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160六价铬诱导P53蛋白活化的机制
本研究探讨了Cr(Ⅵ)诱导P53活化的机制.培养人肺上皮细胞系A549并进行传代.取3×105A549细胞转入一个6孔平皿,于37℃下温孵24h,立即转染1μg报告质粒和1μg β-半乳糖苷酶(β-Gal)质粒,温孵过夜后冲洗,加入含10%FBS的F-12K培养基,再培养24h后加入5、10、20、50和100μmol/L的Cr(Ⅵ)溶液处理(未经处理的为对照),然后加入400μl报道溶解缓冲液,在4℃下抽提细胞2h;取80μl细胞溶解产物测量虫荧光素酶和β-Gal活性,结果以β-Gal标化的相对P53活性(与对照相比)来表示.另取经Cr处理后的A549细胞,抽提细胞经声处理断裂DNA和减少粘度,然后取20μl全细胞溶解产物加热、离心,进行蛋白印迹分析(Westernblot).取细胞溶解产物、20μlRecin/TNT(1:10)和10μg抗体在4℃下温孵过夜并离心,取上清进行Western blot反应.
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李斯特菌选择性培养基的研究
单增李斯特菌是一种重要的食源性致病菌,目前李斯特菌受到了越来越多的关注,虽然近些年来应用分子生物学方法对李斯特菌进行诊断的技术不断增多,但传统的细菌分离培养仍然是李斯特菌实验室检测的金标准.本文对各种李斯特菌选择培养基的原理进行阐述,并且比较其分离效果及不足之处,为发展新的分离培养方法和研制新的选择培养基提供了基础.
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先天愚型患者的遗传学分析
先天愚型(即智力低下),是严重影响我国人口素质的原因之一。据一次权威性的调查资料表明,中国14岁以下智力残疾者,大约有540万,占残疾儿童总数的2/3。1 对象与方法1.1 研究对象 患儿大都智力低下,生长发育迟缓,具有特殊面容:头宽面窄,睑裂小,眼间距宽,眼角上翘,鼻根底平,口常张开,伸舌呆笑,生活不能自理。患儿易呼吸道感染,伴发有先天性心脏病。一般资料及智力发育情况见表1。 对患儿做临床检查:心、肺、血常规化验均属正常。针对患儿的表型我们做了微量血培养和染色体核型分析。1.2 方法1.2.1 采血与培养:用经肝素润湿针筒的注射器,抽取患儿静脉血,然后注入到已配制好的培养基(RPMI 1640培养液4 mL,小牛血清1 mL,PHA 0.25 mL,肝素,青、链霉素适量)内,轻轻摇动培养瓶使之与培养基混匀,置入37 ℃培养箱内培养72 h,终止培养前3~4 h加入秋水仙素。
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痴心于书画艺术致力于美的创造——记著名书画家罗献诗女士
说起罗献诗能够走上书画艺术的道路,这里有两位重要人士不得不提到.一是她的母亲.母亲出生于书香世家,自幼受到过良好的教育,而且心灵手巧,剪纸、刺绣、女红等样样都能手到擒来.在这样一位母亲的熏陶下,罗献诗女士心底那天然的书画艺术细胞,近水楼台地得到了培养基,于是,很快地发育成形.母亲教她画画,没想她一接触上绘画,便痴迷上了,这一痴迷,就是几十年的光阴,这一痴迷,当代中国绘画艺术的天空就多了一颗闪烁的星星.二是她的父亲.为了培养她,还是在入学启蒙前,父亲便开始教她练毛笔字、打算盘了.没有钱买笔,父亲就用打绳用的麻线给她做了一支“毛笔”.
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双黄连片的微生物检验方法的探讨
双黄连片具有辛凉解表,清热解毒的功效.主要用于外感风热引起的发热,咳嗽,咽痛等症状.实验中发现,由于双黄连片对一些细菌的生长有一定的抑制作用,在进行微生物限度检查时,阳性对照菌在加有供试液的BL培养基中生长不好,以至在MUG实验中阳性对照管不显蓝白荧光,而且污染菌检出率低,因此,不能准确反映药品的微生物质量.
