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鼠疫F1抗体胶体金检测试剂的研制和现场评价
目的 为建立鼠疫诊断和监测所需的快速检测F1抗体水平的方法,研制并评价金标检测试剂.方法 胶体金标记和实验室检测,14个省17个监测点现场监测中检测了动物和人的血清样本4789份.结果 金标检测试剂特异性强,敏感性、稳定性好,现场检测结果与间接血凝方法无差异.结论 鼠疫F1抗体胶体金检测试剂可以用于鼠疫病例诊断和动物监测.
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胶体金标记免疫层析法检测大肠杆菌O157
目的 应用抗大肠杆菌O157(E.coli O157)单克隆抗体,制备一种简便快速的胶体金标记免疫层析(GICA)条用于检测标本中E.coli O157.方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗E.coli O157单克隆抗体,以硝酸纤维膜作为抗E.coli O157单克隆抗体的包被载体,制成GICA检测条.标本中E.coli O157与检测条上金标记抗体(Au-Ab)结合后,利用硝酸纤维膜的层析作用移动,与膜上的固相抗体结合形成可见的红色条带.结果 GICA检测条灵敏度可达105 cfu/ml.用GICA检测了1750份不同食品和人畜粪便标本中E.coli O157,GICA检测条阳性份数43份,后经分离培养检出29株大肠杆菌O157;另14份标本经鉴定,其中12份标本可疑为弗劳地枸橼酸杆菌.结论 GICA条检测标本的E.coli O157,特异性较高,不需任何仪器设备,较简便快速,易于判断结果,故可对标本进行快速筛查,适合各级疾控中心和临床检验部门使用.
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食品微生物检测中快速检测法的应用分析
沙门氏菌是肠杆菌科中的主要菌种,是革兰氏阴性菌,它主要分布于动物的肠道中,可以中毒致病.一般的动物性食品尤其是肉类制品可以引起人或动物的沙门氏菌食物中毒.一、沙门氏菌胶体金的染色沙门氏菌胶体金染色试验在试验中,选择大肠杆菌与沙门氏菌两种菌种,并取氯金酸、营养琼脂、沙门氏菌抗体、氯化钠、LB培养基等17种试验试剂备用.
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大肠杆菌O157检测方法概论及快速检测胶体金方法
大肠杆菌是一种革兰氏阴性短杆菌,它大量存在于人及其他恒温动物体内的肠道内,常随人及动物粪便一块排出,会对水源造成污染.若在水和食品中检出,可认为是被粪便污染的指标.
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大肠杆菌O157胶体金免疫层析快速筛查方法的建立
目的建立一种大肠杆菌O157的胶体金免疫层析快速筛查方法.方法利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测大肠杆菌O157,对该法进行敏感性、特异性和食品样品的适用性分析.结果该法能在15分钟内完成检测,检测不同的肠杆菌科细菌(非O157型大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、变形杆菌、柠檬酸杆菌、肠杆菌、沙雷菌、耶尔森菌)、葡萄球菌、李斯特菌、气单胞菌、弧菌等共24种30株常见细菌,未发现有交叉反应,显示该法特异性良好.检测大肠杆菌O157的低检出浓度为1×105cfu/ml.方法适用于奶粉、面粉、淀粉、咖啡粉、饼干、蛋糕、果冻、燕窝和果汁等食品样品的检测.结论新建立的大肠杆菌O157胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查.
