞毒、抗氧化等药理活性.对独行菜和播娘蒿的化学成分及药理作用研究进行分类汇总和比较,为进一步研究常用中药葶苈子提供参考.