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不同培养条件对CHO细胞表达EPO的影响
促红细胞生成素(Erythropoietin, EPO)是一种高糖蛋白激素.EPO分子中糖链结构末端的唾液酸的含量对其生物活性有重要影响.我们研究不同培养条件(培养基和pH)对CHO细胞表达EPO的产量和质量的影响,结果表明:不同培养基对EPO的表达有非常显著的影响,但对EPO的糖基化程度几乎没有影响;pH对EPO的表达无显著影响,但对EPO的糖基化程度有显著影响. 我们的研究表明,选择适合的培养基和控制适当的pH可显著提高EPO的产量和质量,降低EPO的生产成本,为工业化生产EPO提供基础.
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微生物检测用培养基质量控制方法
培养基的正确配制、使用以及质量控制直接关系到微生物检测结果的准确性.现介绍培养基理化、生物学质量控制方法及其基本要求.
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食品微生物检测中快速检测法的应用分析
沙门氏菌是肠杆菌科中的主要菌种,是革兰氏阴性菌,它主要分布于动物的肠道中,可以中毒致病.一般的动物性食品尤其是肉类制品可以引起人或动物的沙门氏菌食物中毒.一、沙门氏菌胶体金的染色沙门氏菌胶体金染色试验在试验中,选择大肠杆菌与沙门氏菌两种菌种,并取氯金酸、营养琼脂、沙门氏菌抗体、氯化钠、LB培养基等17种试验试剂备用.
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标准菌株在食品微生物检验中的重要作用
随着人们对食品质量要求的提高,以及食品安全问题频发,食品微生物检验越来越重要,其中标准菌株发挥了重要的辅助作用.基于此,本文针对标准菌株在食品微生物检验中发挥出作为对照菌株、检验培养基性能、检验试剂标准性和测试设备性能等作用进行分析,从而为食品微生物检验工作的开展提供有效的参考.
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金黄色葡萄球菌定量检测中四种培养基的比较
使用Baird-Parker平板、RPF平板、金黄色葡萄球菌显色培养基平板及3M PerifilmTM金黄色葡萄球菌测试片对金黄色葡萄球菌检测,浓度范围在103~104 CFU/mL,3M测试片、金黄色葡萄球菌显色培养基、RPF平板与BP平板结果相当.在实际检测中,选择适当的培养基辅助检测,结果更加准确可靠.
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防腐剂影响微生物指标检验结果的机制分析
本研究选取卫生部及部分委托检查单位提供的416份含防腐剂样品展开研究,使用多种培养基试剂进行检验,探讨其对微生物临床检验指标的影响。
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浅述国内外乳酸链球菌素(Nisin)的效价检测方法异同
利用琼脂分散法检测Nisin的效价是由英国 Aplin & Barrett公司的Tramer, J.& Fowler, G.G(1964)[1]在学术期刊上发表,该方法成为国际公认的Nisin效价检测法。美国《食品用化学品法典》[2]中关于Nisin的检测方法也是依据该文献。另外欧盟2006年出版的Nisin专刊[3]中亦提到食品中Nisin的检测法是依据Fowler, G.G & Tramer, J.(1975)[5]。我国Nisin的执行标准为QB 2394-2007[4],其效价检验方法参照美国《食品用化学品法典》第五版制定。因此本文旨在对国内外关于Nisin效价检测法进行简要归纳,比较各方法的异同点。
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紫红曲霉产生淀粉酶的优化研究
通过研究紫红曲霉在不同培养条件下对产生淀粉酶的影响,以及对紫红曲生淀粉酶活力的测定,初步确定了紫红曲的培养条件.实验表明,采用糯米淀粉作为培养基碳源,硝酸钠作为氮源,同时补充各种微量元素,发酵周期144 h,控制培养温度为35℃,保持培养基初始pH值为4.5,接种量控制在9%左右,紫红曲霉产酶活力能达到56 U/ml.