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抗微囊藻毒素单克隆抗体胶体金标记物的制备及鉴定
目的制备抗微囊藻毒素(MC-LR)单克隆抗体胶体金标记物,并利用光谱分析来探讨结合物的合成机理.方法用杂交瘤技术生产并纯化的抗MC-LR的单克隆抗体,利用胶体金标记技术合成20nm粒径的胶体金与抗MC-LR单克隆抗体的结合物,通过光谱分析对偶联物中单克隆抗体的构象进行分析,ELISA法检测偶联物中抗体的免疫性.结果抗MC-LR单克隆抗体的效价达108,IC50抑制浓度为3ng/ml,为IgG2a亚型,分子量为1.5×105,与MC-LW、MC-LF无明显交叉反应.胶体金与抗体偶联物的颗粒圆整,光谱分析结果显示抗体蛋白的特征官能团没有发生明显变化,与胶体金粒子作用后结构略加紧密.ELISA结果显示偶联物仍然保持免疫原性.结论抗MC-LR单克隆抗体胶体金标记偶联物中抗体蛋白结构和抗原决定簇的位点没有改变,仍具有免疫原性,偶联物的稳定性良好.
关键词： 抗MC-LR单克隆抗体 胶体金 标记偶联物 制备鉴定 -
甲基苯丙胺的胶体金免疫层析检测卡的研制
目的 建立一种无需仪器、敏感、特异并适用于非专业人员现场快速检测甲基苯丙胺(冰毒)的方法.方法 用冰毒-BSA免疫BALB/C小鼠,采用有限稀释法筛选特异性单克隆抗体并用分型试剂盒分析抗体亚型.采用物理方法将胶体金标记纯化的抗体,组装胶体金快速检测卡并检测此卡的灵敏度和特异性.结果 采用有限稀释法筛选出7株特异性分泌株,其中R6腹水纯化后间接竞争ELISA测其效价为10~8,分型试剂盒测试显示此抗体属于IgG1型;金标抗体量为5μg/ml时,胶体金免疫检测卡的灵敏度为500ng/ml,与8种结构类似物均无交叉反应.结论 高灵敏度的胶体金免疫层析快速检测卡作为毒品的初筛工具可有效地帮助查禁人员现场缉毒.
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粪便隐血检测方法学探讨——附157例便隐血免疫胶体金一步法检测试纸结果分析
通过对157例大便隐血免疫肢体金一步法检测试纸(FOB)的检测结果进行分析,探讨化学法和免疫法的优缺点,免疫金标记夹心免疫检验法的临床应用价值及意义.结果:用免疫胶体金法检查临床住院病人大便隐血57例,阳性7例;门诊病人100例,阳性23例,阳性率分别为12％和23％[表1].结论:免疫胶体金单克隆法对于消化道出血,虽不能确定出血部位及对出血部位进行定位,但灵敏度高、特异性、抗干扰性强,对各种原因引起的消化道出血及筛选诊断胃肠道恶性肿瘤有重要意义.
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胶体金法结合涂片形态学特征快速鉴别结核分枝杆菌复合群的应用评价
目的 探讨结核分枝杆菌抗原胶体金法结合涂片形态学特征鉴别结核分枝杆菌复合群的应用价值.方法 采用涂片形态学特征和结核分枝杆菌抗原胶体金法对853株分枝杆菌临床分离株进行鉴别并与传统菌种鉴定结果进行比较.结果 涂片法鉴别结核分枝杆菌的敏感度为98.4％(750/762),特异度为96.7％(88/91)；胶体金试验鉴别结核分枝杆菌的敏感度为99.0％(754/762),特异度为98.9％(90/91)；两种方法均为阳性,可报告菌株中含有结核分枝杆菌复合群(MTC),其阳性预测值为100.0％(741/741)；两种方法均为阴性,可报告非结核分枝杆菌(NTM),其阴性预测值为100.0％(87/87).结论 结合涂片形态和结核分枝杆菌抗原胶体金两种方法鉴别结核分枝杆菌可以提高检测的准确性,是一种快速、简便,适于各级实验室使用的方法.
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应用胶体金免疫层析技术建立炭疽杆菌芽孢的快速检测方法
[目的]建立1种炭疽杆菌芽孢的快速检测方法.[方法]利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测炭疽芽孢杆菌,对该方法进行特异性、敏感性等评价;在面粉、淀粉、奶粉等材料中掺入炭疽疫苗株芽孢模拟"白色粉末",评价该法检测炭疽生物恐怖和环境样品的可行性.[结果]该法能在20min内完成检测,多种不同的芽孢菌及其它菌检测评价显示该法特异性良好,检测灵敏性为1×106cfu/ml,环境样品的检测敏感性也相同.[结论]建立的检测炭疽芽孢杆菌的胶体金免疫层析方法,能快速、特异、灵敏的检测炭疽芽孢,适用于现场的快速检测.
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国境口岸疟疾快速联合检测方法应用评估
目的 对疟疾快速检测方法的联合应用进行评价,探索适用于口岸的疟疾快速检测方法.方法 选取来源于中国科学院寄生虫病研究所的疟原虫镜检阳性滤纸血样本,其中30例恶性疟,28例间日疟和20例正常人对照样本;同时使用检测疟疾的实时荧光PCR方法、交叉引物恒温扩增方法、胶体金技术对其进行检测；分析各方法检测的敏感性和特异性.结果 实时荧光PCR法检测恶性疟原虫的灵敏度高于交叉引物恒温扩增法和胶体金法(P值分别为0.019、0.043,P＜0.05))；对低原虫密度的恶性疟样本(原虫密度10～100及101～1 000个/μl),实时荧光PCR法检测的灵敏度较高,交叉引物恒温扩增法和胶体金法对于低原虫密度的恶性疟样本检测灵敏度显著低于PCR法；交叉引物恒温扩增和胶体金法联合检测在恶性疟各原虫密度下的灵敏度均高于使用单一方法的灵敏度,与实时荧光PCR法的灵敏度比较,差异无统计学意义(各原虫密度下,两者比较的P值分别为0.29、0.302、1.000、1.000,P＞0.05).实时荧光PCR法对间日疟样本检测灵敏度较高,交叉引物恒温扩增和胶体金法的灵敏度显著低于实时荧光PCR法,两者共检能提高检测的灵敏度.结论 交叉引物恒温扩增法和胶体金法联合检测,可以较好地筛选出各种原虫密度的感染者,该联合检测方法的灵敏度和特异性与实时荧光PCR法相当,适合国境口岸对疟疾现场快速检测的要求.
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建立快速检测鼠疫耶尔森菌的胶体金免疫层析法
[目的]建立检测鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)的胶体金标记免疫层析方法.[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记鼠疫杆菌的抗体,制成免疫层析检测试纸条,进行特异性和敏感性评价,并对面粉、土壤、奶粉、淀粉等不同材料进行模拟添加鼠疫菌检测.[结果]用多种不同的常见细菌或近缘细菌进行测试,未出现非特异性反应,检测鼠疫杆菌的灵敏度为1×105cfu/ml,对水、土壤、奶粉、面粉、淀粉、酵母粉等不同材料中鼠疫杆菌进行检测也取得同样结果,10～15min即可得到结果.[结论]建立了1种可以用于现场快速检测鼠疫杆菌的胶体金免疫层析方法,为进一步大规模应用奠定了基础.
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胶体金免疫层析快速定量检测西尼罗病毒抗体方法的建立
目的 建立一种胶体金免疫层析快速定量检测西尼罗病毒抗体的方法.方法利用胶体金免疫层析技术,建立快速检测西尼罗病毒抗体的方法,评价其特异性和敏感性,进行定量检测并拟合标准曲线.结果该法可在15min内完成定性和定量检测,定量检测灵敏度为1:104/test,线性范围1:101/test～ 1:10/test、回收率86.5％～ 122.7％.结论建立的检测西尼罗病毒抗体的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地对样本中的西尼罗病毒抗体进行定性、定量检测.
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胶体金免疫层析法在卫生检疫医学实验中的应用
[目的] 研究适用于口岸快速通关放行要求的传染病病原体和标志物的快速检测方法.[方法] 采用胶体金免疫层析测定法(GICA)对HIV抗体、HBsAg、丙型肝炎抗体、梅毒螺旋体抗体进行检测.[结果] 该方法可在15min内检测出上述病原体和标志物,大大提高了检测速度,可满足部分出入境人员快速通关放行的要求,但在使用时还必须注意9个方面的问题.[结论] GICA快速检测方法仅供出入境传染病监测体检初筛检测使用,终的确诊应由检疫医师综合各检测指标、临床症状及流行病学调查后作出.