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谈食品微生物检验质量控制
在食品微生物检验工作中,检验流程包括检验思路的确定、标准检验方法的使用、培养基的配制、样品前处理、检验结果的判断、原始记录、报告等许多环节,其中手工操作也较多,影响结果准确性的因素也较多,实验室必须通过行之有效的质量控制措施,持续地加以监督和控制,并结合必要的室间质量控制手段,才能确保检验结果的准确性。主要可从下几方面进行质量控制:1检验人员方面:实验室的检验水平与检验人员素质密切相关,业务技术水平和工作责任心是检验人员素质的核心所在。这就要求检验人员必须具备扎实的理论基础知识和熟练的操作技能,要求检验人员具备高度的工作责任心和工作热情。实验室可通过培训和继续教育、实验室间的交流,必要时进行考核等手段,来不断提高检验人员的业务水平,在实验室质量体系文件中强调检验人员工作责任心的重要性,通过制定的奖惩制度来规范检验人员的工作行为。2仪器设备方面:实验室所有仪器均应在检定有效期内使用,必要时还要进行期间核查。在此基础上可通过一些监控手段来确保仪器设备保持佳性能,如高压蒸汽灭菌器,可用生物指示剂嗜热脂肪杆菌ATCC7953(2)或化学指示剂如变色胶带监视灭菌效果;需要控制温度的仪器,应在工作前和工作后做好温度的记录,不符合应及时调整;生物安全柜要定期由专业人员更换滤网,对紫外线消毒设备必须三个月检查一次其消毒性能等等。3检验耗材方面:如培养基:目前大多数实验室都是使用市售干粉培养基,这些来自著名公司的培养基,质量比较稳定,但在购买和使用前首先要对外观色泽和均一性、pH值、水分含量、批次或批号、琼脂凝胶的硬度、选择性等进行初次评估。用质控菌株进行预测,确保培养基、试剂达到预期效果。在使用市售培养基时应注意以下几方面:(1)选用国内外知名品牌和信誉度好的产品;(2)要根据培养基储存条件储存,尽量少包装;(3)要根据日常工作需要作为计划,控制在有效期内用完;(4)购回试剂应对品名、生产日期、保质期做好记录,检查密封性、标签牢固性;(5)在配置时应仔细检查原料,如发现结块、变色严禁使用;(6)所有培养基要有配制称量时要有记录,把剩余培养基密闭好;(7)严禁使用过期的、污染的、失了水的培养基。又如标准菌株:必须做好明确的作业指导书,实施标准菌株的规范管理,做好菌株的传代验证,这样才能确保标准菌株在实验中应起的作用等等。4样品采集方面:因样品采集并非实验人员进行,样本采集是否合格规范要求,是实验成败的又一关键因素。因此,从事食品微生物检验的工作人员,要注意加强与采样人员的沟通,向样品采集者讲解采集样本的方法、要求,指导他们规范采集样本,如无菌要求、随机方法、种类、数量、采集部分、冷藏或保温、运送方式、安全要求等。实验室收到样本后,应仔细核对检验内容与送检单,对不符合检验要求的样本,注明原因退回。
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乳酸菌胞外多糖的功能及在食品工业中的应用
乳酸菌胞外多糖(Exopoly Saccharides,EPS)是乳酸菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外,常渗于培养基的一类糖类化合物,其分子量一般在4.0×10 4到6.0×10 6之间.