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2种免疫层析技术用于4种传染病及其病原体检测的研究
[目的]寻求能够快速定性/定量检测4种传染病及其病原体的试验方法.[方法]应用双抗体夹心法,建立胶体金免疫层析法、上转磷光(UCP)免疫层析法检测炭疽杆菌芽孢(以下简称炭疽芽孢)、鼠疫杆菌、肠出血性大肠埃希菌O157∶H7(以下简称EHEC O157),评价方法的灵敏性、特异性.通过分别检测模拟掺入3种菌/芽孢的"白色粉末"和检测3种细菌的强毒株,评价在实际环境样品检测中的应用.应用双抗原夹心法,建立胶体金免疫层析法、上转磷光(UCP)免疫层析法检测鼠疫F1抗体、SARS病毒抗体,检测239份青海鼠疫疫区人员血清、1 236份新疆鼠疫疫源地鼠血清,检测18份恢复期SARS病人血清和9份健康对照者血清,以及206份出入境健康人员血清,考核2种检测抗体的方法在实际样品检测中的应用.通过比较炭疽杆菌、鼠疫杆菌、大肠埃希菌O157以及鼠疫杆菌抗体、SARS病毒抗体的胶体金免疫层析方法、UCP免疫层析方法,比较我们建立的2套系统与加拿大RAMP系统检测炭疽杆菌的能力.[结果]UCP免疫层析方法能在35min内完成检测,炭疽芽孢检测掺入"白色粉末"的样品灵敏性为1×104cfu/test,炭疽芽孢低检测限为1×105cfu/ml(原溶液芽孢浓度),多种不同的芽孢菌及其它细菌共38种54株检测说明该法特异性良好,仅与腊样芽孢杆菌有交叉反应,特异性为97%;鼠疫杆菌检测灵敏性为5×104cfu/ml,低检测菌数为5×103cfu/test,在107cfu/ml水平上未发现与30余种细菌有交叉反应,包括近缘假结核耶尔森菌;EHEC O157检测灵敏性为1×103cfu/ml,仅与弗氏枸橼酸杆菌有交叉反应,特异性为98%.胶体金免疫层析方法能在10min内完成检测,炭疽芽孢、鼠疫杆菌、EHEC O157检测灵敏度分别为1×106cfu/ml、1×105cfu/ml、1×105cfu/ml,"白色粉末"等环境样品低可检测敏感性为1×105cfu,1×104cfu,1×104cfu/test.胶体金免疫层析方法分别应用于炭疽、鼠疫强毒株的检测,检测限为5×104cfu/test和7×104cfu/test.在实际血清样品检测中,与间接血凝方法对比,鼠疫抗体UCP和胶体金免疫层析方法有更好的敏感性.血清样品检测显示,SARS抗体的胶体金和UCP免疫层析方法均有较好的特异性和敏感性.[结论]2种免疫层析方法都有快速、敏感、特异的特点:上转磷光免疫层析方法可实现定量检测,敏感性优于胶体金免疫层析法;炭疽检测与加拿大RAMP检测系统相当;胶体金免疫层析法具有简便、直观、易行的特点.2种免疫层析方法均适合于炭疽芽孢芽孢、鼠疫杆菌、EHEC O157、鼠疫杆菌抗体、SARS抗体的现场检测和筛查.
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胶体金免疫层析法快速检测盐酸克伦特罗残留
[目的]建立用于快速检测组织样品中盐酸克伦特罗残留含量的胶体金免疫层析检测方法.[方法]采用免疫竞争法,将抗盐酸克伦特罗-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的盐酸克伦特罗抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),其与待测样品中盐酸克伦特罗竞争结合胶体金标记的盐酸克伦特罗单克隆抗体,并能以颜色直观显示检测结果.[结果]检测猪肉等组织试样时,灵敏度低值可达到0.5ng/ml,只需3-5min,与沙丁胺醇、莱克多巴胺的交叉反应率为0.86%.[结论]用木法检测盐酸克伦特罗,灵敏度高、特异性强、稳定性好,具有良好的应用前景.
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胶体金免疫层析法检测水产品中O1群霍乱弧菌方法的建立与优化
[目的] 研究了O1群霍乱弧菌免疫层析试纸的制备方法,通过对试纸材料的处理达到优化胶体金免疫层析体系的目的.[方法] 建立了快速检测食品中O1群霍乱弧菌的胶体金免疫层析方法,并应用该方法对弧菌属、假单胞菌属及其他常见肠道致病菌,共29株进行检测,同时对180份水产品进行了样品添加试验,并用<出口食品中霍乱弧菌检验方法))(SN/T1022-2001)进行确证,全面评估了该方法的灵敏度、特异性、准确性等.[结果] 该方法检测食品中O1群霍乱弧菌的灵敏度为105cfu/ml,与食品中常见的致病菌无交叉反应.该方法检测水产品中O1群霍乱弧菌的假阳性率为6.25%.[结论] 该方法操作简便,灵敏度高,特异性强,准确性高,适用于食品的快速检测.
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胶体金试纸条实验中pH值与氯化钠浓度对霍乱弧菌生长的影响
[目的]了解适合胶体金试纸条检测的霍乱弧菌生长的条件.[方法]对霍乱弧菌在不同pH值及不同氯化钠(NaCl)含量增菌液中增菌后的胶体金试纸条检测情况进行实验.[结果]碱性蛋白胨水与缓冲碱性蛋白胨水的检测结果一致,pH8.5增菌液与pH9.0增菌液的检测结果一致;质量分数为0.5%的NaCl各种增菌液均为阳性;质量分数为3.0%的NaCl各种增菌液均为阴性;质量分数为2.0%的NaCl加入"霍乱弧菌备用菌液"的增菌液为阳性,质量分数为2.0%的NaCl加入"霍乱弧菌备用菌液"及"杂菌备用菌液"的增菌液为阴性.[结论]增菌12h pH值的变化对霍乱弧菌生长无影响;霍乱弧菌在pH8.5与pH9.0中增菌后检测结果一致;质量分数为0.5%的NaCl增菌液较适合霍乱弧菌生长,杂菌对霍乱弧菌生长有抑制作用.
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利用胶体金免疫层析技术快速定量检测单增李斯特菌方法的建立
[目的]建立胶体金免疫层析技术快速定量检测单增李斯特菌方法.[方法]利用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析技术,建立单增李斯特菌的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并拟合标准曲线进行定量检测;在牛奶、橙汁、果冻等即食食品样品中添加单增李斯特菌模拟污染样品,评价该方法对半固体、液体等即食食品、可疑生物恐怖样品的检测能力.[结果]该法可在10min内完成定性和半定量检测,定量检测灵敏度为3.5×103cfu/ml,线性范围3.5×105～3.5×108cfu/ml,回收率在99%~101.7%之间.[结论]建立的检测单增李斯特菌的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地对样品中的单增李斯特菌进行定性、定量检测.
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胶体金免疫层析法快速检测氯霉素残留
为建立用于快速检测样品中氯霉素残留含量的胶体金免疫层析试纸条,采用免疫竞争法,将抗氯霉素单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的氯霉素抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),其与待测样品中氯霉素竞争结合胶体金标记的氯霉素单克隆抗体,并能以颜色直观显示检测的定性结果.检测虾肉等组织试样时,灵敏度低值可达到1 ng/ml,只需5～10 min,与类似物无交叉反应.试纸条具有较高的灵敏度及特异性,操作便捷,稳定可靠,可作为氯霉素残留现场监控的有效筛检手段.