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PET无菌线培养基灌装测试综述
通常,为了保持饮料的原始风味以及满足生产中PET瓶灭菌的需要,饮料在灌装时必须避免过长时间的受热以及包材输送、灌装等暴露作业时受到微生物污染的机会,企业一般会选择适用范围广的无菌工艺进行生产。然而无菌生产工艺引入的变量很多,诸如生产区的设计及其设备布局、生产时的环境状况、所有与生产相关的设备及物料的污染状况、人员操作和卫生状况等,每一个环节对终产品的质量都至关重要。
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乔优优洁(R)消毒液助企业打造完美乳品
乳品中营养物质十分丰富,是微生物生长繁殖的理想培养基,若被微生物污染,不仅影响产品质量,而且会危害消费者的身体健康.因此,对乳品企业来说,严格控制好生产过程中的微生物至关重要.
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妊娠相关血浆蛋白A单克隆抗体的制备与鉴定
建立妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)单克隆抗体细胞株,制备其单克隆抗体(McAb),以用于检测孕妇血清中PAPP-A的含量,提高先天性染色体异常疾病筛查的检出率.本室采用甲基纤维素半固体选择性培养基细胞融合技术获得了理想的PAPP-A McAb,为提高有关PAPP-A免疫分析技术的准确性、精确度打下了基础.
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三种人精子优化方法对精子参数及获能比较研究
优化处理精子是决定卵细胞受精率高低,受精卵卵裂好坏的前提[1],而提高精子体外活动能力又是精子能否具有受精能力的重要指标,精子在体外培养基中孵育一段时间后,充分获能才具有受精能力。本研究观察3种方法优化精子及精子在体外获能过程,探讨在体外受精(IVF)胚胎移植(ET)过程中较合适的精子处理方法。
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1-01 c-Ha-rasV12G基因转染细胞系促癌剂检测模型
目的建立促癌剂检测模型.方法采用电穿孔的方法,将突变的c-Ha-rasV12G基因转入人胚肺成纤维细胞WI-38及人支气管上皮细胞BEAS-2B中,将获得的G418抗性(G418r)单克隆细胞株进行DNA-DOT-Bloting及RT-PCR分析后,进一步用促癌剂佛波醇酯(PMA)处理,并选用克隆形成率(CFE)、锚着独立性生长(AIG)、血清抗性及裸鼠成瘤性等表型改变对受试细胞进行了恶性程度检测.结果 c-Ha-rasV12G基因使细胞对促癌剂的促癌敏感性增强,其中,对于WI-38G418r细胞,当PMA剂量分别为0、3.125×10-5、6.25×10-5、1.25 × 10-4、2.5×10-4及0.5×10-3mol/L时,其在含体积分数为1%FBS的1640培养基中的克隆形成率分别为7、8、11、12、15及14/200 cells,在含体积分数为10%FBS的培养基中分别为76、92、106、109、127及173/200 cells,在质量浓度为0.33%的琼脂中为47、61、70、69、80及97/1 000 cells.选取0.5×10-3 mol/L剂量组处理的G418r细胞进行裸鼠成瘤性实验,结果阳性.对照非基因转染细胞,用0.5×10-3 mol/LPMA处理后,在3种培养基中相应的克隆形成情况为3、33/200 cells,0/1 000 cells,裸鼠皮下注射部位无肿瘤生长.PMA以0、2.0×10-5、1.0×10-4、5.0×10-4、1.0×10-3及1.6×10-3 mol/L分别作用24 h,结果1.0×10-4 mol/L剂量作用使BEAS-2B G418r细胞获得了高的血清抗性及CEF,表现为在含体积分数为0.8%、0%FBS的LHC-8培养基及软琼脂中的CEF分别为190%、150%及75%(对照非基因转染细胞在不含PMA及FBS的LHC-8中CEF计为100%),对照细胞在含体积分数为0.8%FBS的培养基及软琼脂中不能生长,随着PMA处理剂量的增加,其CFE逐渐降低.结论 c-Ha-rasV12G基因可使上皮细胞BEAS-2B获得对PMA的促癌作用敏感性,其中当PMA剂量≤1.0×10-4mol/L时,可发挥促癌作用,大于该剂量则有促分化作用;上皮细胞发生恶性转化的标志之一是细胞对FBS、PMA等促分化剂的促细胞分化抗性增强.